中性植酸酶的克隆、表达、纯化及酶学性质研究

基于454高通量测序枯草芽孢杆菌I4全基因组,获得一个编码中性植酸酶的基因Bpp,该基因全长为1 149 bp,编码382个氨基酸组成的多肽,成熟蛋白的理论相对分子质量为42 590.将基因Bpp克隆到表达载体pET28a(+),并在大肠杆菌BL21( DE3)中表达,表达产物具有植酸酶活性,利用组氨酸标签纯化并初步研究其酶学性质.结果表明:酶作用的最适pH为7.5,最适温度为55℃,Km为38.76 mmol/L,Vmax为2.34 U/mg,比活力为6.054 U/mg,中性植酸酶活性依赖Ca2+.     

牛副结核病及其预防

副结核病是一种以潜延性腹泻为特征的慢性传染病,主要发生于牛,尤其是乳牛。本病分布广泛,一般养牛区都可能存在。1发病特点早期为间断性腹泻,时轻时重,排泄物稀薄、恶臭,并带有气泡和粘液块,以后渐渐变为顽固性拉稀,病牛逐渐消瘦、衰弱、脱水、眼窝下陷、精神萎靡、喜卧;下颌及垂皮水肿,皮肤粗糙,被毛粗乱。但体温一般无变化。一些常用药物如链霉素、青霉素以及对氨水杨酸、异烟肼等对这种病均无疗效。而止泻药只能短期起作用,停药时即刻复发。病牛最后因腹泻不止经3～4个月衰竭而死,染疫牛群的死亡     

不同生长期对籽粒苋干草和青贮饲料品质的影响

为分析不同生长期对籽粒苋(Amaranthus hypochondriacus)干草和青贮饲料品质的影响,从而确定籽粒苋的最佳刈割时期,本研究以籽粒苋为试验材料,比较现蕾期、初花期、盛花期和成熟期4种生长期的籽粒苋调制的干草和青贮饲料的营养成分,以及籽粒苋青贮饲料的发酵品质。结果表明,1)随着籽粒苋生长期的延长,干草的粗蛋白含量和粗饲料相对价值指数均呈现逐渐下降的趋势,而中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维含量的变化趋势则相反。2)除现蕾期青贮饲料以外,其他时期的青贮饲料pH均在4.2以下,现蕾期青贮饲料发酵品质较差;成熟期青贮饲料乳酸含量与盛花期差异不显著(P 0.05),显著高于其他生长期(P 0.05);成熟期籽粒苋青贮饲料的乙酸含量最低,氨态氮/总氮显著小于现蕾期青贮饲料(P 0.05)。随着籽粒苋生长期的延长,青贮饲料的粗蛋白含量逐渐降低,粗纤维含量则逐渐增加,成熟期青贮饲料的可溶性碳水化合物和淀粉含量显著高于其他时期(P 0.05)。综上所述,成熟期刈割的籽粒苋调制为干草和青贮饲料最为合适。     

猪伪狂犬病病毒gB蛋白抗体竞争化学发光酶联免疫检测方法的建立

为了建立一种快速定量检测猪伪狂犬病病毒（PRV）gB蛋白抗体的竞争化学发光酶联免疫检测方法,以大肠杆菌表达并纯化的猪伪狂犬病病毒gB重组蛋白作为包被抗原,以辣根过氧化物酶标记的抗gB蛋白单克隆抗体作为酶标抗体,以国家参考品稀释制备的校准品绘制标准曲线实现定量检测,成功建立的PRV-gB-CLEIA在45 min内即可完成检测,可检测到最大稀释倍数为1：2 048稀释的国家参考品;与猪瘟等其他5种病毒抗原的标准阳性血清无交叉反应;批内变异系数为1.13%~9.47%,批间变异系数为2.43%~14.07%,重复性和稳定性较好。通过对采集的180份临床血清检测结果进行比较,该方法与中和试验阳性符合率为94.00%,阴性符合率为96.92%,总符合率为96.11%,明显优于商品化ELISA试剂盒。本研究建立的PRV-gB-CLEIA检测方法可以用于PRV gB抗体的快速定量检测。     

硒的生物学特性及机制研究

1硒的生物学功能 1.1硒的抗氧化作用 硒对畜禽机体的抗氧化作用主要通过谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)酶促反应清除脂质过氧化物,因此,通常将GPx活性作为衡量硒在生物体内的功能指标.     

