双棘黄姑鱼IGF2 基因克隆及其在卵巢发育中的作用研究

运用RT-PCR和RACE技术,首次克隆了双棘黄姑鱼(Protonibea diacanthus)的IGF2 cDNA。双棘黄姑鱼IGF2cDNA全长842bp,其中开放阅读框为648bp,5′非翻译区为125bp,3′非翻译区为69bp。IGF2前体mRNA编码215个氨基酸,成熟肽为71个氨基酸残基的多肽。多重氨基酸比对结果显示,双棘黄姑鱼与其他鱼类IGF2氨基酸序列高度保守。同源性分析表明,双棘黄姑鱼IGF2氨基酸序列与同属鲈形目的斜带石斑鱼、金头鲷、罗非鱼同源性分别为95.8%、95.3%和91.2%。系统进化树结果与同源性分析结果相似,双棘黄姑鱼IGF2基因首先与同属鲈形目的斜带石斑鱼、金头鲷、罗非鱼类聚,再与虹鳟、牙鲆、黄颡鱼的IGF2和斑马鱼IGF2b基因聚为一支,最后与斑马鱼IGF2a类聚为鱼类IGF2基因。组织分布结果表明,IGF2基因在双棘黄姑鱼各组织中表达广泛。RT-PCR结果显示,双棘黄姑鱼卵巢成熟期和退化期的IGF2表达量显著高于发育期,推测IGF2的表达可能促进了双棘黄姑鱼卵巢的成熟。     

胆囊收缩素主动免疫产蛋鸡的营养生理效应研究

用胆囊收缩素(CCK)主动免疫产蛋鸡，研究产蛋鸡血清和卵黄中CCK特异性抗体的产生规律及不同CCK免疫剂量对产蛋鸡生产性能和胰腺、胆囊发育及内分泌激素的影响。结果显示：用CCK-8主动免疫产蛋鸡，可以提高血清和卵黄CCK抗体水平，降低血液中CCK水平；CCK抗体的产生量在第1次加强免疫后即可接近高峰，第2、第3次加强免疫可维持较高的抗体水平。CCK主动免疫产蛋鸡后，对蛋鸡胰腺、胆囊发育、胰蛋白含量以及蛋鸡体内的生长激素、胰岛素和瘦素水平均没有显著影响，同时对蛋鸡采食量和料蛋比等生产性能也没有显著影响。用CCK主动免疫产蛋鸡，在不影响蛋鸡正常生理功能的同时，可以获得含特异性CCK抗体的卵黄。     

微量元素铜对软骨细胞胰岛素样生长因子mRNA基因表达的影响

分离培养仔猪关节软骨细胞，从中提取总RNA，采用RT-PCR法扩增出关节软骨细胞中胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF—Ⅰ)的cDNA，与pMD18-T载体相连，转化JM109大肠埃希氏菌，提取质粒，经鉴定，所扩增的片段为目的片段。在此基础上培养仔猪关节软骨细胞，并在培养液中添加不同水平的铜，分别在第0、12、24、48h收集软骨细胞，提取总RNA，采用RT—PCR法扩增出IGF—Ⅰ的cDNA，以β-actin为内参，用凝胶分析系统对扩增出的cDNA进行扫描分析，计算IGF—Ⅰ mRNA基因表达的相对水平。结果，在细胞培养液中添加不同水平的铜能促进软骨细胞中IGF—Ⅰ mRNA基因表达，其中以铜浓度31．2μmol／L的效果最好。表明铜对软骨细胞的增殖作用是通过促进IGF—Ⅰ mRNA的表达来实现的。     

分别阻断α和β-AR对豚鼠胰岛素低血糖休克的影响

在 30IU/kg的剂量下豚鼠的胰岛素低血糖休克率为 6 6 .6 7% ,出现休克的潜伏期为 (16 5 .1± 4 7.5 8)min。用心得安阻断 β-AR后其休克率增加到 95 .6 5 % (P <0 .0 0 5 ) ,潜伏期缩短到 (118.3± 33.7)min(P <0 .0 2 5 )。用酚妥拉明阻断α一AR后 ,其休克率 5 3.33%和潜伏期 (15 5 .5± 32 .88)min ,均无显著变化 (P >0 .0 5 )。结果说明阻断β-AR可显著加速豚鼠胰岛素低血糖休克的发生 ,而阻断α-AR无影响     

