猪骨桥蛋白基因的组织差异表达

为了研究猪骨桥蛋白基因(Osteopontin,OPN)组织特异性的表达规律,采用实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,qRT-PCR)分析方法,以β-actin基因为内参,对猪OPN基因在心、肝、脾、肺、肾、大脑、小脑、垂体、下丘脑和子宫内膜等10种组织中的mRNA表达水平进行了检测.结果表明,OPN基因在子宫内膜的表达量为最高,其次是在小脑,在心、肝、脾和肺也有不同程度的表达,而在肾、下丘脑和垂体的表达量很少,从而提示OPN基因在子宫内膜中可发挥重要作用.     

电化学发光法与时间分辨荧光免疫法检测AFP的临床应用

目的:分析电化学发光法(ECLIA)与时间分辨荧光免疫法(TRFIA)检测AFP的临床应用。方法:釆用ECLIA和TRFIA两种方法同时检测5组血清甲胎蛋白(AFP)含量,其中肝癌120例,胃癌48例,乳腺癌32例,卵巢癌45例;健康人群50例。观察两者的准确率、稳定性、线性范围与相关性回归分析。结果:肝癌组AFP值(ECLIA法:520.36±354.26ng/mL;TRFIA法:558.48±360.27ng/mL),胃癌组(ECLIA法:15.38±2.34ng/mL;TRFIA法:18.63±1.42ng/mL),乳腺癌组(ECLIA法:10.35±3.51ng/mL;TRFIA法:18.63±1.42ng/mL),卵巢癌组(TRFIA法:11.81±4.36ng/mL;ECLIA法:13.53±2.96ng/mL)。正常组(ECLIA法:6.32±5.14ng/mL;TRFIA法:6.51±5.42ng/mL),两种方法检测结果无显著差异(P0.05),其相关系数为0.992,呈正相关。ECLIA法与TRFIA法批内批间变异系数分别低于2.9%和5.7%,前者优于后者。结论:TRFIA法和ECLIA法检测AFP具有较好的准确率、稳定性及相关性,可应用于临床血清AFP的检测。     

PCR及其改进技术在食品微生物检测中的应用

简述了PCR及其几种改进技术,并对其在食品微生物检测中的应用进行综述。     

硅对严重干旱胁迫下黄瓜幼苗叶绿素荧光参数的影响

研究了硅对严重干旱胁迫下黄瓜幼苗叶绿素荧光参数的影响。结果表明:黄瓜幼苗在严重干旱胁迫6 d后,Fo升高,Fm,Fv,Fv/Fm,Fv/Fo及NPQ均下降,施硅使各荧光参数均呈现相反的变化趋势。说明土壤施硅可缓解严重干旱胁迫对黄瓜幼苗光合机构的损伤与破坏,提高抗旱性能。     

用电激转化法构建杀虫防病荧光假单胞菌

以广寄主范围质粒ＰＵＣＰ１８和ＰＵＣＰ１９为载体，用电激转化法，将苏云金杆菌杀虫蛋白基因ＣｒｙｌＡ（ｃ）片段导入了荧光假单胞菌Ｐ３０３菌株。Ｓｏｕｔｈｅｍ印迹分析和Ｗｅｓｔｅｍ印迹分析分别证实ＣｒｙｌＡ（ｃ）基因的导入和晶体蛋白在Ｐ３０３中的表达。     

广西南宁甘蔗赤条病调查及分子检测

2020年在广西南宁市金光农场发现'桂糖58'和'柳城05-136'疑似感染甘蔗赤条病,为明确其病原,本研究对不同甘蔗品种进行了发病率调查,并采集病样进行了PCR检测分析.田间调查结果表明:不同品种自然发病率不同,'桂糖58'发病率为29％～52.33％,发病严重田块平均发病率为49.67％,发病中等田块平均发病率为3...     

