猫肥厚型心肌病生物标志物的应用现状和研究进展

肥厚型心肌病是猫常见的心脏疾病,目前其临床诊断和治疗管理均存在一定的挑战。生物标志物是近年来新兴的心脏病临床诊断工具,通常操作简便快捷,与心脏病常规诊断技术联合使用,可为疾病的诊断、监测和预后提供更多信息。本文归纳了心脏生物标志物在猫肥厚型心肌病诊疗中的应用现状和研究进展,旨在为生物标志物在猫肥厚型心肌病中的临床应用提供循证医学依据,为猫心肌病相关的新型心脏生物标志物的开发提供理论参考。     

青海湖裸鲤TNNI1和TNNI2基因克隆及其响应盐碱胁迫的表达研究

【目的】克隆青海湖裸鲤慢收缩骨骼肌型肌钙蛋白I基因(TNNI1)和快收缩骨骼肌型肌钙蛋白I基因(TNNI2),分析其在不同组织及盐碱胁迫环境下皮肤和腹侧肌肉组织中的表达水平,为揭示青海湖裸鲤生长缓慢及恢复青海湖裸鲤鱼类资源提供基础数据。【方法】以青藏高原特有鱼类青海湖裸鲤为研究材料,利用RACE技术克隆TNNI1和TNNI2基因全长cDNA序列,进行氨基酸序列同源性比对;利用实时荧光定量PCR法检测2个基因在青海湖裸鲤鳃、眼、脑、脾脏、肝脏、肠、肾、心、皮肤、腹侧肌肉组织的表达情况,以及盐碱胁迫下腹侧肌肉和皮肤组织中的表达规律。【结果】青海湖裸鲤TNNI1 cDNA序列全长为1 211 bp,其中开放阅读框540 bp,共编码179个氨基酸;TNNI2 cDNA序列全长为737 bp,其中开放阅读框531 bp,共编码176个氨基酸。序列同源性分析发现,青海湖裸鲤TNNI1氨基酸序列与安水金线鲃的同源性高达92.13%,TNNI2氨基酸序列与鲤鱼的同源性最高为92.61%。系统发育树结果显示,从TNNI1氨基酸序列来看,青海湖裸鲤与金线鲃属鱼类、鲫鱼、鲤鱼的亲缘关系较近;从TNNI2氨基酸序列来看,青海湖裸鲤与鲤鱼的亲缘关系最近,其次是鲫鱼和金线鲃属鱼类。TNNI1和TNNI2基因在青海湖裸鲤不同组织中均有表达,且在腹侧肌肉中相对表达量最高。盐碱胁迫条件下,TNNI1和TNNI2基因在肌肉组织中的相对表达量均显著下调;在皮肤组织中TNNI1的相对表达量极显著下调（P＜0.01）,而TNNI2极显著上调（P＜0.01）。【结论】成功克隆了青海湖裸鲤TNNI1、TNNI2基因全长;TNNI1、TNNI2基因在腹侧肌肉组织中高表达,表明其与肌肉组织发育密切相关;盐碱胁迫条件下TNNI1、TNNI2基因在腹侧肌肉组织中的表达均显著下调,提示2个基因表达量降低可能是青海湖裸鲤生长缓慢的重要因素。     

成果转化

正心肌肌钙蛋白I检测试剂盒项目简述:该项目中使用了一种新型纳米材料,这种新型纳米材料是在传统的胶体金表面涂敷功能化聚合物纳米层,这种纳米包裹的胶体金比传统的依靠电荷排斥作用维持稳定的胶体金具有更好的化学、生物稳定性和放大生产稳定性。本技术同时对表面纳米涂层进行化学改性,引入各类化学功能基团,并与生物分子如蛋白质,抗体形成稳定化学键定向标     

小儿急性病毒性心肌炎肌钙蛋白T的检测及其临床意义

目的：评价检测血清心肌肌钙蛋白T(cTnT)在小儿急性病毒性心肌炎中的临床价值。方法：急性病毒性心肌炎患儿30例并以20例正常人作对照，采用ELISA法测定血清cTnT，用速率法测定肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK—MB)、乳酸脱氢酶（LDH）、α-羟经丁酸脱氢酶(αHBD)和血清门冬氨酸基移换酶(AST)，2周后复检以上项目。结果：30例患儿血清cTnT浓度较正常对照组有显著升高(P＜0．01），治疗2周后cTnT浓度明显下降(P＜0．01)；血清cTnT与心肌酶谱比较，其阳性率增高也具显著性，且持续时间长，结论：急性病毒性心肌炎患儿血清的cTnT有显著升高，其检出率也明显高于CK—MB、LDH等酶类，且诊断窗口时间也长。     

