不同启动子驱动的ACDS基因对矮牵牛遗传转化技术研究

以矮牵牛为试材,通过根癌农杆菌介导ACC脱氨酶基因(ACDS)(分别由CaMV35S、SAG12和CHSA启动子驱动)转化矮牵牛叶盘,探讨了预培养时间、农杆菌菌液浓度、浸染时间、共培养时间、乙酰丁香酮(AS)浓度等因素对转化的影响,比较了ACDS基因在不同启动子驱动下获得转基因植株的效率及转基因植株的生长速率。结果表明:预培养5d的矮牵牛叶盘在含AS 200μmol·L-1、OD600值为0.6的农杆菌菌液中浸染8min后,共培养4d时遗传转化效果最优;不同启动子驱动的ACDS基因转化效率以CHSA启动子效率最高(3%),SAG12启动子效率最低(1.25%)。PCR检测证明外源基因已整合进入矮牵牛基因组中。转ACDS基因矮牵牛植株的获得,为利用基因工程技术培育抗衰老矮牵牛新品种奠定了技术基础。     

含ACC脱氨酶活性的复合菌株提高苜蓿抗盐碱能力研究

为探究含ACC脱氨酶活性的复合菌株对盐碱胁迫下紫花苜蓿的促生效果,以3株含ACC脱氨酶活性的植物根际促生菌拜式不动杆菌Y-2(Acinetobacter beijerinckii)、粘质沙雷氏菌BC-3(Serratia marcescens)和产气肠杆菌CE-1(Enterobacter aerogenes)为供试菌株,通过菌株拮抗反应测试,筛选可以混合使用的菌株,测定单菌株和复合菌株的耐盐碱特性和促生特性,并进行盐碱土盆栽试验,评价其对紫花苜蓿的促生效果。结果表明,复合菌株Y-2+CE-1和BC-3+CE-1间无拮抗反应,可以混合使用,在p H值为10和盐浓度为7%的条件下生长良好。单菌株和复合菌株均具有ACC脱氨酶活性、分泌植物生长素(IAA)能力和溶磷能力,且复合菌株的促生特性优于单菌株。此外,接种单菌株和复合菌株均能不同程度地促进紫花苜蓿的生长,其中复合菌株Y-2+CE-1和BC-3+CE-1促生效果显著,与对照相比,株高、根长、地上干重、根干重分别提高20.3%和20%、51.4%和45.9%、47%和36.4%、68.8%和52%,且促生效果优于单菌株。可见,含ACC脱氨酶活性的复合菌株能缓解盐碱胁迫,对紫花苜蓿具有明显的促生效果。本研究结果为研制复合菌肥,治理和利用盐碱地奠定了理论基础。     

奇异变形杆菌次级L-氨基酸脱氨酶在大肠杆菌中的表达及其特征

L-氨基酸脱氨酶可催化天然L-氨基酸脱氨。本研究从奇异变形杆菌中分离出两种L-氨基酸脱氨酶,其中一种具有较高的脂肪族L-氨基酸和芳香族L-氨基酸活性,主要是L-苯丙氨酸;另一种脱氨酶可降解的L-氨基酸较少,主要是L-组氨酸。本研究从P.mirabilis KCTC 2566中分离、克隆并表达了一种次级氨基酸脱氨酶,并成功分析了其特征,命名为Pm1。将Pm1推测序列与其同源序列进行比对可知Pm1与P.vulgaris的L-氨基酸脱氨酶(LAD)具有很大相似性(96%);但与Pma的同源性相对较低(72%),Pma与LAD和Pm1相似,都具有L-组氨酸脱氨酶活性,这表明Pm1属于次级氨基酸脱氨酶。Pm1的Vmax和Km值分别为119.7μg苯丙酮酸/(mg.min)和31.55mmol/L苯丙氨酸,低于Pma的Vmax和Km值。Pm1可能对咪唑丙烯酸和α-酮戊二酸等商业材料的工业化生产起到一定的作用。     