有机硒对雄性昆明小鼠繁殖性能影响的研究

将试验小白鼠随机分为6组,对照组(0.15 mg/kg)、缺硒组(0.01 mg/kg)、低硒组(0.16 mg/kg)、中硒组(0.31 mg/kg)和高硒组(0.61 mg/kg),试验鼠自由采食。待成功建立缺硒及各剂量组动物模型后,测定试验鼠肝脏谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和雄性小鼠繁殖性能的指标(精液品质—畸形率、顶体反应、渗透性)。试验结果显示,在第9周末成功建立缺硒动物模型;补硒各组的生殖脏器指数与对照组间无显著差异,但与缺硒组差异显著或极显著;缺硒组精子活力仅23.1%±2.3%,精子畸形率达57.9%±0.3%,顶体完整率仅47.0%±6.3%,低渗膨胀率为43.8%±2.1%,产仔率为0,均与其它各组差异极显著;补硒组精子活力和活率均有加强,且除低渗膨胀率外,其它繁殖指标均与对照组差异显著或极显著。缺硒导致雄性小鼠生长受阻及繁殖性能降低,含硒化合物,尤其是有机硒化合物有增强繁殖性能的作用,且安全剂量范围内的高剂量组的促进作用更为明显。     

家蚕BmNPV多角体蛋白与大肠杆菌L-天冬酰胺酶Ⅱ的融合表达

L-天冬酰胺酶是一种重要的蛋白类抗肿瘤药物,可通过降解L-天冬酰胺从而抑制肿瘤细胞中蛋白质的正常合成,导致肿瘤细胞的死亡.通过基因融合的方法,将大肠杆菌的asp基因在家蚕杆状病毒中表达,其活性进一步提高到5 940U/mg,为利用家蚕生物反应器生产该蛋白打下了基础.     

应用免疫酶染色法检测鸡病毒性关节炎病毒的研究

用免疫酶染色法检测Ｖｅｒｏ细胞培养物，陈旧石蜡切片和人工感染试验鸡组织中的ＡＶＡＶ，并比较了ＡＶＡＶ强毒和弱毒株在组织中情况，结果发现，试验鸡于感染ＡＶＡＶ弱毒株后１－５天、感染ＡＶＡＶ强毒株后１－９天出现病毒血症；跗关节、跖趾关节、趾关节，趾屈肌健、脾脏、肝脏等组织中病毒的检出最高，存在时间也最长；在感染后３－２０天于感染鸡法氏囊、感染后３－１１天于感染鸡胸腺中检出了强毒株，在这两组织中未检出Ａ     

乙酸浓度对奶牛乳腺上皮细胞甘油三酯含量及瘦素和过氧化物酶增殖物激活受体γ基因表达量的影响

本试验旨在研究乙酸浓度对奶牛乳腺上皮细胞甘油三酯(TAG)含量及瘦素(leptin)和过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPARγ)基因表达量的影响。将传至第3代的奶牛乳腺上皮细胞以适宜的密度培养48 h后,随机分为6个处理,各处理分别采用乙酸浓度为0(对照组)、4、6、8、10和12 mmol/L的培养液。置于37℃5%CO2培养箱继续培养48 h。收集细胞,观测脂滴形成状况,测定TAG含量及leptin和PPARγ基因表达量。结果表明:随乙酸浓度的增加,培养的奶牛脂肪前体细胞脂滴形成增多;随乙酸浓度的增加,TAG含量和PPARγ基因表达量均呈显著的线性或二次曲线增加(P<0.05),且以乙酸浓度为10和12 mmol/L时效果较好;一定浓度的乙酸可上调leptin基因表达量,尤以浓度为8、10 mmol/L时上调作用较好。结果提示,乙酸对奶牛乳腺上皮细胞内脂滴的形成、TAG的积累、leptin和PPARγ基因的表达有显著的促进作用。本试验条件下,乙酸浓度为10～12 mmol/L时能较好地促进PPARγ基因的表达,浓度为8～10 mmol/L时能较好地促进leptin基因的表达。     

蜂蜜中氯霉素残留来源与变化研究

研究模拟大田养蜂生产,在花期蜂蜜生产过程中通过对照实验,跟踪检测使用氯霉素的生产蜂群的蜂蜜中氯霉素残留量变化趋势,揭示以氯霉素为代表的抗生素残留在蜂群中残留量的变化规律,评估了不同管理水平下氯霉素残留量衰减率,以发现有效消除蜂群氯霉素残留的方法。研究证明,在养蜂生产中一次氯霉素的使用会对蜂蜜品质造成长期影响,同时取蜜次数、蜂群群势及用药剂量均与蜂蜜氯霉素残留量变化相关。生产中取蜜次数与氯霉素残留量负相关,强群势蜂群有助于加快蜂蜜中氯霉素残留量递减速度,但当蜂蜜中氯霉素残留量降至1.5μg/kg后,增加取蜜次数对蜂蜜氯霉素残留量影响不明显。大用药剂量将导致蜂蜜中氯霉素残留量激增,降解时间延长。使用清洁蜂箱和巢脾能有效消除蜂蜜生产中氯霉素的残留。