虎杖PcPKS1基因RNAi载体的构建

虎杖(Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.)是富含芳香族聚酮化合物的药用植物,Ⅲ型聚酮合酶(Polyketide synthase,PKS)对芳香族聚酮化合物的合成起重要作用。为了研究虎杖Ⅲ型聚酮合酶基因Pc PKS1的功能,分别选取Pc PKS1基因的编码区保守序列(574 bp)和3′端非编码区特异序列(209 bp)作为干扰片段。将选定的干扰片段,分别以正向和反向插入到p YLRNAi载体中GUS基因内含子的两侧,以形成hp RNA表达盒,成功构建了以组成型Ca MV35S为启动子,以潮霉素抗性为筛选标记的RNA干扰表达载体p YLRNAi-CDS和p YLRNAi-UTR,并将载体导入农杆菌LBA4404中。     

高速逆流色谱纯化白藜芦醇的研究

利用高速逆流色谱分离纯化虎杖中的白藜芦醇.实验结果表明,选择溶剂体系为,氯仿：甲醇：水=4：3：2,均为转速850 r/min,流速2 mL/min,紫外检测波长280 nm.所得产品经高效液相色谱测定,白藜芦醇得率为0.186%,纯度大于96%.     

酶法提取虎杖中白藜芦醇的工艺优化

[目的]对酶法提取虎杖中白藜芦醇的工艺条件进行优化。[方法]采用单因素试验与正交试验相结合的方法,确定用酶法从虎杖中提取白藜芦醇的最佳工艺条件。[结果]从虎杖中提取白藜芦醇的最佳工艺为:料水比1∶15(V/V),漆酶含量0.30%,纤维素酶含量0.50%,木聚糖酶含量0.40%,β-葡聚糖酶含量0.20%,pH 4.4,在此条件下白藜芦醇的得率达0.592%。[结论]该研究为白藜芦醇的开发及综合利用提供了研究基础。     

2种彝药对CCl4诱导小鼠肝脏损伤的影响

为探讨天胡荽(MT)和虎杖(JC)对四氯化碳诱导小鼠肝损伤的影响,分别以2种彝药的不同浓度对模型小鼠连续7 d灌胃给药,7 d后通过酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测小鼠血清中总胆红素(TBIL)、丙二醛(MDA)含量和肝匀浆中的超氧化物歧化酶(SOD)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、谷草氨酸转氨酶(AST)活性。结果表明,MT和JC均能不同程度地下调各项指标,JC效果总体优于MT。与模型组比,JC各浓度均可显著下调TBIL和MDA含量,且均以低浓度效果最好,使TBIL下降了30.73%(P0.05),MDA下降了22.42%(P0.05),JC低浓度组对TBIL的下调作用优于联苯双酯(P0.05);联苯双酯与不同浓度的2种彝药均能显著降低ALT和AST水平,其中JC高浓度组的效果最好,使ALT比模型组和阳性组分别降低了32.37%(P0.05)和14.55%(P0.05),使AST比模型组和阳性组分别降低了26.95%(P0.05)和8.31%(P0.05)。JC具有显著的保肝效果,可为临床应用提供依据。     

虎杖ISSR-PCR反应体系的建立与优化

采用SDS法和CTAB法提取虎杖的DNA,并比较两种方法的效果,通过单因子试验优化影响虎杖ISSR-PCR的主要参数.结果表明,CTAB法提取的虎杖总DNA质量优于SDS法.虎杖ISSR-PCR的最佳反应体系总体积为25 μL,1×PCR reaction buffer[10 mmol Tris-HCl(pH8.3),50 mmol KCl],40 ng模板DNA,0.25 mmol·L-1 dNTPs,2U Taq DNA聚合酶,2.0 mmol·L-1 MgCl2,1.0 μmol·L-1引物.该反应体系适用于应用ISSR标记开展虎杖DNA指纹、遗传多样性等研究.     

