硫酸锌胁迫对克氏原螯虾非特异性免疫因子的影响

将克氏原螯虾(Procambarus clarkii)于浓度为0 mg/L(对照组)、0.40 mg/L、4.04 mg/L及40.37 mg/L硫酸锌(ZnSO4)中分别药浴1 d、2 d、3 d、4 d、7 d、14 d和21 d,测定了肝胰腺和鳃中4种以及血清中6种非特异性免疫因子活性,从免疫学角度探讨ZnSO4对克氏原螯虾的毒性影响.结果显示:21 d内各浓度组在各时间对血清中凝集素活性均无显著影响.血清中溶血素各浓度组活性均表现出随药浴时间延长先逐渐升高再下降的趋势.酚氧化酶(PO)在肝胰腺中各浓度组不同时间之间及相同时间不同浓度组之间的活性差异均不显著,而鳃中在4.04 mg/L以上浓度中药浴2 d内活性显著下降,随药浴时间加长鳃和血清中活性呈增大的趋势.在肝胰腺中4.04 mg/L和40.37 mg/L浓度组药浴1 d、2 d、14 d和21 d的过氧化氢酶(CAT)活性高于或显著高于对照组,药浴3～7 d时低于或显著低于对照组,呈先上升再下降再上升的趋势变化;鳃中始终低于对照组;血清中1～7 d CAT活性均低于对照组,药浴14 d以后显著高于对照组,呈前期抑制后期升高的趋势.酸性磷酸酶(ACP)在4.04 mg/L和40.37 mg/L浓度组中药浴21 d内除40.37 mg/L组药浴3 d时肝胰腺中ACP活性显著高于对照组外,其他时间肝胰腺和鳃中ACP活性主要呈抑制状态,血清中4.04 mg/L组呈先逐渐升高再下降的趋势,而40.37 mg/L组均低于对照组.溶菌酶(LSZ)在4.04 mg/L和40.37 ng/L浓度组中药浴21 d内肝胰腺中活性主要呈前期抑制后期升高的趋势;鳃中4.04 mg/L组LSZ活性先下降再逐渐升高再下降,而40.37 mg/L组活性先升高后下降;血清中各浓度组LSZ活性均高于对照组.结果表明:0.40 mg/L组仅在药浴3 d和4 d时使血清溶血素活性显著升高,而其他时间对其他免疫因子活性均无显著影响;4.04 mg/L以上浓度除对血清凝集素无显著影响外,其他免疫因子活性均发生了显著变化,并且变化规律存在一定的组织差异.     

乳酸菌微生态制剂对肉鸡生产性能及免疫机能的影响

本实验利用乳酸菌微生态制剂饲喂AA肉鸡,通过检测鸡增重、料重比、免疫器官指数、抗体效价以及盲肠内容物的乳酸菌和大肠杆菌数量,探索乳酸菌微生态制剂对肉鸡生产性能及免疫功能的影响。首先将150只肉鸡随机分成3组,第1组在饮水中添加0.3%的乳酸菌微生态制剂,第2组添加抗生素饮水,第3组为空白对照组,7日龄时接种新城疫疫苗;于每周末称取各组鸡的体重、耗料,计算增重和耗料量;在21日龄和35日龄时,采取各组鸡的脾脏、法氏囊和胸腺、分别计算免疫器官指数;用HI和微量平板滴种法分别检测抗体效价和盲肠内容物乳酸菌、大肠杆菌数量。结果显示,添加0.3%乳酸菌微生态制剂组与对照组和抗生素组鸡比较,分别提高鸡体重15.55%和8.57%(差异显著P<0.05),料重比分别降低5.11%和4.57%;于21日龄和35日龄时检测发现,添加0.3%乳酸菌微生态制剂组与对照组鸡比较,脾脏、法氏囊和胸腺指数分别提高了44.26%1、3.51%、33.96%和67.14%、16.47%3、8.16%;抗体水平分别升高了1.8log2和2 log2,差异显著(P<0.05),与抗生素组比较,抗体效价分别提高了1.4log2和1.75log2,差异显著(P<0.05);另外,21日龄和35日龄时,与对照组比较,添加0.3%乳酸菌微生态制剂鸡盲肠内容物中乳酸菌数量分别增加1.28log2和0.27log2,差异显著(P<0.05),同时分别使大肠杆菌数量减少1.88log2和0.84log2,差异显著(P<0.05)。本研究为合理开发利用乳酸菌微生态制剂提供了理论依据和技术支持。     

