应用聚合酶链式反应检测牛白血病前病毒DNA

牛白血病病毒（BLV）是地方流行型牛白血病的病原体，通常用AGID，ELISA试验检测病毒抗体，现用聚合酶链式反应（PCR）检测BLV，可从感染宿主检测到100ng前病毒DNA，使本试验的敏感性提高了两个对数组数，而且无论是在淋巴细胞还是在肿瘤细胞，以及各个感染时期都可检出前病毒DNA。     

青贮饲料中有机酸的毛管电移动分析方法

调制优质青贮饲料是贮藏利用粗饲料的重要条件。青贮饲料品质,一般根据发酵成分的含量组成判定,青贮饲料发酵生成的有机酸,主要是乳酸和挥发性脂肪酸(VFA)。通常评价品质的方法根据乳酸、醋酸及酪酸的含量比。作为青贮饲料中有机酸的定量法,多是采用气相色谱法与高速液相色谱法。但是,这些方法须进行诱导体化等前处理,分析时间也长,并且对某种有机酸异构体(iso-及n-)分离困难,因而,用作常规实     

旋毛虫感染小鼠肠道菌群的变化

选取18只BALB/c小鼠进行旋毛虫灌胃,以灌胃前1d作为时间起点,于第0、1、7、14、28天分别收集小鼠粪便,同期选取12只同种小鼠作为对照。采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)法对小鼠粪便中双歧杆菌、乳杆菌、肠球菌、梭菌、拟杆菌、直肠真杆菌、柔嫩梭菌以及脱硫弧杆菌进行定量检测。结果显示,双歧杆菌数量在第7、14、28天均显著低于对照组(P<0.01),第1天无变化;乳杆菌第7、14、28天低于对照组(P<0.05),第1天无变化;肠球菌与梭菌在第7、14、28天均高于对照组(P<0.05),第1天无变化;拟杆菌、直肠真杆菌、柔内梭菌以及脱硫弧杆菌均无明显变化(P>0.05)。结果表明,旋毛虫感染可引起小鼠肠道菌群变化,从而引起小鼠肠道菌群失调。     

4种肠道致病菌的多重荧光定量PCR快速检测方法的建立

根据沙门菌的invA基因、弗氏枸橼酸杆菌的ldh基因、奇异变形杆菌的ureR基因和迟缓爱德华菌的fimA基因的保守序列,分别设计合成4对特异性引物和4个Taqman探针,通过对PCR反应体系的优化,并对该方法的特异性、敏感性进行评估,建立了一种能同时检测沙门菌、弗氏枸橼酸杆菌、奇异变形杆菌、迟缓爱德华菌的四重荧光定量PCR快速检测方法。该方法可特异性的检测到4种目标菌株的单一模版及混合模板,未发现不同成分间的交叉反应,最低检出限均为103cfu/mL;对22种非目标病原菌进行检测均为阴性。本研究建立的四重荧光定量PCR检测方法灵敏度高、特异性强,可用于上述4种致病菌的同时快速检测。     

荷斯坦奶牛瓜氨酸血症PCR-DHPLC诊断方法的建立及应用

为有效检测荷斯坦奶牛瓜氨酸血症,采用多聚酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)结合变性高效液相色谱(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)技术建立方法。制备纯合突变、野生型的基因模板,优化PCR反应体系,制备异源双链体系,建立DHPLC检测方法,确定最佳的检测条件。对262个血液样本用建立的方法进行检测,发现4个杂合子个体,并通过了测序验证。结果显示,建立的PCR-DHPLC的方法与测序检测结果一致,表明所建立的PCR-DHPLC方法可以用于检测瓜氨酸血症。PCR-DHPLC是一种高通量、准确性高、特异性好的检测方法。     

黄牛、牦牛和犏牛睾丸组织中Boule基因mRNA表达水平

Boule基因是DAZ家族成员之一,在生殖细胞中特异表达是精子发生过程中减数分裂的关键调控因子,其表达缺乏可引起减数分裂阻滞和精子生成障碍,导致雄性不育。为揭示Boule基因mRNA表达水平与犏牛雄性不育关系,本研究利用实时荧光定量PCR法,对黄牛、牦牛和犏牛睾丸组织中Boule基因mRNA表达进行定量分析。结果表明:Boule基因在黄牛和牦牛睾丸组织中的表达水平相对都比较高,黄牛与牦牛差异不显著(P>0.05);而Boule基因在黄牛和牦牛睾丸组织中的表达水平显著高于犏牛,黄牛、牦牛与犏牛差异显著(P<0.05)。结果提示,Boule基因在犏牛睾丸组织中低表达与犏牛雄性不育相关,可作为研究犏牛雄性不育的重要候选基因。     

