奶粉中阪崎肠杆菌检测方法的比较研究

奶粉中的阪崎肠杆菌对人类的危害性很大,采用荧光PCR检测法、传统检验法和FDA法3种不同的检测方法对贝因美A婴儿奶粉进行了检测,将检测结果进行比较分析得出,荧光PCR检测法所用时间最短,灵敏度较高。     

一株产胞外邻苯二酚-2,3-双加氧酶菌种的筛选及鉴定

为了筛选得到一株产胞外邻苯二酚-2,3-双加氧酶的芘降解菌株,以新疆克拉玛依石油污染土壤为样品源,采用芘平板升华法,筛选具有多环芳烃降解能力的菌株。利用显色反应及酶促反应对菌株所产胞外邻苯二酚-2,3-双加氧酶进行定性定量试验并对其进行形态学观察、BIOLOG GENⅢ微孔板鉴定及16S rRNA序列分析。通过单因子影响试验和正交试验对菌株的生长特性及最佳降解条件进行了初步探讨。结果表明:芘降解菌株W39能分泌胞外邻苯二酚-2,3-双加氧酶,且经芘诱导后,产酶能力提高了3倍;经鉴定,菌株W39为阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae);最适培养条件:35℃,p H 7.0,芘浓度50 mg/L。可见,邻苯二酚-2,3-双加氧酶是降解芘的关键酶之一,可对其进行进一步研究。     

2-甲基异茨醇降解菌阴沟肠杆菌Z5的分离鉴定及BAC文库的构建

从采集到的污水样品中分离得到1株高效降解2-甲基异茨醇(2-methylisoborneol,2-MIB)的菌株Z5,通过16S rDNA序列分析,鉴定为阴沟肠杆菌(Enterobactercloacae)。该菌在以2-MIB为唯一碳源的培养基中能正常生长代谢。经气相色谱-质谱分析,发现该菌对2-MIB的降解率高达89.7%。同时,测定了Z5在不同质量浓度2-MIB中的生长情况,结果表明:当2-MIB质量浓度为16μg/L时,其生长状况与在LB中最为接近。为了克隆降解2-MIB关键酶的编码基因并进一步研究其降解途径,本研究构建了E.cloacaeZ5的全基因组BAC文库,该文库覆盖了大约8倍的基因组,共计810个转化子,外源片段平均大小为40 kb。     

污水处理厂耐四环素乳糖发酵型肠杆菌及四环素抗性基因的研究

采用传统PCR法分析了不同季节城市污水处理厂进水、活性污泥和出水中耐四环素乳糖发酵型肠杆菌(TR-LFE)和乳糖发酵型肠杆菌(LFE)所含四环素耐药基因(tet-R基因)的多样性和数量。结果表明,在分离得到的528株TR-LFE和LFE中含有tet(A)、tet(B)、tet(C)、tet(D)、tet(E)、tet(M)、tet(G)和tet(X)等tet-R基因,检出比例为0~85.71%不等。     

阴沟肠杆菌（Enterobacter closcae）对乐果降解特性的研究

从福建省福农生化有限公司排污口的土壤中筛选到一株对乐果有较好降解效果的菌株阴沟肠杆菌,为了使该菌能更好的应用于乐果残留污染的治理当中,采用室内培养方法,对该菌降解乐果的作用因素进行研究.结果表明,菌降解乐果的最佳温度为35℃、pH为8.0、装液量50 mL·250 mL-1、摇床振数180 r·min-1、C源为果糖、N源为酵母浸膏、接种苗OD265为0.065、底物浓度为200 mg·L-1,对应的降解率在28.84%～61.19%之间,采用L18(2×37)正交法及DPS数理统计得出Cu2+、Fe2+对菌降解乐果有显著的促进效果,Cd2+、Zn2+则在溶液中含量低水平时促进降解,高水平时抑制降解;Mg2+、Ba2+、Mn2+、Pb2+等离子对菌降解乐果无促进作用.     

1株耐Cd细菌的分离、鉴定及其吸附特性研究

从长期受农药污染的土壤中分离筛选到1株可耐受重金属Cd的菌株,经形态观察、生理生化特性、16S rRNA基因序列和系统发育分析确定该菌株为路德维希肠杆菌(Enterobacter ludwigii),命名为EM1,为Cd污染水体及土壤的修复提供微生物菌株。在无机盐培养基中菌株EM1对Cd~(2+)的最适耐受质量浓度为50 mg/L,吸附Cd~(2+)的最适生长温度为35℃,最适pH值为6.0,在此条件下,其对Cd~(2+)的吸附率最大,为92%。电镜扫描结果表明,在吸附Cd~(2+)的过程中菌体表面分泌大量的胞外多聚物且菌体形态发生变化。红外光谱分析显示,Cd~(2+)胁迫条件下,菌体细胞壁结构并未发生变化,菌株吸附Cd~(2+)的过程主要与菌体表面的羟基、N-H、C-H、多糖中的C-O-C及酰胺基团有关。     

