金黄色葡萄球菌CP8-ClfA-FnBPB偶联物的制备及其免疫学特性

以己二酰肼为间桥,碳二亚胺为偶联剂,将纯化的血清8型荚膜多糖和纯化的ClfA-FnBPB融合蛋白偶联制备偶联物,并在偶联的过程中确定其最佳质量比和偶联比.用制备的偶联物免疫小鼠,同时用间接ELISA法检测抗体水平,并对三免后2周的小鼠进行攻毒保护试验.结果显示,用化学方法制备的多糖-蛋白偶联物在其质量比为1:2时可成功偶联,计算得到偶联比为1:1.89.采用间接ELISA法检测抗体水平,二免后7d,偶联物免疫组可产生抗体,且抗体效价最高可达1∶6 400.阴性对照组和单独多糖组均没有抗体产生,而单独融合蛋白组在二免后产生了抗体反应,但抗体效价较低,最高时仅为1∶100.对小鼠进行攻毒保护的结果表明,偶联物组的攻毒保护率最高,可达80％,而阴性对照组、单独多糖组以及单独融合蛋白组的保护率分别为20％、30％和60％.     

猪链球菌2型感染的诊断

<正>猪链球菌病是由猪链球菌与链球菌属中马链球菌兽疫亚种、马链球菌类马亚种等感染引起。其中的猪链球菌是重要的人兽共患病病原,根据荚膜多糖抗原性不同,可将其分为35个血清型,主要致病的血清型有1、2、1/     

副猪嗜血杆菌SC-1株荚膜多糖输出蛋白的表达及其免疫原性分析

运用PCR方法扩增副猪嗜血杆菌SC-1株荚膜多糖输出蛋白(CPEP)基因,克隆至pMD-19T载体。经鉴定测序验证后,将获得的CPEP基因克隆至pET-32a(+)原核表达载体,构建原核表达质粒pET-32a-CPEP,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE以及Western blot分析免疫原性,纯化CPEP,并用纯化的蛋白免疫小鼠,检测其特异性血清IgG抗体水平及攻毒保护率。结果显示,成功构建原核表达质粒pET-32aCPEP;SDS-PAGE分析结果显示,得到约35ku的蛋白;Western blot分析显示,CPEP能与Hps SC-1阳性血清发生抗原抗体的特异性反应,证实该重组CPEP蛋白具有反应原性。以致死剂量的强毒株SC-1攻毒CPEP免疫小鼠,重组蛋白的免疫能够减缓发病,并表现出40%的保护率。重组蛋白CPEP的部分保护作用表明其可以作为免疫候选因子,为未来副猪嗜血杆菌标准化疫苗的研制奠定基础。     

金黄色葡萄球菌血清5和8型的研究进展

金黄色葡萄球菌(以下简称金葡菌)是人和动物重要的接触性致病菌,从患乳腺炎的乳牛乳汁中分离到的致病菌近一半是金葡菌,这些分离菌株中 94％-100％含有荚膜多糖(CapsulaLr polysaccharide, Cp)。因此,Cp日益引起科研工作者的关注。金葡     

鸭疫里默式杆菌免疫原性研究概述

鸭疫里默氏菌(Riemerella Anatipestifer,RA)是一种革兰氏阴性,无运动力,不形成芽孢的球杆状细菌,主要侵害家鸭,也可感染鹅、火鸡等禽类。自Hendrickson和Hibert于1932年首次报道纽约长岛三个鸭场的北京鸭发生感染以来,     

金黄色葡萄球菌CP5偶联鞭毛蛋白疫苗对小鼠乳腺炎模型的保护作用

以鞭毛蛋白(flagellin)作为载体蛋白,通过化学偶联至金黄色葡萄球菌5型荚膜多糖(CP5),并在小鼠模型上检验多糖疫苗对小鼠存活及其乳腺的保护作用.将小鼠分为4组:生理盐水组、CP5单独免疫组、牛血清白蛋白(BSA)-CP5偶联组和flagellinCP5偶联组,每组10只,分别进行皮下免疫,均含CP5 10 μg;共免疫两次,两次免疫间隔3周.第2次免疫两周后,用金黄色葡萄球菌分别对小鼠腹腔、乳腺进行攻毒,并通过实时定量PCR对乳腺组织细胞因子IL-4、IL-10、IFN-γ、IL-12的表达进行检测.结果表明,CP5偶联鞭毛蛋白疫苗对小鼠乳腺具有显著的保护效果,并在乳腺组织部位诱导了Th1型细胞因子表达,说明鞭毛蛋白是CP5的理想载体蛋白.     

