牛羊胎盘免疫调节因子的提取及对PANC-Ⅰ增殖和迁移影响的比较

胎盘免疫调节因子(placenta immunoregulating factor,PF)是从胎盘提取的小分子多肽,对病毒性疾病、免疫缺陷疾病及恶性肿瘤等具有潜在的临床应用价值.为检测牛(Bos taurus)和绵羊(Ovis aries)胎盘免疫调节因对人(Homo sapiens)胰腺癌细胞(pancreatic cancer cells-Ⅰ,PANC-Ⅰ)增殖与迁移的影响,本研究对从屠宰场获得的牛和绵羊胎盘进行分离,利用双酶水解法制备PF,将质量浓度为100～2 000 ng/mL的牛、羊PF作用于体外培养的PANC-Ⅰ细胞,以3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧甲酯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium,MTS)法观察细胞增殖抑制率,应用流式细胞技术检测其对PANC-Ⅰ细胞周期的影响.并利用Transwell迁移实验检测添加PF对PANC-Ⅰ细胞迁移能力的影响,同时通过实时荧光定量PCR法检测肿瘤抑制基因(tumor suppressor gene,PS3)和细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子1A基因(cyclin-dependent kinaseinhibitor 1A,P21)的表达情况.结果显示,17.11 g绵羊胎盘制得0.588 mg PF,6.61 g牛胎盘制得0.312 mgPF,胎盘质量与所得PF的质量比约为20 000∶1.在体外培养的PANC-Ⅰ细胞培养液中添加PF,从形态上观察,牛羊PF对PANC-Ⅰ细胞没有明显的影响.绵羊PF处理后PANC-Ⅰ细胞增殖抑制率为9.75％～22.89％,牛PF处理后PANC-Ⅰ细胞增殖抑制率为-3.81％～23.56％,增殖抑制率最显著的绵羊PF浓度为500 ng/mL,牛PF浓度为1 000 ng/mL.绵羊PF在浓度为500 ng/mL时,PANC-Ⅰ细胞的PI和SPF最低,而牛PF各浓度下的胰腺癌细胞增殖指数(proliferation index,PI)和增殖活性(S-phase fraction,SPF)没有明显的变化.同时,牛羊PF对PANC-Ⅰ细胞的迁移能力无显著影响.牛羊PF使PANC-Ⅰ细胞P53表达上调而P21表达下调.上述结果表明,在一定浓度下,PF对体外培养的PANC-Ⅰ细胞增殖有负调控作用,且牛羊胎盘免疫调节因子对胰腺癌细胞的影响不同,可能因为其存在的活性成分有区别.本研究为胰腺癌的治疗提供了新的思路.     

奶牛繁殖障碍疾病的影响因素及防治措施

奶牛产后的子宫内膜炎、乳房炎、肢蹄病等疾病主要通过影响排出卵子的质量和促性腺激素、妊娠早期子宫腺体的分泌状态而对繁殖功能造成影响。高产奶牛围产期的能量负平衡会造成体内胰岛素、胰岛素样生长因子-I、雌二醇、孕酮的分泌量减少以及LH的脉冲频率下降，从而影响卵巢的发育，对繁殖性能造成影响。早期胚胎的发育则易受到孕酮分泌量、胚胎生长速度、干扰素tau分泌量以及子宫PGF2α分泌状况的影响。此外，奶牛易受霉菌毒素以及细菌、病毒、寄生虫等传染性因素的影响而引发流产。     

如何提高母猪受孕率与产仔数

在常规饲养管理条件下．母猪平均每年只能产仔1．8-2窝。要提高良种母猪的受孕率和产仔数，不仅取决于母猪的优良品种和生产性能．而且取决于良好的饲养管理。从而保证母猪的正常发情、配种、胚胎着床、生长发育和顺利产子，以减少死胎和流产，增加活仔数。在生产实践中，应抓住以下几个方面的关键技术环节。     

浅谈妊娠母猪胚胎与胎儿死亡的原因

母猪每次排卵在20粒左右,卵子受精率在95%以上,而母猪产活仔猪数大约在10头左右,母猪所排出的卵子,大约1/2能正常发育为活仔猪。造成胚胎与胎儿在体内死亡的原因,有以下几个方面：     

通过花药漂浮培养提高花椰菜小孢子胚胎发生率

通过花药漂浮培养,成功地诱导两个秋花椰菜基因型的小孢子胚胎发生.在液体培养基与固、液体双层培养基上,小孢子胚胎产量相仿,但后者褐色胚产生较多.在液体培养基中加入62.5mg/L的硝酸银对诱导小孢子胚胎发生效果较好.试验结果表明,采用花药漂浮培养方法可以明显提高花椰菜小孢子胚产量.     

