猪霍乱沙门氏菌C78-1株Δcrp缺失株的构建及其生物学特性初步研究

通过自杀性质粒介导的等位交换技术构建猪霍乱沙门氏菌C78-1株的crp基因缺失株,并对其生物学特性进行初步研究。首先以猪霍乱沙门氏菌C78-1基因组为模板进行PCR,扩增出crp基因上下游片段(1 048和1 743 bp),并分别将其克隆入自杀性质粒pRE112上,构建含缺失320 bpcrp基因的重组自杀性质粒pREΔcrp。运用重组自杀性质粒介导的等位交换技术,两步法筛选C78-1的Δcrp缺失株。进一步的生物学特性研究表明,缺失株的血清型与亲本菌株C78-1一致,且能够稳定遗传缺失的crp基因,但其生化特性和生长速度与C78-1相比发生明显改变,小鼠致死性试验结果表明其毒力较C78-1降低约750倍。以上结果均证实,作者成功构建了猪霍乱沙门氏菌C78-1株的crp基因缺失突变株,缺失株遗传稳定,毒力显著降低,为进一步开发猪霍乱沙门氏菌的弱毒疫苗菌株奠定了基础。     

“瓜贱伤农"背后的深层次问题

<正>今夏对一些地方的种瓜农民而言,一场可以被称为“瓜贱伤农”的噩运降临到了他们头上:大批成熟的西瓜囤积在地头,只见瓜价下跌,不见收购客商;在低迷的瓜市面前,许多瓜农面临连成本也收不回的困窘;最悲惨的是山西运城西瓜零售价每kg 4-6分钱,逼近瓜农心理承受底线,出     

EHEC O157:H7 stx基因缺失突变株的构建及其特性

针对肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157：H7的stx基因，通过PCR扩增出缺失了183bp的s灯基因片段，将其克隆到自杀性戢体pCVD442中，然后通过接合性转导将重组自杀性质粒pCVD442：：△stx从大肠杆菌SMIO转到O157：H7中，利用抗性标记和PCR方法筛选出O157：H7 stx基因缺失突变菌株。Vero细胞毒性试验证实，该突变株不能产生完整的Stx。动物试验表明，与强毒株相比该突变株的致病性明显降低。该突变株的构建为研究志贺毒素在EHEC O157感染中所起的作用和研制O157的基因工程减毒活菌苗奠定了基础。     

原发性肝癌的自杀基因治疗

原发性肝癌是常见的恶性肿瘤之一,传统的治疗方法主要是手术切除,放射治疗和化学药物治疗。这些疗法对早期肝癌可获得较满意的疗效,但对晚期肝癌伴有局部扩散和远处转移者,疗效往往较差。分子生物学的发展使基因治疗成为可能。肝癌基因治疗策略主要包括:①免疫基因治疗,又称细胞因子基因治疗,通过转导细胞因子基因,增强机体抗肿瘤免疫能力;②自杀基因治疗,使肝癌细胞产生对某些药物前体的特异敏感性而被杀灭;③基因置换或补充,置换突变的基因或补充缺失的抑癌基因;④反义核苷酸技术,用于抑制癌基因的表达。其中自杀基因治疗是近年来研究的一个热点,本文对近年来肝癌的自杀基因治疗研究情况作一综述。1自杀基因治疗系统自杀基因是指存在于细菌、病毒和真菌中的一类基因,其编码的酶能活化一些抗感染药物前体,从而产生细胞毒作用。由于这类酶并不存在于哺乳动物中,因此,前体药物对哺乳动物细胞通常是低毒或无毒的。肿瘤的自杀基因治疗策略就是将这类基因用基因工程技术构建在一定的表达载体上并导入肿瘤细胞中,利用其在特定条件下高效表达的酶将无毒性的药物前体转化为细胞毒性药物,从而达到杀伤肿瘤细胞的治疗目的[1]。自杀基因治疗系统种类较多,主要包括单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激...     

悲怆之桥

建桥36年,千人跳江自杀 南京长江大桥,一座我国自行设计建造的双层双线公路、铁路两用桥,1968年12月29日竣工.它横跨于南京市西北面的长江江面上,既是南京市的标志性建筑,也是全国人民的骄傲.每到夜晚,桥上桥下的2000多盏灯火华光齐放,把整座大桥点缀得绚丽多彩,耀眼夺目,犹如一道彩虹凌空江上.     

鼠伤寒沙门菌SL1344株AcrpAasd缺失株的构建及生物学特性初步研究

构建鼠伤寒沙门菌SL1344△cr户△nsd双基因缺失突变株,并对其生物学特性进行初步研究。首先以Y7213（pREAasd）为供体菌,SL1344Acrp为受体菌进行结合转移,通过自杀性质粒介导的等位交换技术两步法筛选sI,1344的AcrpAasd双缺失株。该缺失株在有外源DAP的存在下能够正常生长,且能稳定遗传缺失的“sd基因;其血清型与亲本株SL1344Acrp及强毒株SL1344保持一致;其生化特性与亲本株基本相同,但与强毒株相比变化较明显,且生长速度明显减慢;雏鸡毒力试验结果表明其毒力较SL1344降低约10j倍。鼠伤寒沙门菌SL1344AcrpzSasd缺失株构建成功,为进一步开发以鼠伤寒沙门菌为载体的口服疫苗奠定了基础。     

鼠伤寒沙门氏菌SL1344株△crp△cya缺失株的构建及其生物学特性初步研究

为研制更加安全并保持良好免疫原性的弱毒株鼠伤寒沙门氏菌(S.typhimurium)及疫苗活载体,本研究通过自杀性质粒介导的细菌同源重组技术,将已缺失cya基因的SL1344株进一步缺失crp基因,构建S.typhi-murium SL1344△crp△cya双基因缺失突变株,并对其生物学特性进行初步研究。双基因缺失株的构建是以含有重组自杀性质粒pRE△crp的大肠杆菌χ7213为供体菌,SL1344△cya为受体菌进行接合转移,两步法筛选crp/cya基因双缺失突变株,并通过PCR和测序鉴定。对双缺失菌株的生物学特性鉴定表明,SL1344△crp△cya血清型与亲本株SL1344△cya及野生株SL1344保持一致,并且能够稳定遗传缺失后的crp基因;其生化特性与亲本株基本相近,但与野毒株相比发生明显变化,生长速度也更为缓慢;对雏鸡致病性测定试验显示,双缺失株毒力比SL1344至少降低了约106倍。实验结果表明,S.typhimurium SL1344△crp△cya缺失株具有良好的遗传稳定性,毒力明显降低,为深入研究以S.typhimurium为载体的口服疫苗奠定了基础。