胶乳增强免疫透射比浊法测定心肌肌钙蛋白Ⅰ的性能评价及其参考值范围的确定

目的 对血清心肌肌钙蛋白Ⅰ(cardiac troponin Ⅰ,cTnⅠ)测定试剂盒进行性能评价,了解其分析性能是否满足临床要求.方法 在全自动生化分析仪上建立胶乳增强免疫透射比浊法测定血清cTn1的方法,按照国家实验室认可及美国病理学家协会(College of American Pathology,CAP)认可要求,对cTn1测定方法建立本室的参考值范围.结果 该分析方法批内精密度高、低值分别为2.86％和4.06％,批间精密度高、低值分别为3.49％和5.13％；准确度相对偏差1.00％～3.50％；携带污染率为0.57％；最低检测限为0.092μg/L;线性范围在0.00～50.00μg/L,各项评价指标满足试剂所提供性能指标.本室cTnⅠ参考值范围0.00～0.86μg/L.结论 胶乳增强免疫透射比浊法测定cTn1,其精密度、准确度、携带污染率、线性范围、最低检测限及其他指标均符合临床实验室要求.     

主动脉内球囊反搏术治疗急性心肌梗死的疗效和安全性观察

目的观察主动脉内球囊反搏术（IABP）治疗急性心肌梗死（AMI）的疗效和安全性。方法 80例AMI患者随机分为IABP组和对照组,每组40例。两组均给予WHO规定的标准基础治疗方案及PCI治疗,IABP组在PCI前使用IABP治疗。观察治疗前后两组脑利钠肽水平、肌钙蛋白I水平、左心室舒张末期容积（LVEDV）、左心室收缩末期容积（LVESV）和射血分数变化、治疗后30d内主要心血管事件。结果与对照组比较,IABP的使用显著降低心肌梗死后1周脑利钠肽及肌钙蛋白I水平（P〈0.01）,缩小LVEDV和LVESV（P〈0.01或0.05）,提高LVEF（P〈0.01）,降低30d内主要心血管事件的发生率（P〈0.01）。结论 IABP的使用能改善梗死后心肌缺血程度、心室压力、容量负荷和心室重构,从而改善AMI患者的预后。     

镰形扇头蜱重组肌钙蛋白I抗蜱免疫保护效果的初步分析

为了评估镰形扇头蜱肌钙蛋白I（TroponinI,TnI）作为候选疫苗分子的潜力,应用肌钙蛋白I重组蛋白进行了抗蜱免疫实验。将重组蛋白按常规方法免疫新西兰兔,三次免疫后分别用若蜱、成蜱进行攻虫实验,观察其免疫保护效果。结果发现蜱的吸血行为受到一定的影响,与对照相比,若蜱和成蜱吸附率、饱血率、饱血体重和死亡率有显著差异,而在饱血时间上差异不显著,说明TnI基因的重组表达产物具有一定的免疫保护作用。     

镰形扇头蜱肌钙蛋白I基因的克隆及其分布

本试验从镰形扇头蜱半饱血雌蜱唾液腺cDNA文库的EST中筛选了1个含polyA尾的基因序列,经5LRACE方法得到该基因全长序列.经同源性比较,该基因预测的氨基酸序列与长角血蜱肌钙蛋白I(GI14041807)的同源性为84.47%,肌动蛋白结合位点位于147-167氨基酸处,且与长角血蜱肌钙蛋白I肌动蛋白结合位点完全相同,表明该基因是镰形扇头蜱肌钙蛋白I基因.以镰形扇头蜱基因组DNA为模板扩增到编码肌钙蛋白I的基因组序列.序列分析表明该序列不含内含子.RT-PCR分析表明该基因在镰形扇头蜱的卵及其幼蜱、若蜱、成蜱的壳、唾液腺和肠均有表达.     

电刺激对宰后牦牛肉ATP、calpain活力和细胞骨架蛋白降解的影响

为了研究低压电刺对牦牛肉ATP、Calpain活力和细胞骨架蛋白降解的影响及其嫩化机理,将24头甘南牦牛随机分为2组,每组12头,屠宰,按试验设计对宰后牦牛胴体进行电刺激(ES)(输出电压21V、功率50W、时间90s)和常规冷却排酸NES(0~4℃、风速0.5m/s)处理,并于0、24、72h测定牦牛背最长肌的ATP、calpain活力、糖原、剪切力值和细胞骨架蛋白降解情况.结果表明:宰后72hATP下降了14.97%,较NES组下降幅度达6.59%,ES显著提高了ATP的下降速率;宰后0h,ES组糖原较NES组低12.46%,加快了糖酵解速率;ES组在宰后0hm-calpain和μ-calpain较NES组活力分别提高了0.318U/mL和0.31U/mL,同时提高了m-calpain和μ-calpain活力,过早激活了μ-calpain;ATP与m-calpain有极显著的负相关性(P<0.01),而μ-calpain与糖原含量、剪切力三者相互之间有极显著的正相关性(P<0.01);低压电刺激极显著提高牦牛肉最终嫩度(P<0.01);电刺激在速度和数量上显著加速了Desmin和Troponin-T的降解,加快了牦牛肉成熟,缩短了成熟时间.     