牛结核病PCR诊断试剂盒的检测试验

应用自制牛结核病PCR诊断试剂盒对贵州省某奶牛场共计150份血样、奶样标本中结核分枝杆菌进行检测,结果显示:PCR试剂盒对111份奶样标本进行检测,8份为阳性,阳性检出率7.2%;PCR试剂盒对39份血样标本的检测,12份为阳性,阳性检出率为30.76%。本试验共计检测贵阳附近某奶牛场1 200头份奶牛,先采用PPD检测牛结核病阳性牛和可疑牛,再用PCR法进行检测,PCR检出阳性牛共计20头份,阳性检出率为1.67%;PPD检出阳性牛24头份,检出率为2%。总之,PCR试剂盒在检测牛结核病不同标本中显示出快速、特异等优点,这为今后牛结核病的检测工作提供了一条新途径。     

一株鸽源绿铜绿假单胞菌的分离与鉴定

2013年9月,镇江世业洲某鸽场鸽群暴发不明疫情,死亡率达到10%。对送检病死鸽进行剖检,有气囊炎、肝脏呈古铜色、肾肿大而苍黄等症状。无菌采取肝脏,脾脏进行病毒分离,未分离到病毒。无菌采取肝脏,成功分离到1株细菌,经分离培养、染色镜检、生化试验以及PCR分析,确诊为铜绿假单胞菌感染。对分离菌进行药敏试验,结果显示所分离的铜绿假单胞菌对强力霉素、多粘菌素等耐药,对氟哌酸敏感。     

食品中金黄色葡萄球菌PCR检测方法的建立

采用PCR技术特异性扩增金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶编码基因(nuc基因),检测模拟样品中金黄色葡萄球菌。结果表明所建立的模拟食品中金黄色葡萄球菌的PCR检测方法,特异性良好,敏感性可达61.76pg/μl。     

PRLR基因外显子10多态性与西农萨能奶山羊产奶性能的相关分析

设计4对引物,采用PCR—SSCP技术检测催乳素受体（PRLR）基因外显子10在西农萨能奶山羊群上的单核苷酸多态性,同时研究该基因对其产奶性能的影响。结果表明：引物P2、P3与P4扩增片段具有多态性,P1的扩增片段不存在多态性。应用P2扩增片段,在西农萨能奶山羊中仅检测到AA和AB基因型,纯化测序表明AA与AB基因型相比有2处突变,C27T的突变没有导致氨基酸变化,第189处的碱基缺失导致氨基酸由组氨酸变为酪氨酸和苏氨酸。AA和AB基因型之间产奶量的最小二乘均值差异显著（P〈0．05）,AA基因型在各胎次产奶量和平均产奶量等指标上均高于AB基因型,其中第3胎的产奶量达到显著水平（P〈0．05）;应用R扩增片段,在西农萨能奶山羊中检测到3种基因型（CC、CD、DD）,纯化测序表明CC与DD基因型相比有2处突变（C103A和T106C）,分别导致氨基酸由赖氨酸变为苏氨酸、苏氨酸变为异亮氨酸;3种基因型之间产奶量的最小二乘均值差异不显著（P〉0．05）。应用P。扩增片段,在西农萨能奶山羊中也只检测到EE和EF基因型,纯化测序表明EE与EF基因型相比有1处突变（A114G）,该突变导致氨基酸由蛋氨酸变为缬氨酸;EE和EF基因型之间产奶量差异显著（P〈0．05）。EE基因型的个体各胎次产奶量均比EF型高,其中在第3、4胎产奶量和前4胎平均产奶量3项指标上都达到显著水平（P〈0．05）。研究结果提示：PRLR基因对奶山羊产奶量有显著影响,因此认为PRLR基因外显子10位点可作为奶山羊高产奶量的标记辅助选择的有效分子标记。