用免疫荧光、酶标技术检测赭曲霉毒素A的研究

该项研究采用本课题组提纯的赭曲霉毒素A(Ochratoxin A·简称OA)和研制的兔抗OA抗体等,进行间接荧光法和ELISA间接法检测OA的试验。通过对不同浓度的OA纯品和含毒饲料浸提液及中毒死亡鸡内脏的间接荧光染色,均能检出分布均匀、大小有别的黄绿色荧光亮点;用OA为被检抗原和兔抗OA抗体与羊抗兔IgG-HRP进行ELISA间接法试验,对含不同浓度OA的试验孔和对照孔的检测,结果均正确稳定。研究结果证明,以上两种检测方法检测OA均具有灵敏、特异、快速等优点。     

生物染色剂和荧光染料做为对虾标志的评估（续）

1.双注射的标志方法双注射法是由两次单独的注射组成的,首先进行初级染色,然后进行次级染色。按前面所述的方法将初级染料的水溶液——固绿或台盼兰注射入实验对虾体内,次级染色物质用1或2ml结核菌素注射器25或27号针头注射。0.003～0.01ml的次级染色物质注射到中部背     

谈谈种用肉鸡限饲

种用肉鸡不同于商品肉鸡、以艾维菌肉鸡为例;7周龄父母代肉鸡,公鸡要求达到1000克左右,母鸡800克左右,而商品肉鸡可达到2000克以上。种用肉鸡要求在各个周期达到标准体重(见附表2—4)、才能多繁殖后代,达到高产的目的。因此要防止种鸡过肥过大,这就要采取限饲的技术。肉用种鸡既要满足营养需要,以保持健壮体     

安徽省鸡常见病毒性肿瘤病的检测与调查

应用已建立的鸡肿瘤病快速鉴别诊断技术对源自安徽省5个不同地区的46个鸡群的肿瘤病、抑制病疑似病、死鸡305羽进行检测。结果表明,马立克氏病的阳性率为39．34%(120/305),禽网状内皮组织增生征阳性率为8．52%(26/305),禽白血病阳性率为2．624%(8/305)；另对17群未进行MD免疫的肉鸡进行随机抽样检测,其中5个鸡群检测出马立克氏病病毒强毒,阳性率为29．41%(5/17),阳性群的平均检出率为24 %。     

鸭瘟病毒的PCR检测及其产物分析

根据基因库中已有的鸭瘟 Ul6的序列 ,合成一对引物 ,对 3株鸭瘟病毒进行 PCR扩增 ,均扩增出大小约 42 0 bp的特异性片段。进行测序 ,结果表明 3个毒株扩增后的片段均为 42 1bp。经重复实验后确定最佳反应条件 ,按该条件对两例临床病料进行检测 ,结果均出现大小约为 42 0 bp的特异片段。PCR产物与 L ake Andes株的相关序列比较 ,广东毒株与 L ake Andes株同源性较高     

小鹅瘟的PCR诊断方法的建立

小鹅瘟是由鹅细小病毒(Goose Parvovirus,GPV)引起的雏鹅和雏番鸭的一种急性或亚急性、败血性传染病。该病主要侵害3~20日龄小鹅,以渗出性肠炎,肝脏、肾脏、心脏等实质器官炎症为主要特征。该病传播快,发病率和死亡率高,是严重危害养鹅业的重要传染病。1956年国内学者方定一教授首先发现了该病,此后世界许多国家均有该病的报道。检测GPV的传统方法多为血清学方法,如中和试验、琼脂扩散试验、免疫荧光试验、免疫过氧化物酶染技术、ELISA以及PCR、核酸探针等方法。其中PCR方法是目前这些方法中快速、敏感、特异的检测手段,已被广泛应…     

鸡传染性喉气管炎病毒gB基因的扩增及酶切分析

以从内蒙古区分离的2株传染性喉气管炎病毒(ILTV)株的DNA为模板，用设计好的1对引物对这2株毒株的gB基因进行了PCR扩增，并对扩增产物分别用BglⅡ、PstⅠ、HindⅢ限制性内切酶酶切分析。结果表明，2个分离株均能特异性地扩增出该病毒gB基因片段，片段大小完全一致，为2．6kb；扩增产物的酶切图谱与参考株完全一致。     

中国巴马小型猪内源性反转录病毒的检测

目的 :对我国特有巴马小型猪内源性反转录病毒 ( porcine endogenous retrovirus,PERV)的存在与 m RNA的表达情况进行检测 ,了解巴马小型猪内源性反转录病毒的携带情况。方法 :根据以往建立的 PCR、RT-PCR检测方法 ,对来自于巴马小型猪外周血淋巴细胞的 DNA和RNA样品进行 PERV核心蛋白基因 ( gag)、多聚酶基因 ( pol)及囊膜基因 ( env)的存在与表达进行检测 ;同时 ,根据目前通用的 env基因分型方法检测 PERV env-A、env-B、env-C的存在与表达。结果 :在 1 2个被检的 DNA样品中均检出了PERV特异性 DNA的存在 ;同样 ,在 1 2个被检的 RNA样品中均有 PERV特异性 RNA的表达 ,且所表达的 PERV均为 A型和 B型 ;其中有9个 DNA样品检测出 PERV-C型的存在 ,所有样品中均未检出 C型 PERV的表达。结论 :检测结果表明 1 2个被检巴马小型猪基因组中存在着内源性反转录病毒序列 ,且能以 m RNA的形式表达 ,这一结果为我国特有小型猪的开发、利用及其病毒安全性评价奠定了基础。     

T7 RNA多聚酶基因的克隆、序列测定及其在E.coli中的表达

从BL21(DE3)E．coli菌株中以PCR的方法扩增得到了与T7RNA多聚酶(T7RNApolymerase，T7pol)基因大小一致的DNA片断。将PCR产物纯化后直接克隆到pGEM—T载体中，经酶切鉴定和DNA序列分析表明克隆得到了正确的T7pol基因。将T7pol基因亚克隆入pET-28b( )中，构建得到原核表达质粒pET28T7。该质粒的BL21(DE3)pLysS转化菌在IPTG的诱导下可表达约98800的蛋白，这与T7pol的相对分子质量一致。将该质粒转化DH5α、JMl09、HBl01、BL21(DE3)和BL21(DE3)pLysS等5种不同的宿主菌，仅有转化T7pol酶活性受到抑制的宿主菌BL21(DE3)pLysS才能得到转化子，而其余4种T7T7pol酶活性不受抑制的E．coli宿主菌不能得到转化子。pET28T7原核表达质粒这种仅能在T7pol酶活性受到抑制的宿主菌中才能存活的现象说明本试验所克隆的T7pol基因能正确表达出具有RNA转录酶活性的蛋白。