棉铃虫类肌钙蛋白基因的克隆、原核表达纯化及其时空表达谱分析

为探索棉铃虫Helicoverpa armigera(Hübner)类肌钙蛋白基因HaCal的生理功能及其所编码蛋白的生物特性,采用PCR方法克隆了HaCal的开放阅读框(open reading frame,ORF)序列,借助在线软件对其进行生物信息学分析,通过原核表达技术诱导表达和纯化其编码的蛋白,并通过实时荧光定量PCR技术分析其在棉铃虫不同发育龄期和组织中的表达量。结果显示,HaCal的ORF序列长度为564 bp,编码187个氨基酸,理论分子量为20.52 kD,理论等电点为7.64。其保守结构域与Calponin家族一致,但不含跨膜区和信号肽,系亲水性蛋白。原核表达结果显示,融合蛋白大小与理论值一致,纯化获得了纯度较高的目的蛋白。HaCal在棉铃虫幼虫不同发育阶段和不同组织中均有表达,在6龄幼虫体内表达量最高,是1龄幼虫的2.34倍;在5龄幼虫中肠中表达量最高,是头部的257.14倍。表明棉铃虫类肌钙蛋白基因HaCal可能与棉铃虫的生长发育过程密切相关。     

长角血蜱甘肃株肌钙蛋白基因P27/30的克隆和序列分析

参照GenBank中长角血蜱致病性Okayama株肌钙蛋白P27/30基因的核苷酸序列,设计合成一对引物,从本实验室保藏的干净长角血蜱卵中快速提取总RNA,通过RT-PCR扩增出607 bp的肌钙蛋白基因,将其克隆于PGEM-T-Easy载体,对其进行序列分析,并推导出氨基酸序列,将这一序列与国内外已发表的长角血蜱肌钙蛋白基因进行比较分析。结果表明本实验室保藏的长角血蜱甘肃株与上述已发表的Okayama株核苷酸序列同源性为92.1%,氨基酸同源性为86%。长角血蜱甘肃株与Okayama株、四川孤雌生殖株的发育有一定差异。经RT-PCR分析表明,该基因在长角血蜱的卵、幼蜱、若蜱和饥饿成蜱这几个阶段均有表达。     

高敏肌钙蛋白检测在心血管疾病诊治中的应用

<正>急性心肌梗死(acute myocardial infarction, AMI)是一种临床常见危重症,通常由冠状动脉病变导致,在血液供应急剧减少或中断的情况下,冠状动脉心肌细胞缺氧性坏死,导致心脏功能受损^[1],如不能及时接受治疗将会危及患者生命。AMI传统诊断方法包括心电图和乳酸脱氢酶、肌酸激酶、肌红蛋白及肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzyme-MB,CK-MB)标志物检测^[2],     

镰形扇头蜱肌钙蛋白Ⅱ基因的克隆及其分布

本试验从镰形扇头蜱半饱血雌蜱唾液腺cDNA文库的EST中筛选了1个含polyA尾的基因序列,经5′-RACE方法得到该基因全长序列。经同源性比较,该基因预测的氨基酸序列与长角血蜱肌钙蛋白（GI：14041807）的同源性为84.47%,肌动蛋白结合位点位于147～167氨基酸处,且与长角血蜱肌钙蛋白肌动蛋白结合位点完全相同,表明该基因是镰形扇头蜱肌钙蛋白基因。以镰形扇头蜱基因组DNA为模板扩增到编码肌钙蛋白的基因组序列,序列分析表明该序列不含内含子。RT-PCR分析表明该基因在镰形扇头蜱的卵及其幼蜱、若蜱、成蜱的壳、唾液腺和肠均有表达。     

腺苷对大鼠心肌钙蛋白 I 及磷脂酰肌醇磷酸化的抑制作用

用差速离心及等密度梯度离心法从大白鼠心肌细胞分离收缩蛋白质及质膜,分别与[γ—~(32)P]ATP 保温以观察细胞成分的磷酸化,以及腺苷和腺苷类似物对磷酸化的影响。结果表明,在收缩蛋白质组分,~(32)P 主要参入肌钙蛋白 I(Troponin1,29000Da);在质膜组分,~(32)P 主要参入磷脂酰肌醇-4-一磷酸(Ptd Ins4P),亦即 TAP 使磷脂酰肌醇(PtdIns)磷酸化。腺苷对此两种磷酸化都有抑制作用,尤以对 Ptd Ins 磷酸化的抑制最强烈。cAMP 对肌钙蛋白 I 的磷酸化有剌激作用,这与文献报道相符。作者认为,腺苷和 cAMP 对肌钙蛋白 I 磷酸化的拮抗作用与腺苷和肾上腺素对心肌调节的拮抗作用有明显的相关性。鉴于近年发现,肌醇磷脂转换在调节细胞活动中起重要作用,腺苷对磷脂酰肌醇磷酸化的抑制作用可能有重要的生物学意义。     

慢性充血性心力衰竭患者血清心肌肌钙蛋白I和C-反应蛋白的变化

目的:探讨慢性充血性心力衰竭(CHF)患者心功能改善前后血清心肌肌钙蛋白I(cTnI)及C-反应蛋白(CRP)的变化及意义。方法:37例慢性充血性心力衰竭(NYHA分级Ⅲ~Ⅳ级)患者分别于入院d2和心功能改善至Ⅰ~Ⅱ级后抽取血清作cTnI、CRP测定。结果:治疗前患者血清cTnI阳性率54.1%,CRP超正常范围占78.4%。经治疗心功能改善后患者血清cTnI阳性率21.6%(P<0.01),CRP超正常范围占35.1%(P<0.01)。结论:部分慢性充血性心力衰竭患者心功能恶化时存在心肌损伤或坏死,此过程随心功能改善而改变,部分可能与其它因素有关。