CODEHOP设计简并引物克隆花羔红点鲑肌钙蛋白及其生物信息分析

本实验通过无性生殖的方法得到了花羔红点鲑肌钙蛋白(Tnc)基因,并在使用生物信息学资源和生物软件的条件下,通过CODEHOP的方法对特定的氨基酸序列设计简并引物,并对得出的结果进行同源性分析同时构建其相对系统进化树.结果表明:通过CODEHOP的方法所设计出的引物简并度较其他方法得到的引物简并度低,DNA熔解温度(Tm值)修改较方便,产物具有较强的特异性;肌钙蛋白具有高度的保守性,将肌钙蛋白基因片断做结果比对,其编码的氨基酸序列与斑马鱼同源性可达96％,与大西洋鲑Salmo salar同源性为92％,白斑狗鱼Esoxlucius同源性为92％,虹鳟Oncorhynchus mykiss同源性为91％,斜带石斑鱼Epinepheluscoioides同源性为91％,斑点叉尾鮰Ictalurus punctatus同源性为85％.     

牦牛肌钙蛋白Ⅰ基因家族的克隆及组织表达分析

为了克隆TNNI基因家族,预测其蛋白结构和功能,并分析其在牦牛不同组织中的表达差异,以0.5岁健康的类乌齐牦牛为试验材料,采用RT-PCR技术克隆牦牛肌钙蛋白Ⅰ基因家族的CDS区序列并进行生物信息学分析,利用实时荧光定量PCR技术检测TNNI基因家族各成员的mRNA表达水平。结果表明,TNNI1、TNNI2和TNNI3基因CDS区大小分别为564,549,639 bp,分别编码187,182,212个氨基酸残基。预测分析结果显示:TNNI基因家族编码的蛋白质均为偏碱性蛋白,蛋白结构不稳定,均无跨膜结构域,无信号肽,属非分泌型蛋白;二、三级结构均以α-螺旋为主,均含有肌蛋白超家族保守结构域。系统进化树分析表明:类乌齐牦牛TNNI1基因与水牛的亲缘关系最近,其次是绵羊、黄牛,与小鼠亲缘关系最远;TNNI2和TNNI3均与黄牛、水牛的亲缘关系较近,与其他亲缘关系较远。实时荧光定量PCR结果显示,TNNI1和TNNI2基因在臀肌中的相对表达量最高,且TNNI1基因在心脏、肝脏和肺脏中的表达量显著高于TNNI2基因(P0.05),TNNI3基因在心脏中表达量较高,而在肺脏、臀肌和肝脏中表达量低。     

CODEHOP法设计简并引物克隆鲫鱼肌钙蛋白C(TnC)基因及序列分析

本文结合生物信息学资源和生物软件的使用,针对特定的氨基酸序列设计简并引物,利用CODEHOP法设计简并引物克隆鲫鱼肌钙蛋白C(Tn C)基因,并构建系统进化树。证明该基因片段与其他鱼类Tn C基因具有较高的同源性,其中与斑马鱼同源性最高达到96%,与大西洋鲑、白斑狗鱼、虹鳟、斜带石斑鱼、斑点叉尾鮰的同源性分别为92%、92%、91%、91%、85%。研究表明,应用此种方法设计出的引物简并度相对较低,Tm值的修改较为灵活,产物特异性强。     

骨髓间充质干细胞对心梗大鼠Desmin和cTnT表达的影响

来源于Wistar大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)经淫羊藿苷(ICA)体外诱导处理,移植到心梗大鼠体内,研究心梗大鼠受损心肌的心肌结蛋白(Desmin)和心肌肌钙蛋白T(cTnT)的表达情况。把分别经ICA(10-7mol/L)和5-aza(10μmol/L)诱导24 h+1周的MSCs,按照4×106的密度植入心梗大鼠体内2周或4周,通过免疫组化检测心肌Desmin和cTnT的表达。与2周组比较,注射4周的心梗大鼠Desmin和cTnT表达更加理想。在体外经10-7mol/L浓度的ICA诱导24 h+1周的MSCs经尾静脉注射治疗4周,能更有效地修复急性心梗大鼠的受损心肌。