灵芝多糖的提取纯化及其免疫活性

【目的】从灵芝孢子粉中提取纯化多糖,研究灵芝多糖对小鼠细胞免疫功能的影响,为灵芝开发利用提供试验依据。【方法】利用水煮醇沉法从灵芝孢子粉中提取粗多糖,经反复冻融、Sevag法脱蛋白和Sepharose CL-6B柱层析,纯化得灵芝多糖(GLP)。通过HPLC鉴定GLP的纯度,G.C.分析其单糖组成。采用MTT法、中性红试验、Griess法、比色法和ELISA法,分别检测GLP对小鼠脾淋巴细胞增殖、腹腔巨噬细胞吞噬功能、NO产量和iNOS活性以及TNF-α产量的影响。【结果】GLP为白色粉末,分子质量为51ku,HPLC分析GLP为单一狭窄对称峰,其单糖组成为葡萄糖(Glc)和半乳糖(Gal),二者物质的量之比为16.8∶1。GLP能够刺激小鼠T淋巴细胞增殖,并呈现剂量依赖关系;当GLP质量浓度达到100μg/mL时,能显著增强腹腔巨噬细胞的吞噬能力,提高其分泌iNOS的活力和NO的生产量;同时,当GLP质量浓度≥200μg/mL时,能显著促进腹腔巨噬细胞分泌TNF-α的能力,具有剂量依赖性。【结论】GLP能够增强小鼠免疫细胞活性,有望成为重要的生物免疫调节剂。     

中药制剂对小鼠耐力及免疫器官指数影响

为了探索中药制剂对动物免疫机能的影响,将6种中药提取物复方免疫增强剂A、B、C、D、E、F按高、中、低(1、2、3)3个浓度分别饲喂3-4周龄的昆明小鼠30d。每组随机挑选10只,分别进行小鼠耐力及免疫器官指数等指标的检测。结果表明,各组小鼠游泳时间均显著增加;F1实验小鼠的免疫器官指数显著增加;E3实验小鼠的碳粒廓清指数K显著增加;B3实验小鼠的补体总活性CH50显著增加;经统计学软件SPSS11.5单因素方差分析有显著性差异(P0.05)。提示6种中药制剂均能增强小鼠的非特异性免疫力。     

雏鸡抗艾美耳球虫免疫血清对其腹腔巨噬细胞吞噬子孢子和裂殖子的影响初探

当在含有20%热灭活雏鸡抗艾美耳球虫免疫血清的培养基中加入巨噬细胞培养物后,30～120 min内,可以见到巨噬细胞对子孢子和裂殖子的吞噬作用增强,表现为吞噬子孢子和裂殖子的巨噬细胞数增多,和巨噬细胞中的子孢子和裂殖子数量要增多。同时可以观察到吞噬作用前,粘附在巨噬细胞表面的子孢子和裂殖子数量亦比对照组多.巨噬细胞的吞噬作用可以被番木瓜蛋白酶所阻断,表明吞噬作用与血清中 IgG 与寄生虫形成免疫复合物后与巨噬细胞的受体结合有关.子孢子在非灭活的新鲜血清组的存活率低于灭活血清组.在非灭活血清组约有90%的子孢子有萎缩肿胀,或空泡等现象.     

预防性给予生物活性肽对巨噬细胞抵御LPS刺激的调节作用

预防性给予巨噬细胞(RAW264.7细胞)不同浓度的生物活性肽Gln-Glu-Pro-Val(QEPV)后,用脂多糖(LPS)刺激细胞,通过检测细胞因子表达和炎性蛋白基因转录,观察生物活性肽QEPV对细胞抵御LPS刺激的调节作用。结果表明,0.1g/L的QEPV有显著的促进细胞增殖作用,0.5g/L浓度以下的QEPV对RAW264.7细胞无增殖抑制作用。0.5g/L QEPV预处理RAW264.7细胞后,用LPS刺激细胞,其IL-6、IL-12等促炎细胞因子的分泌降低,抗炎细胞因子IL-10分泌提前,分泌量增加,COX-2、iNOS基因的转录水平降低,说明乳源性生物活性肽QEPV对RAW264.7细胞抵御LPS刺激起正向调节作用。     