原核表达c-myc蛋白的多克隆抗体制备

探讨利用小鼠制备抗人c—myc蛋白多克隆抗体的方法。利用含PET28a／c—myc质粒的EcoliBL21,对c—myc蛋白进行原核表达,并进行纯化。WesternBlot结果只出现一条62KDa大小的特异性目的蛋白条带。用原核表达的c—myc蛋白抗原免疫5只Balb／c小鼠,最终免疫后的第7d采血,并对其血清效价进行ELISA（Enzyme—linked immunosorbnent assay）测定,抗血清达1：640000。本实验结果为c—myc单克隆抗体制备和肿瘤诊断试剂盒的研发提供基础实验数据。     

艾佐迈对草鱼生长、肠道消化酶活性和血清非特异性免疫的影响

在基础饲料中分别添加0%、0.2%、0.3%和0.4%艾佐迈(azomite),饲养平均体质量为(64.20±1.68)g的草鱼(Ctenopharyngodon idella)8周,研究其对草鱼生长性能、肠道消化酶活性和血清非特异性免疫的影响.结果表明:饲料中添加艾佐迈可在不同程度上改善草鱼生长性能,其中添加0.2%艾佐迈使增质量率提高16.65%(P=0.08),饲料系数降低12.90%(P＜0.05);添加0.2%和0.4%艾佐迈可显著提高草鱼的肥满度(P＜0.05);艾佐迈对草鱼肌肉水分、灰分、粗脂肪和粗蛋白含量均无影响(P＞0.05);添加0.2%～0.4%艾佐迈可在不同程度上提高草鱼前肠蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性及血清超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)活性.其中0.2%艾佐迈添加组可显著提高血清SOD活性(P＜0.05);饲料中添加0.2%、0.3%艾佐迈时草鱼肝胰脏谷草转氨酶(glutamic-oxalaceric transaminase,GOT)和谷丙转氨酶(glutamic-pyruvic transaminase,GPT)活性无影响(P＞0.05),但添加0.4%艾佐迈组显著降低了肝胰脏GOT、GPT活性.上述结果表明:饲料中添加艾佐迈可提高草鱼的生长性能和血清非特异性免疫力;草鱼饲料中艾佐迈添加量建议为0.2%.     

头功铁药散对A型魏氏梭菌α毒素的mRNA表达及损伤小鼠免疫功能的影响

探讨自拟处方头功铁药散对A型魏氏梭菌α-毒素损伤小鼠免疫功能的影响,并检测了α毒素mRNA表达的情况.检测小鼠部分免疫功能;荧光定量RT-PCR法检测α毒素基因mRNA表达的变化.结果显示,与模型组相比,头功铁药散能拮抗α-毒素对小鼠的损伤,极显著提高小鼠免疫器官指数及巨噬细胞的吞噬能力(p0.01);与细菌模型组相比,头功铁药散能极显著降低α毒素基因表达(p0.01).推测头功铁药散可通过提高小鼠免疫功能,并下调α毒素基因表达,从而减少α-毒素对小鼠的损伤.     

酿酒酵母中磷脂合成相关基因突变对细胞自噬和液泡形态的影响

[目的]探讨酿酒酵母中磷脂合成相关基因突变对细胞自噬和液泡形态的影响.[方法]通过尼罗红染色观察酵母中磷脂合成相关基因突变后脂滴的形态;用绿色荧光蛋白(GFP)标记细胞自噬蛋白Atg8后,采用荧光显微镜和免疫印迹试验检测突变体细胞自噬的发生情况,并使用荧光染料FM4-64检测液泡形态;此外,检测相关突变体对吩嗪-1-羧酸(申嗪霉素)的敏感性.[结果]在营养有限条件下,酿酒酵母中磷脂合成相关基因突变体中脂滴的大小或数量受到不同程度的影响,但细胞自噬在常规检测条件下正常;其中磷脂酸胞苷转移酶编码基因CDS1突变导致液泡形态异常(碎片化),而其他磷脂合成相关基因突变不影响液泡形态;回补CDS1后,cds1-DAmP突变体中液泡形态恢复正常;此外,cds 1-DAmP突变体对吩嗪-1-羧酸处理更为敏感.[结论]酿酒酵母中脂滴和液泡形态异常不一定影响细胞自噬的正常进行,但可能影响其对外界环境的响应.     

