一株鸽源绿铜绿假单胞菌的分离与鉴定

2013年9月,镇江世业洲某鸽场鸽群暴发不明疫情,死亡率达到10%。对送检病死鸽进行剖检,有气囊炎、肝脏呈古铜色、肾肿大而苍黄等症状。无菌采取肝脏,脾脏进行病毒分离,未分离到病毒。无菌采取肝脏,成功分离到1株细菌,经分离培养、染色镜检、生化试验以及PCR分析,确诊为铜绿假单胞菌感染。对分离菌进行药敏试验,结果显示所分离的铜绿假单胞菌对强力霉素、多粘菌素等耐药,对氟哌酸敏感。     

三重TaqMan实时定量RT—PCR检测鉴别野生型猪瘟病毒、猪瘟兔化疫苗毒株、牛病毒性腹泻病毒

在这项研究中,在GenBank提供瘟病毒属基因组序列,设计三对引物和TaqMan探针：猪瘟病毒（CSFV）基因组的NS5A两个目标区域可以区分野生型猪瘟病毒和猪瘟兔化疫苗（HCLV）,     

猪瘟病毒C株检测用国家核酸标准物质的研制

为研制均匀、稳定的猪瘟病毒（CSFV）核酸标准物质,选择CSFV C株接种于PK-15细胞并收获病毒液,然后经过病毒灭活、分装、冻干,最终形成核酸标准物质。用微滴式数字PCR对制备的CSFV标准物质进行均匀性和稳定性评估、标准物质合作定值,在评定不确定度后计算得出最终量值结果,并开展临床试用。结果显示,该标准物质均匀,4 ℃条件下可稳定存放4周,25 ℃可稳定存放1周,-20 ℃可稳定存放11个月,量值结果为（5.1±0.7）×105 copies/mg;临床试用显示,所制备的标准物质与临床样本的互通性良好。本研究制备的CSFV C株国家核酸标准物质均一性良好、稳定、量值准确度高,并通过了全国标准物质管理委员会评定,可用于动物及动物产品质量安全检测,从而有效保障猪瘟防治工作的开展。     

IP-10作为牛结核病诊断标志物的初步探究

为评价细胞因子IL-12 p40、IP-10和TNF-α转录水平与牛分枝杆菌感染之间的关系,及其在牛结核病诊断中的应用潜力。采集田间筛选的结核病阳性牛、结核病阴性牛以及牛分枝杆菌68002人工感染牛的外周血淋巴细胞,经牛结核菌素(PPDB)、重组蛋白CFP-10-ESAT-6(CE)、MPT63、PET和PBS分别刺激6 h,提取细胞总RNA,用荧光定量PCR检测IL-12 p40、IP-10、IFN-γ和TNF-α的转录水平。结果显示结核病阳性牛的外周血淋巴细胞经PPDB和CE刺激后,其IP-10的m RNA转录水平显著高于结核病阴性牛,且与IFN-γ的m RNA转录水平具有良好的相关性;初步建立牛结核病IFN-γ和IP-10的Real-time PCR检测方法,其对临床阳性样本的检出率分别为71.45%和78.57%。因此,IP-10的m RNA转录水平与牛分枝杆菌的感染相关,有作为牛结核病诊断标志物的潜力。     

猪捷申病毒与猪圆环病毒2型双重PCR检测方法的建立及初步应用

为建立可同时检测猪捷申病毒（PTV）与猪圆环病毒2型（PCV2）的双重PCR方法,本研究根据GenBank登录的相关病毒基因序列,选择保守区域设计引物,经过反应条件的优化,建立了可同时检测以上2种病毒的PCR诊断方法,扩增片段长度分别为187bp（PTV）、120bp（PCV2）。通过实验证明该方法具有良好的特异性和较高的敏感性,对PTV、PCV2核酸检测最低浓度分别为2．8×10^-2ng和6．6×10^-3ng。应用该方法对43份临床样品进行检测发现,PTV阳性率为23％,PCV2阳性率为38％,PTV与PCV2共感染率为16％。该方法的成功建立,为快速高效地检测以上2种病毒提供有力手段。     

农杆菌介导香菇URA3基因RNAi体系构建

选择香菇(Lentinula edodes)内源乳清酸核苷-5'-单磷酸脱羧酶基因(URA3)为沉默靶基因,以其功能结构保守区域451～884 bp处的反向互补序列为干扰片段,将pCAMBIA1390改造为发卡结构载体HpV、GPiE改造为双启动子载体DpV-2.采用农杆菌介导转化法侵染小米粒培养基培养的香菇菌丝,通过...     

猪CACNA1S基因的多态性与胴体及肉质性状的相关分析

以金华猪（40头）、皮特兰猪（30头）及其杂交产生的金皮F2代资源猪群（126头）为材料,对钙离子通道主亚基α1的编码基因（CACNA1S）第44外显子A187G突变、第37内含子A37G突变、T179C突变作PCR—RFLP检测（内切酶依次为Cfr42Ⅰ、XbaⅠ、Eco72Ⅰ）,分析其对胴体及肉质性状的遗传效应。结果表明：酶切位点Eeo72J的AA基因型对眼肌面积和肉色（L）存在极显著影响（P〈0．01）,BB基因型对后腿肌肉重存在极显著影响（P〈0．01）和大腿pH存在显著影响（0．01〈P〈0．05）;位点Xba Ⅰ对背膘厚（中）存在显著影响（0．01〈P〈0．05）,但AA、AB、BB基因型间效应差异不显著（P〉0．05）;位点Cfr 42Ⅰ仅在金华、皮特兰纯种猪群中存在多态性,而在屠宰猪群金皮F2代则表现为BB单态型。     

实时荧光定量PCR技术检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的研究进展

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染引起的一种高度接触性传染病,尤其是对母猪,该病毒严重影响其繁殖性能。实时荧光定量PCR以其快速、可靠的诊断技术,为检测和诊断PRRSV开辟了新方法。文内对国内外实时荧光定量PCR技术在PRRSV研究中的应用作了综述。     

大肠杆菌β-内酰胺酶耐药基因blaTEM,blaSHV,blaCTX-M三重PCR检测方法建立

本研究以我国大肠杆菌中常见的3种β-内酰胺酶耐药基因(bla,TEM blasHV和blaCTX-M)作为目的基因,设计3对特异性引物,建立了blaTEM,bla SHV和blaCTX-M耐药基因三重PCR检测方法.三重PCR反应体系为:10×PCR缓冲液2.5 μL,MgCl2(25 mmol/L) 2.5 μL,dNTP (2.5 mmol/L)4 μL,blaTEM,blasHV和blaCTX-M上下游引物(25 μmol/L)分别为0.25 μL、0.5 μL、1.0μL,Taq DNA聚合酶(2.5 U/μL)0.4μL,模板2.5μL,反应总体积为25 μL.反应参数为:94℃5 min,94℃50 s,55℃55 s,72℃1 min,32个循环,72℃延伸5 min.本方法的建立为大肠杆菌中β-内酰胺酶耐药基因的快速检测及分子流行病学调查提供了新的手段.