无乳链球菌荚膜多糖的粗提及多糖含量测定条件优化

为提取无乳链球菌荚膜多糖,并对苯酚-硫酸法测定多糖含量条件进行优化。离心收集发酵上清液,超滤浓缩,经800mL/L乙醇沉淀提取无乳链球菌荚膜多糖;采用单因素试验对苯酚硫酸法测定条件进行优化,并对测定方法的可靠性进行验证。结果表明,从1L发酵液中提取到含量为38.51%的荚膜多糖0.36g;测定的最佳条件为:2mL样品液中,加入1 mL 50 mL/L的苯酚,5 mL浓硫酸,混匀后80℃作用20min,在1.5h内测定485nm处的光密度。在该条件下,平均加样回收率为99.96%,相对标准偏差为0.40%。说明从无乳链球菌发酵上清液中成功提取到荚膜多糖,建立了苯酚硫酸法测定荚膜多糖的最优条件。     

2型猪链球菌病的防治

引起猪链球菌病的病原多为C群的兽疫链球菌(S.zooepidemicus)和类马链球菌(S.epuisimilis),D群的猪链球菌(S.suis),以及E、L、S、R等群。猪链球菌按照荚膜多糖抗原的不同可将其分成35个荚膜血清型,即1～34和1/2型(同时含有1型和2型抗原的菌株),早期曾将猪链球菌分类到兰氏分类法R、S、和T群,实际上与兰氏R、S和T群分别对应的是荚膜2、1和15型。对人致病的大多属于A族,A族又称为化脓性链球菌,在动物中对人类造成严重威胁是猪链球菌,尤其是血清2型链球菌不仅对猪的致病性最强,而且可感染特定人群并致死,是一种重要的人畜共患病病原菌。…     

奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌TH-16S 733330株荚膜多糖免疫原性研究

从新疆分离的奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌,经TH-16S系统鉴定,选取鉴定结果为733330的优势生化株。毒力测定试验表明,1×108CFU/只的接种量会使小白鼠在24 h内死亡。菌株接种Columbia Broth Modified 37℃摇床100 r/m in培养24 h后,用0.05%戊二醛灭活。灭活培养物经4℃30 m in 17 000 g离心去除细胞碎片,上清用PBS(pH 7.2)4℃透析48 h,PEG20000浓缩10倍,透析,加入终浓度为10 mg/mL的蜂胶-乙醇浸液,作为荚膜多糖免疫原。先分别用荚膜多糖免疫原0.1、0.2、0.4 mL免疫小白鼠,再用组合免疫原(荚膜多糖+109CFU/mL菌体)0.1、0.2、0.4 mL免疫小白鼠。6组小鼠于免疫后14 d连同对照小鼠2组攻击金黄色葡萄球菌2×108CFU/(0.2 mL.只)。结果表明,荚膜多糖免疫原组保护率分别为0、25%和50%,(荚膜多糖+菌体)组保护率分别为25%、75%和100%。     

Construction and characterization of cpsE-and neuA-deleted mutants of Streptococcus agalactiae isolated from Nile tilapia

为探究尼罗罗非鱼无乳链球菌(GBS)荚膜多糖合成基因cpsE和neuA对菌株生物学特性的影响,本研究利用同源重组的方法,构建了GBS的cpsE与neuA的单基因缺失突变株.具体方法为:用Infusion-PCR的方法分别构建带有氯霉素抗性基因的cpsE与neuA基因敲除重组质粒pSET4s-cpsE和pSET4s-neuA.将构建好的质粒电转化入GBS感受态细胞中,通过改变培养温度实现双交换和质粒丢失,最后经氯霉素抗性筛选获得疑似敲除株.通过菌落PCR、RT-PCR及DNA测序等方法对疑似敲除株进行验证.结果显示GBS的两个突变株△cpsE和△neuA被成功构建.在此基础上,通过生物学功能分析比较基因缺失突变株△cpsE、△neuA与野生株在菌株生长速率、荚膜多糖厚度、唾液酸含量和毒力方面的差异.结果发现缺失突变株△cpsE和△neuA的生长速度与野生株无显著差异,但荚膜多糖厚度、唾液酸含量和菌株毒力均显著低于野生株.进一步研究显示,cpsE是鱼源GBS荚膜多糖合成的关键基因,neuA基因则是荚膜多糖唾液酸化的关键基因,它们的缺失导致了GBS荚膜唾液酸含量的降低,且显著降低了菌株的毒力.