人胰岛素B、C、A链基因定点突变及表达载体的构建

采用定点突变技术,将组成人胰岛素原基因的C、A两条肽链进行了PCR突变连接,构建了人胰岛素C、A突变基因。采用T-A法将PCR产物B、CA克隆到T载体,分别构建了中间体pHB和pHCA,其测序结果与GenBank公布的一致。应用BamH I和Sse8387 I对pHB和pHCA进行双酶切,然后将回收纯化的片段进行定向连接,构建了重组质粒pHBCA,酶切分析证实重组质粒pHBCA构建成功。     

胰岛功能测定与β细胞总量分析

胰岛β细胞总量分析有助于准确评价胰岛功能,监测疾病的发展,评价药物治疗效果,经典的形态学分析方法限制了胰岛β细胞总量分析的应用。研究提示,胰岛功能与胰岛β细胞总量存在相关性,通过β细胞功能分析可以估计胰岛β细胞总量。在不同程度胰岛损伤的实验动物和临床患者进行的一系列研究表明,静脉精氨酸引起的急性胰岛素反应(AIRarg)和最大急性胰岛素反应(AIRargMax)显著相关于胰岛β细胞总量,r值均在0.80左右。通过测定AIRarg和AIRargMax,可以非侵入性地定量分析胰岛β细胞总量,也为建立人体内BCM估计的数学模型奠定基础。     

持续气道正压通气治疗阻塞型睡眠呼吸暂停低通气综合征合并2型糖尿病的疗效观察

目的通过观察持续气道正压通气（CPAP）治疗对合并2型糖尿病（T2DM）的阻塞型睡眠呼吸暂停低通气综合征（OSAHS）患者的胰岛素抵抗（IR）的影响。方法 46例合并T2DM的OSAHS患者随机分为2组,对照组（22例）行保守治疗,而实验组（24例）加用CPAP治疗。观察所有患者治疗前及治疗后1、3、6个月的临床指标变化,采用稳态模式评估（HOMA）指数评价IR。结果实验组患者治疗1个月后,其最低SaO 2水平明显高于治疗前及同一时段的对照组（P〈0.01）;治疗3个月后,其呼吸暂停低通气指数明显低于治疗前及同一时段的对照组（P〈0.01）;治疗6个月后,其空腹胰岛素及HOMA水平明显低于治疗前及同一时段的对照组（P〈0.01）。结论长期CPAP治疗可显著改善合并T2DM的OSAHS患者的IR。     

家蚕胰岛素受体类似基因挖掘及在限食模型中的表达特征

家蚕素是家蚕胰岛素相关肽,与其受体(IR)结合激活胰岛素信号转导(IIS)途径。利用生物信息学方法,挖掘出具有胰岛素受体类似结构域的家蚕基因Ir-lp,其ORF长2 658 bp,编码885个氨基酸残基,蛋白质分子质量100.3 kD,pI为6.93,与果蝇等昆虫的同源蛋白保守区域高度一致,NJ法分子进化分析显示家蚕IR-LP与昆虫胰岛素受体相关蛋白同源,但是家蚕Ir-lp编码蛋白缺少胰岛素受体酪氨酸激酶催化结构域,基因表达特征也与已知的家蚕Ir有显著差异。建立家蚕限食模型,调查限食后家蚕8个组织中Ir-lp与Ir表达变化的差异,探讨Ir-lp基因与IIS途径的关系,结果显示长期限食使得Ir-lp与Ir在脂肪体、性腺和表皮中上调表达,在马氏管中下调表达,其中Ir-lp的表达量变化幅度较大。综合分析,IR-LP可能在家蚕胚胎期、蛹期、蛾期等特定发育时期通过与IR竞争结合家蚕素来有效调控能量利用效率。     

胰岛素、胰高血糖素对体外培养肝细胞DGAT2mRNA的影响

为阐明神经内分泌因子胰岛素、胰高血糖素在奶牛脂肪代谢过程中的调控作用,用荧光定量PCR方法检测胰岛素、胰高血糖素对肝细胞二酰基甘油酰基转移酶（DGAT2）mRNA丰度的影响。结果表明低浓度的胰岛素能促进脂肝细胞内DGAT2mRNA的表达;胰高血糖素抑制脂肝细胞内DGAT2mRNA表达。由此证明：胰岛素和胰高血糖素能直接调控肝细胞中的DGAT2基因mRNA的表达。