鲇鱼（Silurus asotus）头肾中含色素的巨噬细胞集结的发生

以实验诱导方法研究了鲇鱼头肾中含色素的巨噬细胞集结（PMA）的发生。结果表明鲇鱼头肾中巨噬细胞（mΦ）存在不均一性,含色素的巨噬细胞（PM）是由网状／纤维状mΦ经过梭状mΦ、圆形红色mΦ和圆形黄红色mΦ等中间阶段发育而来的,实际上是一种已丧失吞噬功能的衰老mΦ,PMA     

干扰素在兽医临床的应用

正干扰素具有广谱的抗病毒活性,它是一种类似于多肽激素的细胞功能调节物质,属于细胞因子,有一定种属特异性。兽用干扰素近几年发展迅速,利用基因工程生产的干扰素已经广泛应用于禽、猪、犬等动物病毒性疾病的预防和治疗。1干扰素作用机理动物感染病毒或是在诱导剂的刺激下,淋巴细胞、巨噬细胞、体细胞会产生干扰素。干扰素既可抑制RNA     

不同副猪嗜血杆菌菌株对吞噬作用的不同敏感性

副猪嗜血杆菌寄生于健康猪的上呼吸道,但是具有致病性的菌株可以引起以纤维性浆膜炎为特征的全身性感染,即通常所说的格拉泽氏病。由于还不清楚副猪嗜血杆菌的致病机制,因此不能完全清楚了解所观察到的副猪嗜血杆菌菌株之间的毒力变异。在感染的过程中,副猪嗜血杆菌必须比肺的防御细胞（包括肺泡巨噬细胞）存活的时间长才能导致发病。通过对来自不同临床背景的菌株进行分析,笔者发现不同菌株对吞噬作用的敏感性不同。从健康动物鼻中分离得到的菌株能被猪肺泡巨噬细胞有效吞噬,而从具有全身症状的动物中分离得到的菌株对此作用具有抵抗性。对敏感性菌株的吞噬作用是通过不依赖特殊受体的机制产生的,这些特殊的受体包括肌动蛋白丝和微管。在本研究中所有被检测的分离自具有全身症状的猪的菌株中,在与PAM的相互作用后可观察到有明显的荚膜,这表明在抗吞噬作用中表面结构发挥了一定的作用。然而,尽管发现在分离自具有全身症状的猪的菌株之间的微管抑制作用有不同的效应,抗吞噬作用的其它机制还有待研究。     

牛外周血单核巨噬细胞的分离、培养与鉴定

试验旨在为深入研究单核巨噬细胞的生物学特性和免疫学功能提供材料.应用牛淋巴细胞分离液从牛外周血中分离牛外周血单个核细胞,用含10％胎牛血清的RPMI 1640营养液培养5d,在倒置显微镜下观察细胞形态,采用流式细胞术检测单核巨噬细胞表面特征性标志CD14.结果表明,获得的贴壁细胞具备巨噬细胞的形态学特征及免疫表型.通过形态学观察和流式细胞术鉴定可知,该试验成功获得了牛外周血单核巨噬细胞.     

旋毛虫成虫丝氨酸蛋白酶对S774A.1巨噬细胞的毒性作用

为探究旋毛虫成虫排泄分泌抗原(ES)中丝氨酸蛋白酶对宿主免疫调节作用,用PCR扩增出旋毛虫成虫期特异性丝氨酸蛋白酶基因Zh68,克隆至表达载体pET28a,转化到大肠埃希菌BL21( DE3),经诱导表达后的重组蛋白免疫接种动物获取抗血清.将抗体封闭前后的ES分别作用于S774A.1巨噬细胞,CCK-8检测巨噬细胞的增...     

鸡胚原代肺泡Ⅱ型上皮细胞的分离培养与鉴定

[目的]本试验旨在建立一套稳定的鸡肺泡Ⅱ型上皮细胞分离、纯化和培养技术,为深入研究鸡舍空气污染物对鸡肺泡功能影响提供体外研究模型.[方法]采用Ⅰ型胶原酶对16日龄鸡胚的肺组织进行消化,经过差速离心和差速贴壁法分离细胞,采用鸡免疫球蛋白G(IgG)免疫吸附法纯化细胞,再利用免疫荧光检测和碱性磷酸酶进行细胞鉴定.[结果]培...