拟南芥Ran2小GTP结合蛋白抗血清的制备及其FITC荧光标记

将原核表达、纯化的Ran2蛋白对新西兰兔进行免疫制备抗血清,ELISA测定其效价为1∶51 200。免疫印迹分析表明,原核表达、纯化的Ran2和拟南芥可溶性蛋白杂交带均在26 ku处。FITC荧光标记抗体检测Ran2绿色杂交带主要出现在细胞分裂间期的核膜上。     

生物芯片、核酸序列依赖性扩增法及荧光定量PCR在检测方面的研究进展

最近几年才兴起的生物芯片、核酸序列依赖性扩增法(NASBA)及荧光定量PCR技术同传统的实验方法相比有灵敏性高,特异性强,快速,高通量等优点,而倍受中外学者的青睐。但仍有好多初学者对这方法的知识了解甚少,本文就生物芯片、核酸序列依赖性扩增法及荧光定量PCR的定义、原理、检测中的应用和各自的优点做一简单的综述,以便相互之间的学习和进步。     

屠宰猪猪肺炎支原体P36、P46、P97 R1、P146氨基酸序列的差异分析

为了解猪肺炎支原体流行菌株遗传变异情况,选取2014-2017年不同时间、地点收集的17头猪肺炎支原体阳性屠宰猪肺脏灌洗液DNA为模板,进行猪肺炎支原体P36(编码具有强免疫原性的胞浆蛋白)、P46(编码具有强免疫原性的表面蛋白)、P97 R1区、P146高变区(猪肺炎支原体黏附气管纤毛细胞的重要功能区域)基因的PCR扩增、测序。结合GenBank登录的猪肺炎支原体相关序列进行氨基酸序列的比对分析。结果表明,比对的序列之间,P36、P46蛋白氨基酸序列同源性均在98.9%以上,但P97功能区R1区、P146多变区在菌株间存在较大差异。11个屠宰猪样本和5个GenBank登录菌株P97 R1区重复氨基酸序列数量达到14个以上,而GenBank登录的3个疫苗相关菌株(168株、168-L株、J株)及另外4个菌株、4个屠宰猪样本重复序列为9～11个不等;P146高变区氨基酸序列的差异主要集中在2个重复氨基酸序列区(R1、R2),GenBank登录的168株、168-L株、J株以及另外2个菌株,1个屠宰猪样本在R1区出现较多氨基酸缺失。168株、168-L株,6个屠宰猪样本及另外3个GenBank登录菌株在R2区出现了3～9个不等的氨基酸缺失。利用DNAStar进行抗原表位预测发现,菌株间P97 R1、P146 R1、P146 R2区氨基酸序列的差异,导致了抗原表位出现明显的变化。提示开展P97、P146等黏附因子的筛选和研究或许能进一步提升疫苗阻止猪肺炎支原体黏附气管纤毛细胞的作用,从而进一步改善疫苗的免疫效果。     

水稻膜联蛋白基因OsAnn8干旱和低温条件下表达模式以及CRISPR/Cas9定点编辑

为了阐明水稻膜联蛋白基因家族成员OsAnn8在干旱和低温胁迫条件下的功能作用机制,通过荧光定量PCR技术对不同干旱和低温处理下的水稻叶片中OsAnn8基因进行转录水平上的定量分析,结果表明,OsAnn8基因在干旱胁迫处理前后表达量呈现出高-低-高的变化趋势,而在冷胁迫处理前后表达量则呈现出低-高-低-低的变化。随后,利用CRISPR/Cas9基因编辑技术对OsAnn8基因进行定点编辑,并借助农杆菌介导将OsAnn8基因靶位点的CRISPR/Cas9基因编辑植物表达载体导入转基因受体品种TP309,经潮霉素筛选后共获得32株转基因阳性植株,靶位点扩增测序峰图分析表明其中的2个单株出现了重叠峰,进一步的T载体克隆分别测序表明,这2个单株为单等位基因敲除,说明本研究已经成功获得了OsAnn8基因靶位点敲除的单等位突变体,不同类型的水稻OsAnn8基因突变体的创建,为水稻膜联蛋白基因家族成员OsAnn8在非生物胁迫条件下的功能研究奠定了材料基础。