虫草菌粉对雏鸡免疫功能的影响

为探讨虫草菌粉对雏鸡免疫功能的影响,以240羽健康余干乌鸡作为研究对象,鸡新城疫苗常规免疫,在饲粮中添加不同剂量虫草菌粉,同时设空白对照组。各组在饲喂虫草菌粉第10、20、30天时随机选择20羽,先采血检测免疫细胞活性、新城疫(NDV)抗体滴度;再处死称取法氏囊与脾脏的质量。通过研究法氏囊与脾脏质量变化、E-玫瑰花环率、淋巴细胞转化率、新城疫抗体滴度等指标来了解虫草菌粉对雏鸡免疫功能的影响。结果表明:虫草菌粉能够加快雏鸡免疫器官的发育,提高T淋巴细胞活性;在饲喂虫草菌粉20 d时中剂量组比对照组抗体水平提高1∶22.1,高剂量组比对照组提高1∶22.53,使特异性抗体提前达到高水平。说明虫草菌粉能够增强雏鸡免疫功能。     

复方桑黄口服液粗多糖对小鼠免疫功能的影响

研究复方桑黄口服液粗多糖对小鼠免疫功能的影响。从小鼠碳廓清实验、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验（半体内法）、脏器与体重比值、小鼠自然杀伤（ NK）细胞活性测定（乳酸脱氢酶测定法）等四个方面进行研究。结果表明：复方桑黄口服液的高剂量组（40 ml/kg）能明显增强小鼠碳廓清能力,中（20 ml/kg）、高剂量组能明显增强小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬百分率和吞噬指数,低（10 ml/kg）、中、高剂量组能明显增强小鼠 NK细胞活力功能。这表明复方桑黄口服液具有增强单核-巨噬细胞功能、增强 NK细胞活力功能,复方桑黄口服液具有增强免疫功能的作用,可显著提高机体特异性和非特异性免疫功能。     

禽多杀性巴氏杆菌C48-1株OmpA基因表达与抗原性鉴定

为了研究禽多杀性巴氏杆菌(Pm)外膜蛋白A(Omp A)的免疫原性,根据C48-1菌株Omp A基因序列设计一对特异性引物,采用PCR方法扩增去信号肽的成熟Omp A基因.将去信号肽的成熟Omp A基因扩增片段双酶切后,克隆到p GEX-6p-1表达载体中,构建重组表达质粒p GEX-Omp A,转化宿主菌BL21并经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达.SDS-PAGE的结果显示,融合蛋白GST-Omp A大小约为63 ku,与预期的分子质量相符.免疫印迹分析结果表明,该融合蛋白与鸡抗Pm血清具有明显的免疫反应,说明Omp A具有良好的抗原性,这为禽Pm Omp A在免疫防御研究中的应用奠定了基础.     

早期流产大鼠子宫中IL-18和NF-κB及iNOS的表达

[目的]检测了早期流产、正常妊娠和非妊娠大鼠子宫中白细胞介素-18(Interleukin-18,IL-18)、核转录因子(Nuclear factor-kappa B,NF-κB)及诱导型一氧化氮合酶(Inducible nitric oxide synthase,iNOS)的分布与表达,探讨IL-18、iNOS和NF-κB的表达与流产的关系.[方法]采用阴道涂片法将经过自然交配的大鼠分为流产组、正常妊娠组和非妊娠组3组,每组10只.流产组大鼠于妊娠第7天和第8天分别灌服米非司酮4 mg/(kg·d).各实验组大鼠均于交配后第9天处死,取子宫,切片,免疫组织化学SP法染色后进行图像分析.[结果]IL-18、NF-κB和iNOS在正常妊娠组、非妊娠组和流产组大鼠子宫腔上皮细胞、腺上皮细胞、子宫基质细胞或蜕膜细胞、子宫肌层平滑肌细胞及部分血管内皮细胞中均有表达.与正常妊娠组相比,流产组大鼠子宫中IL-18和iNOS的表达极显著减弱(P<0.01),NF-κB表达极显著增强(P<0.01),血管内皮细胞和平滑肌细胞中IL-18、NF-κB和iNOS的表达均极显著增加(P<0.01).[结论]IL-18、NF-KB和iNOS的异常表达可能与流产有关.