异种移植的现状与未来

应用猪的细胞、组织或器官移植治疗人类疾病的研究方兴未艾.本文综述了异种移植的最新进展,侧重阐明了异种移植存在的生理学和免疫学障碍及解决异种移植排斥的策略.讨论了应用猪作为供体进行异种移植可能存在的一些潜在危险性,特别是猪内源性逆转录病毒造成的一系列问题.     

介绍一种简便有效的猪卵丘细胞体外培养方法

卵丘细胞是与生殖细胞有关的体细胞，是一种较好的克隆供核细胞。实验在猪卵巢卵母细胞的体外培养过程中发现了一种无菌操作要求不高、简便有效的卵丘细胞的体外培养方法。     

提高牛胚胎移植受胎率的关键环节

胚胎移植是快速增加优质奶牛数量，获得高产奶牛的最佳途径。目前胚胎移植在我国已经逐渐扩大推广，因受畜牧业生产水平、技术人员熟练程度的影响，牛胚胎移植的受胎率差异很大，较好的受胎率达50％以上，而大部分的受胎率在30％以下，严重制约了胚胎移植工作的推广，如何提高牛胚胎移植的受胎率，应抓好如下关键环节。     

LINC24065在体细胞核移植牛中的异常表达

旨在揭示DLK1-DIO3印记域上一个新的长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)LINC24065在自然繁殖牛(natural reproduction,NR)与体细胞核移植牛(somatic cell nuclear transfer,SCNT)中的组织表达与印记状态,对进一步了解DLK1-DIO3印记域在供体核重编程中的作用提供一定的理论基础。本研究以自然繁殖牛的大脑组织为试验材料,利用RACE和RT-PCR技术,在牛的DLK1-DIO3印记域内鉴定了一个新的印记的lncRNA基因,命名为LINC24065。用基于SNP(single nucleotide polymopisms)的RT-PCR产物直接测序方法分析LINC24065在自然繁殖牛和体细胞核移植牛组织中的表达及印记状态。序列分析发现,LINC24065编码6个可变剪接体,并在自然繁殖牛被检测的7个组织中都表达,而在体细胞核移植牛组织中没有检测到可变剪接体LINC24065-V3,且其它5个剪接体呈现组织特异性表达。印记状态分析发现,LINC24065在自然繁殖牛和体细胞核移植牛的7个组织中均为单等位基因表达,但在体细胞核移植牛的大脑组织中出现了与其他组织亲本来源不同的单等位基因表达。研究结果说明,LINC24065基因在体细胞核移植牛的大脑中出现了印记紊乱,并且剪接体在组织中的表达也发生了改变。以上研究结果说明LINC24065基因与体细胞核移植牛的发育异常有关。     

广西补贴柑桔良种无病毒苗木

本刊讯(特约通讯员钱开胜)最近,为进一步保护和调动果农种植柑桔良种无病毒苗木积极性,促进广西柑桔业的健康发展,广西壮族自治区农业厅日前下发了《2012年柑桔良种无病毒苗木补贴项目实施方案》,方案强调了柑桔良种无病毒苗木补贴项目的管理,以确保资金使用效益,确保柑桔良种无病毒苗木补贴落到实处。据悉,广西实施的柑桔良种无病毒苗木补贴项目,将以"全面推广柑桔良种无病毒苗木"为出发点,按照"区     

嗅鞘细胞对无血清培养诱导PC12细胞凋亡的作用

采用无血清培养诱导PC12细胞凋亡,研究嗅鞘细胞(Olfactory ensheathing cells,OECs)对去血清后诱导PC12细胞凋亡中的作用。通过MTT法检测细胞的活性,细胞形态学观察,以及结合流式细胞仪检测细胞的凋亡率,井对不同组细胞凋亡率进行比较。结果表明：①OECs培养上清对去血清后PC12细胞的存活有明显的促进作用;②从形态学上观察,OECs对去血清诱导PC12细胞凋亡有明显的抑制作用,使得细胞向死亡过渡受阻;②流式细胞对细胞周期分析,去血清诱导后的PC12细胞,大部分细胞滞留在G1期,细胞向S期过渡受阻,造成G1期细胞的堆积,它们所占比例分别为：73．6％,25．9％,0．5％;而OECs联合培养组所占比例：53％,42．3％,4．7％;OECs上清组：42．1％,52．2％,5．7％;正常有血清培养组：45,6％,41．4％,13％。凋亡细胞所占百分比分别为：60．3％,45,6％,37．4％,0．5％。     

绵羊去透明带卵母细胞体细胞核移植研究

为探索简化的核移植程序,本研究分析不同成熟培养时间、去核过程中紫外光照时间、融合电压强度、激活剂种类、不同培养方法对绵羊去透明带卵母细胞核移植的影响。结果表明:卵母细胞成熟培养18～19 h后去除透明带,其极体排出和附着效果最佳。采用1.9 kV/cm直流电压融合去核卵母细胞与颗粒细胞,融合率为88.2%,效果最好。离子霉素对重构胚具有较好的激活效果,卵裂率为82.1%,囊胚率为10.4%;压制WOW(s孔中孔)发育组卵裂率和囊胚发育率与四孔板培养组相比无显著差异,但卵裂率和囊胚发育率并不高;去除透明带的绵羊卵母细胞采用衰减1/4的UV照射10 s辅助去核后,卵裂率为35.6%,但重构胚未能发育至囊胚。结果显示,通过去透明带辅助显微操作去核的方法进行的绵羊体细胞克隆程序较易掌握。     

显微操作针的制作

显微操作技术如今已广泛应用于胚胎生物工程,如体细胞核移植、显微受精、胚胎性别鉴定和胚胎分割等。完成这些工作,首先必须有符合要求的显微操作针,由国外购买成品针用于显微操作人员培训其成本太高。本实验室主要从事牛、羊的体细胞克隆工作,所以由国外购买了拉针仪、煅针仪和磨针仪。经过一年的学习摸索,显微操作针的制作已很熟练,而国内做显微操作针的相关资料还很少,现将实验中摸索出来的一些方法和技巧总结出来与同行共享。1做针用材料实验室购买的是NIKON和LEICA公司的显微操作系统,因此使用的是与其相匹配的外径为1mm,壁厚0.1mm…     

猪胚胎移植时间与胚胎生长发育关系的探讨

在猪胚胎附植前期,在不同时期的母体子宫环境下,诱导胚胎发育通过胎儿和胎盘的发育状况确定猪胚胎移植的最佳时期。用24头(其中12头为供体,另12头为受体)出现发情症状24h之后的约克夏母猪与约克夏公猪交配,在妊娠60h,从供体输卵管中冲出胚胎(此时胚胎处于1～4细胞期),分别移入处于发情期36h、60h、84h的受体输卵管中。以胚胎的日龄计算,在妊娠的112d取出受体的子宫,分别检测胎儿体重、胎盘的重量、胎盘的表面积及胚胎附植位点的长度。通过比较,发情3.5d和2.5d移入受体的胎儿,虽然幼仔的数量相近(9.1±0.9),但胎儿比较重(分别为1.44±0.05kg,1.23±0.04kg,p<0.001),并有较大的胎盘表面积(1793±60cm2,1459±43cm2,p<0.01)和较长的附植位点(32.1±1.5cm,24.9±0.6cm,p<0.001)。表明胚胎位于输卵管时进行移植效果比较理想。