虎杖对α-葡萄糖苷酶的抑制作用

[目的]筛选虎杖（Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.）α-葡萄糖苷酶抑制活性物质。[方法]对中药虎杖的α-葡萄糖苷酶抑制活性进行测定,并对其活性物质进行了初步分离。[结果]虎杖水提物浓度为50 mg（生药）/ml时,对α-葡萄糖苷酶活性的抑制率达68.5%,IC50约为37 mg/ml。虎杖水提物是α-葡萄糖苷酶的非竞争性抑制剂,抑制常数Ki为33 mg/L。采用层析分离得到了虎杖α-葡萄糖苷酶抑制剂,初步鉴定为多糖物质。[结论]该研究为植物源α-葡萄糖苷酶抑制剂的开发奠定了基础,对发现高效、安全的降低餐后血糖新药物具有重要作用。     

响应面优化虎杖固态发酵工艺条件的研究

应用产β-葡萄糖苷酶的黑曲霉固态发酵酶解虎杖中的虎杖苷,以提高虎杖中白藜芦醇的含量。采用均匀实验设计和响应面分析方法对影响虎杖中白藜芦醇含量的固态堆积发酵工艺条件(温度、湿度、菌龄和接种量)进行优化。结果表明:最佳的固态发酵工艺条件为:温度42℃,湿度1.85∶1、菌龄42h、接种量1.8%,在此条件下,发酵48h后,白藜芦醇含量提高为1.52%,是未进行固态发酵虎杖中白藜芦醇含量的4.47倍。优化固态发酵工艺条件能较大程度的提高从虎杖中获取白藜芦醇的得率。     

虎杖(Polygonum cuspidatum)茎尖愈伤组织诱导及高频植株再生

    以虎杖(Polygonum cuspidatum)茎尖为外植体进行离体再生研究,探讨苗龄、接种方式、不同植物生长调节剂、硝酸银和蔗糖等对虎杖茎尖愈伤组织诱导、不定芽分化和生根的影响.结果表明:愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+蔗糖28 g·L-1+琼脂5.5g·L-1+2,4-D 1.5 mg·L-1+6-BA 1.0 mg·L-1,诱导率为100%;3～7 d苗龄的虎杖茎尖愈伤组织诱导能力无显著差异,诱导率均达到95%以上,此后随着苗龄的增加,愈伤组织诱导能力快速下降,苗龄为12 d时愈伤组织诱导率只有55.6%;以正插(形态学下端插入培养基)方式接种的外植体愈伤组织诱导率显著大于反插(形态学上端插入培养基)和平放;不定芽分化最佳培养基为MS+AgNO3 4.0 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂6.0 g·L-1+NAA 0.5 mg·L-1+TDZ0.8 mg·L-1,分化率为83.9%,增殖系数为7.63;生根培养基选用1/2 MS+蔗糖26 g·L-1+琼脂6.5 g·L-1+活性碳3%+IBA 0.2 mg·L-1+NAA 0.3 mg·L-1,生根率为89.6%.用聚氟乙烯(PVF)透气膜封口比用聚乙烯(POLY)菌膜生根率明显提高(达到100%),生根明显提前.     

天然活性物质虎杖苷对过氧化氢诱导的星形胶质细胞增殖及凋亡的影响

虎杖苷(PD)是中药虎杖的主要活性成分,具有抗氧化、抗炎和抗肿瘤等功效。有报道称,PD可通过激活核转录因子E2相关因子2/血红素加氧酶-1信号通路抑制过氧化氢(H₂O₂)诱导的心肌细胞凋亡。然而,虎杖苷对星形胶质细胞凋亡的影响和机制还未知。本研究中,我们将不同剂量(25, 50, 100 ng/m L)的PD作用于H₂O₂诱导的星形胶质细胞,采用流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡,CCK-8法检测细胞增殖,蛋白质印迹法检测细胞中caspase3蛋白表达,实时定量聚合酶链式反应技术(RT-qPCR)检测了miR-301a-3p表达。同时,转染miR-301a-3p抑制剂至星形胶质细胞,观察下调miR-301a-3p对H₂O₂诱导的星形胶质细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡的影响。结果显示,PD可促进H₂O₂诱导的星形胶质细胞增殖及细胞周期进程且呈剂量依赖性,而抑制细胞凋亡。此外,PD可促进H₂O     

虎杖规范化种植操作规程

该规程明确规定了宁化虎杖产地环境、种子和种根标准、育苗技术、栽培技术措施、病虫害防治、采收加工、虎杖根干品的农药、重金属残留标准、有效成分含量标准以及包装、贮运方法等.以便科学种植虎杖,指导福建虎杖人工规模化种植.