关于优质肉羊冷冻胚胎移植应用技术研究

关于肉羊冷冻胚胎移植应用技术,其核心内容是研究冷冻胚胎处理的最佳时间、处理方法、影响移植效率的因素等方面,从而提高移植受胎率。本文分析了优质肉羊冷冻胚胎移植应用技术,获得了相关的数据,以期为胚胎移植工作者提供参考,提高冷冻胚胎移植技术水平,节省大量的人力与物力,推动肉羊行业生产开发,促进国家经济的发展。     

Effects of Donor Cells Treated with Egg Extracts on the Development Competence of Cloned Embryos

Japanese Balck cattle fetal fibroblasts (JBCFF) were induced with Xenopus leavis egg extracts and somatic cell nuclear transfer (SCNT) was carried out with the reprogrammed JBCFF as donor cells in order to investigate their effects on SCNT efficiency.Three samples of egg extracts were acquired from different Xenopus laevis.The protein contents and kinds in extracts were evaluated with BCA Protein Quantification Kit and SDS-PAGE.Concentration of Digitonin to permeabilize JBCFF was optimized and assessed with PI staining.Reprogrammed cells treated with egg extract were used as donor in SCNT.Additionally the reconstructed embryos were activated with ionomycin+6-DMAP and A23187+6-DMAP to compare their effects on the development competence.The protein contents of extracts samples were 56.2255,64.6570 and 71.2158 μg/mL,respectively,the each extract had the same composition about 40-55 and 70-100 ku.The optimal concentration of Digitonin was 7 μg/mL and the permeabilization rate was 55.44%.After extracts treatment and continuous culture for 6-7 d,JBCFF formed well-defined colony structures.No significant composition difference was found in rates of fusion (92.83% vs 96.04%),cleavage (89.64% vs 89.78%) and blastocyst formation (24.06% vs 23.12%) of cloned embryos when the colony cells and JBCFF without extracts treatment were used as donor cells (P>0.05).Similarly,the two activation methods had no significant effect on the developmental competence of cloned embryos (cleavage rate 92.16% vs 92.28%,blastocyst rate 23.21% vs 24.18%).Conclusively,Xenopus leavis,egg extracts could induce JBCFF reprogramming to a low differentiated state.However donor cells with reprogramming partially could not improve the development of cloned embryos and its mechanism requires further research.     

进口荷斯坦牛胚胎的移植效果与遗传物质分析

为了提高荷斯坦牛养殖业生产水平及牧场奶牛遗传品质,试验采用进口荷斯坦牛胚胎移植本地奶牛的方法,进行了受体选择、冻胚移植、基因组检测等技术实施。应用SPSS19.0软件,对2019-2020年的胚胎移植记录及产犊记录进行分析。结果表明,进口冻胚移植的妊娠率为53.11%,达到国内先进水平;秋季移植的妊娠率高于春季和夏季,春季进行胚胎移植的公犊初生重显著高于秋季（P<0.05）,春季和夏季进行胚胎移植的母犊初生重极显著高于秋季（P<0.01）;受体牛为青年牛的妊娠率最高,为54.44%,青年牛进行胚胎移植的公犊初生重高于成年母牛（P>0.05）,成年母牛进行胚胎移植的母犊初生重极显著高于青年母牛（P<0.01）;2020年进口胚胎移植后代的遗传品质均高于2019年的牧场奶牛。本研究对甘肃地区进口荷斯坦牛胚胎的移植效果及所产后代的遗传品质做了系统的分析,为将来筛选出后备核心高产母牛和制定育种方案奠定了基础。     

羊体外胚胎高效生产技术研究现状

体外胚胎生产技术作为胚胎工程技术的基础,在提高繁殖潜力、加速良种繁育等多方面具有重要意义,包括卵母细胞采集、体外成熟、体外受精、体外胚胎培养等技术。文章主要介绍羊体外胚胎高效生产技术研究现状,分析卵母细胞体外成熟、体外受精、体外胚胎培养影响因素,并提出了羊卵泡的预测标记、卵母细胞新型质检手段、模拟羊体内环境的培养体系,以期为羊卵母细胞体外培养技术的研究及在胚胎高效生产中的应用提供参考。     

裸子植物体细胞胚胎发生和人工种子的研究

该文介绍了一种作为森林种子的大规模增值的有效方法－－裸子植物体细胞胚胎发生和人工种子的研制。其内容包括：（１）胚性愈伤组织的诱导与保存；（２）影响体胚发生的因素；（３）体胚的发育与成熟；（４）大规模培养体胚；（５）成熟体胚的干化、包理与人工种子生产；（６）体胚的萌发和转换。最后对人工种子的应用前景进行了讨论。