精子特异同工酶乳酸脱氢酶－x（LDH－x）的研究概况

睾丸匀浆除包括常见的５种ＬＤＨ同工酶外，在ＬＤＨ３和ＬＤＨ４之间还有特异的ＬＤＨ－ｘ．ＬＤＨ－ｘ存在于生精细胞和精子中，它是由包括同源单体Ｃ组成的四聚体。目前已完成对ＬＤＨ－ｘ基因的ｃＤＮＡ的分子离析和顺序测定，并确定其氨基酸顺序和分子量。ＬＤＨ－ｘ的动力学性质，如热稳定性、最适ｐＨ、Ｋｍ值及对抑制剂的反应等与ＬＤＨ均有明显的不同。ＬＤＨ－ｘ为评价人和动物精子正常与否以及受精能力好坏的客观指标。     

人红细胞胞浆液中腺苷脱氨酶的分离

腺苷脱氨酶是机体重要腺苷代谢酶之一,能催化腺苷嘌呤环上6-位氨基脱氨,从而生成肌苷的氨解反应,与腺苷激酶、5′-核苷酸酶及 S-腺苷同型半胱氨酸水解酶共同使机体腺苷水平保持相对稳定。文献报道人体组织中的腺苷脱氨酶分子有多种形式,其表观分子量分别为36000、114000、200000和298000。本文报告一种用亲和层析法,从人红细胞胞浆液中分离腺苷脱氨酶的新的简便快速方法。所采用的亲和层析胶,为 N~6-(6-氨己基)腺苷-Sepharose4 B 凝胶,是由N~6-(6-氨己基)腺苷与经溴化氰活化的 Sepharose4 B 胶偶联而成。人红细胞胞浆液中的腺苷脱氨酶,经两次亲和层析分离后,比活性提高了197倍,酶活性回收率为49%。高效液相凝胶排阻层析分析的结果表明,分离出的酶蛋白制剂含有表观分子量分别为36000、72000、114000和64000的四种蛋白质组分。其中前三种组分的表观分子量与文献报道基本相符。     

盐胁迫油菜根际中含假单胞菌（Pseudomonas spp.1）的氨基环丙烷-1-羧酸 (ACC) 脱氨基酶特征研究

When exposed to biotic or abiotic stress conditions,plants produce ethylene from its immediate precursor 1-aminocyclopropane-1-carboxylate(ACC),leading to retarded root growth and senescence.Many plant growth-promoting rhizobacteria contain the enzyme ACC deaminase and this enzyme can cleave ACC to form α-ketobutyrate and ammonium,thereby lowering levels of ethylene.The aim of this study was to isolate and characterize ACC deaminase-producing bacteria from the rhizosphere of salt-stressed canola(Brassica napus L.).Out of 105 random bacterial isolates,15 were able to utilize ACC as the sole source of nitrogen.These 15 isolates were also positive for indole acetic acid(IAA) production.Phylogenetic analysis based on partial 16 S rDNA sequences showed that all isolates belonged to fluorescent Pseudomonas spp.In the canola rhizosphere investigated in this study,Pseudomonas fluorescens was the dominant ACC deaminase-producing species.Cluster analysis based on BOX-A1R-based repetitive extragenic palindromic-polymerase chain reaction(BOX-PCR) patterns suggested a high degree of genetic variability in ACC deaminase-producing P.fluorescens strains.The presence of indigenous ACC-degrading bacteria in the rhizosphere of canola grown in saline soils indicates that these bacteria may contribute to salinity tolerance.     

哈密瓜转化植株的获得及移栽研究

利用农杆菌介导方法^[9]，将ACC脱氨酶基因^[10,12]导入新疆哈密瓜的两个品种：皇后和卡拉克塞(伽师瓜)。以5d的无菌子叶作为外植体，在浓度OD=0．4的菌液中侵染5～8min，共培养2d，经过脱菌、分化、继代及生根培养后，得到完整的抗卡那霉素转化植株。移栽试验表明，炼苗后经过水培的植株其成活率高，且后期生长较迅速。转化植株的生根及生长速度比对照植株慢。     

饲料蛋白和能量水平对克氏原螯虾生长和蛋白质代谢的影响

试验设计不同蛋白质和能量水平的9种试验饲料饲养克氏原螯虾,探讨饲料蛋白和能量水平对克氏原螯虾生长和蛋白质代谢的影响.结果表明:特定生长率随饲料蛋白和能量水平的升高而显著增加(P＜0.05),但260和300g/kg蛋白组间无显著差异(P＞0.05),15和17 kJ/g能量组间亦无显著差异(P＞0.05);肠蛋白酶活性...