甘肃省某奶牛场肠杆菌性乳房炎主要病原菌的分离鉴定与耐药性分析

为查明甘肃省某奶牛场发生临床型奶牛乳房炎的主要病原菌并选择治疗用敏感药物,随机无菌采集了6份临床型病牛乳样和1份大罐乳样,采用划线分离、菌落形态观察、革兰染色镜检、生化鉴定及16S rDNA序列分析等方法进行细菌分离鉴定,同时采用K-B法测定主要分离菌株对抗菌药物的敏感性。结果表明,从临床型乳房炎乳样中分离鉴定出大肠埃希菌、芽胞杆菌、凝固酶阴性葡萄球菌(腐生葡萄球菌)3种细菌,其中大肠埃希菌的分离率最高,为66.67%;从大罐奶样中也分离出大肠埃希菌。药敏试验结果表明,大肠埃希菌对氨苄青霉素、阿莫西林、头孢噻吩、杆菌肽、红霉素均存在不同程度的耐药,耐药率为29%~100%;对诺氟沙星、恩诺沙星、氟苯尼考、头孢哌酮等药物敏感。说明此次牛场临床型乳房炎的主要病原菌是大肠埃希菌、葡萄球菌和芽胞杆菌,而且分离的大肠埃希菌具有多重耐药性。根据检测分析结果,给奶牛场提出针对性的防控措施,临床型乳房炎的发病率下降,病情得以控制。     

水貂克雷伯氏菌病的诊断

水貂克雷伯氏菌病于1947年Morris在美国首次报道。以后该病在世界各地蔓延。我国于1987年在东南沿海一些省份也发现了此病。发病率为3.95%,死亡率为56.16%。水貂不分年龄大小均易感。主要通过肉类工厂下脚料、水貂的粪便及饮水而传播。本病的病原为肠杆菌科、肺炎克雷伯民菌属中的肺炎克雷伯氏菌。临床的主要特征为脓肿和脓毒败血症变化,体温高达41℃。颈部出现肿胀,大的如肥猪的颈圈。背部和后肢也出现脓肿。     

阪崎肠杆菌单克隆抗体制备及ELISA检测方法的建立

试验旨在制备抗阪崎肠杆菌的单克隆抗体,初步建立其ELISA检测方法。以灭活的阪崎肠杆菌全菌体为抗原免疫BALB/c小鼠,筛选血清效价高的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,制备杂交瘤细胞,并用间接ELISA法选取阳性杂交瘤细胞,扩大培养后测定单克隆抗体的效价,进行特异性及抗体间的配对,使用mAb亚类检测试剂盒鉴定单克隆抗体的亚型,并利用得到的抗体建立双抗体夹心ELISA检测方法。本试验得到3株具有良好特异性能稳定分泌单克隆抗体的阳性细胞株5C10、2B6和Ab02,经两两配对,据阳性D_{450 nm}值及P/N值选择1：20000稀释的5C10作为包被抗体,1：40000稀释的Ab02作为酶标二抗,建立ELISA检测法,应用建立的方法与荧光定量PCR方法检测动物实验室保存的20份进出口送检奶粉样品,结果显示试验结果一致。本试验成功制备阪崎肠杆菌的单克隆抗体并建立其ELISA检测法,为大批量快速检测阪崎杆菌奠定了基础。     

克氏原鳌虾产ESBLs大肠杆菌的分离鉴定与耐药研究

为了解克氏原螯虾产ESBLs大肠杆菌的耐药流行情况,采集来自山东、江苏、浙江、湖北和辽宁五省共计198份活体克氏原螯虾肠道样品,采用头孢噻肟抗性选择性培养基培养、PCR方法和BD PhoenixTM-100全自动微生物鉴定/药敏系统筛选、鉴定产ESBLs大肠杆菌并检测其药物敏感性。结果显示,从198份克氏原螯虾样品中共分离获得107株产ESBLs大肠杆菌,分离率为54.0%。所有分离菌株对青霉素类、一代头孢和部分三代头孢菌素均耐药;对四环素类、氟喹诺酮类、氯霉素类和磺胺类药物的耐药率均在60%以上(65株);对氨基糖苷类药物耐药率较低;多重耐药(R≥3类)菌株所占比例为86.7%(96/107),且以5类(30%,31/107)和6类耐药(28%,30/107)为主。通过试验初步获得了克氏原螯虾产ESBLs大肠杆菌耐药水平的基础数据,为克氏原螯虾细菌耐药性防控和水产品公共卫生监测奠定基础。