Duplex PCR 快速检测松材线虫

利用duplex PCR技术对松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)与拟松材线虫(B. mucronatus)的rDNA部分核苷酸序列扩增.根据松材线虫与拟松材线虫的ITS1序列区别,设计出特异性引物,检测松材线虫的存在;在5.8S,28S保守序列区设计通用引物,检测伞滑刃线虫的存在.     

火柴头染色体核型及核糖体基因原位杂交研究

火柴头是一年生单子叶恶性杂草，具有地上和地下茎同时开花结实的特殊习性。研究表明，地上和地下部分种子产生的植株体细胞染色体核型相同，中期染色体平均长10μ，体细胞染色体核型由两对随体染色体(染色体5和9)、4对中部着丝点(染色体1，3，8，11)和5对亚中部着丝点染色体组成(染色体2，4，6，7，10)，属对称型。核型公式为2n=22=4m 5sm 2st。核糖体基因(45S）位于两对随体染色体的核仁组织区，杂交信号在两对染色体上的程度不同，表明了该基因的拷贝数在位点间有差别，并明确证实地下种子是正常自花受精的结果。本文对利用核糖体基因作为分子标记，通过原位杂交进行植物染色体的识别和染色体的进化进行了讨论。     

两种一步法RNA提取试剂的比较

RNA的提取在生物医学研究和临床检测上应用广泛。本文分别用进口Invitrogen公司生产的以及我们自己研制的一步法RNA提取试剂，提取大肠杆菌RNA、鸡肌肉组织RNA和尿囊液RNA，通过核酸电泳和荧光定量RT-PCR进行比较。结果表明用我们自己研制的和进口的试剂提取的RNA都不含有DNA；这些RNA都可以作为模板进行RT-PCR检测，并且在数量上相互之间没有明显差异。说明我们自己研制的一步法RNA提取试剂可以取代进口试剂。此外，本文还讨论了此类试剂一些评定方法。     

新扬州鸡IGF-1基因多态性与早期生长速度关系的研究

以150只非同胞新扬州鸡为材料，采用PCR—RFLP法检测了该基因5’调控区DNA序列多态性，并运用线性模型统计方法分析了多态性与初生重和12周龄体重的关系。结果显示：新扬州鸡IGF-1基因5、调控区自然存在两种不同DNA序列，经。PstⅠ酶切后出现3种基因型(“-／-”、“-／ ”、“ ／ ”)，基因型分布符合哈代一温伯格定律。各基因型个体的初生重、12周龄体重的最小二乘均数存在“-／-”＞“ ／-”＞“ ／ ”的趋势，且“-／-”型个体的12周龄体重显著高于“ ／ ”型个体(P＜0．05)。     

通过自制PCR试剂盒确诊雏鹅细小病毒感染

通过 PCR条件选择 ,组装了可用于确诊鹅细小病毒 (goose parvovirus,GPV)感染的试剂盒。首先根据 Gen Bank中已发表的鹅细小病毒不同株的核苷酸序列 ,设计并合成了 GPV特异性简并引物 ,利用该引物确定 PCR扩增条件 ,并鉴定了扩增产物的特异性。根据上述扩增条件 ,组装 GPV诊断试剂盒。试剂盒共有 3个反应管 ,贮于 - 2 0℃ ,应用时取 1号管 ,加入煮沸的肝脏悬液上清 ,2、3号管分别为阴性和阳性对照。按固定条件扩增 ,结果显示 ,待检病料的检出率在 96 %以上。该试剂盒操作简单 ,效果稳定 ,可用于 GPV感染的确诊     

PCR和斑点杂交检测实验感染雏鸡体内鸡传染性贫血病毒的动态分布

鸡传染性贫血病毒(CIAV)自1979年日本学者Yuasa等首先分离以来，世界各地均有报道。该病原以致鸡再生障碍性贫血和淋巴组织萎缩为特征，从而导致免疫抑制，严重影响机体对疫苗的免疫反应，为危害养禽业的重要病原之一。     

家鸡染色体研究进展

近年来,由于现代分子细胞遗传学技术,尤其是荧光原位杂交(FISH)技术的出现,使家鸡的染色体研究又进入了一个新的高潮.作者从家鸡染色体核型研究简史、显带研究及其现代分子细胞遗传学研究3个方面对家鸡染色体研究进展作一概述,旨在对其有一较系统全面的了解,以促进其进一步研究,并为其它禽类的染色体研究提供参考.     

应用PCR检测成年鸭体内鸭瘟强毒的分布

鸭瘟病毒(DPV)强毒经人工接种和同居感染100日龄鸭后，应用聚合酶链反应(PCR)检测病毒在鸭体内各组织器官的动态分布。试验结果表明，DPV强毒经肌肉注射进入鸭体后6h可在肝、脾、血液和粪便中检测到DPV DNA；DPV强毒经肌肉注射到鸭体后各受检样品被检测到DPV DNA的先后顺序为：肝、脾、血液和直肠粪便(6h)→肺、脑和腿肌(12h)→肾和胸肌(24h)；同居鸭于混群后48h在肝、肺、血液和直肠粪便中检出DPV DNA；DPV强毒经同居感染鸭后各受检样品检测到DPV DNA的先后顺序为：肝、肺、血液和直肠粪便(48h)→脾和脑(72h)→胸肌和腿肌(96h)→肾(120h)。     

鸡毒霉形体TM-1基因原核表达载体的构建及表达

对从含有鸡毒霉形体H3株TM-1基因的大肠埃希氏菌DH5α中提取的质粒，进行EcoR Ⅰ和Sα／Ⅰ双酶切，获得了大约为786bp的目的片段。将此片段与经EcoRⅠ和Sαl Ⅰ双酶切的线性原核表达载体pET-30a-1连接。转化宿主菌BL21(DE3)，筛选阳性克隆。提取质粒，经酶切、PCR扩增和测序分析确证其插入正确，从而构建成了重组表达载体。阳性克隆用IPTG诱导表达，表达产物经SDS-PAGE电泳分析，证明其分子质量约为29ku；Western-blotting分析表明，该蛋白可被鸡毒霉形体阳性血清识别，具有生物学活性。     

鸡AMPD1基因PCR-SSCP分析与相关性状的研究

5′-磷酸腺苷脱氨酶1(AMPD1)是嘌呤代谢中的一种重要酶类,它的功能是催化AMP(一磷酸腺苷)脱氨,生成肌苷酸(IMP),从而影响肉质风味。试验采用单链构象多态性(PCR-SSCP)技术,以隐性白羽肉鸡、白来航蛋鸡和两个地方品种(北京油鸡、三黄胡须鸡)纯系鸡为试验材料,对AMPD1基因进行SNPs检测和基因类型判别。卡方检验结果表明: 除三黄胡须鸡和隐性白羽肉鸡、北京油鸡和白来航鸡间差异不显著(P>0.05)外,其他各品种间差异极显著(P<0.01)。AMPD1基因多态性与北京油鸡生产和屠体性状(活重、胸肌率、肌苷酸含量等)相关分析结果表明:肌苷酸含量在三种基因型间差异显著(P<0.05)。初步推断AMPD1可能为影响鸡肉中肌苷酸生成的主效基因或与主效基因相连锁。