玉米ZmPRR1-1基因启动子的克隆及序列分析

克隆玉米伪应答调控基因ZmPRR1-1启动子并对其序列进行分析,以期为深入研究ZmPRR1-1基因的调控机制及基因功能提供参考。以玉米黄早4的叶片为供试材料,参考已公布玉米自交系CML247基因组中ZmPRR1-1启动子的序列信息设计引物,克隆ZmPRR1-1基因的启动子,并利用生物信息学对启动子中的核心区域、顺式作用元件、转录因子结合位点和CpG岛进行预测分析。克隆得到长度约2 600 bp的ZmPRR1-1启动子,预测ZmPRR1-1启动子可能存在2个核心启动子区域,除了存在核心元件TATA-box和启动子增强元件CAAT-box外,还存在光响应、激素应答、胁迫响应等顺式作用元件。转录因子结合位点分析表明,ZmPRR1-1启动子区中预测包含ERF在内的6种转录因子家族,此外在启动子区域中预测存在4个符合限定条件的CpG岛区域。玉米ZmPRR1-1启动子区域存在丰富的顺式作用元件和转录因子结合位点,暗示ZmPRR1-1可能受到外界多种类型调控因子的调控并启动转录起始,且在多种调控网络中发挥功能。     

动物脂肪代谢与肥胖基因调节研究进展

动物脂肪代谢受到多种因素的调控,其中最重要的是基因调控.肥胖基因是近年来克隆的新基因,该基因表达产物瘦蛋白是反映体内脂肪含量和调节的重要信号因子,具有调节摄食行为,增加能量消耗和降低动物采食量的作用.文章就肥胖基因对动物脂肪代谢调节的关系进行了综述.     

不同绿肥防控烟草青枯病的机理

针对烟草青枯病[病原青枯菌(Ralstonia solanacearum)]对烟叶生产造成的危害,探索不同种类绿肥翻压对土壤青枯菌和微生物群落的影响,为生物防控烟草土传病害提供新的手段和方法。以适合西南烟区种植的15种绿肥为材料,利用盆栽生物模拟,筛选并验证能够抑制土壤中青枯菌数量的绿肥种类,采取超高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF/MS)、荧光定量PCR以及微生物高通量测序等技术,鉴定、分析绿肥根系分泌物主要物质种类和含量,并开展田间试验验证防控效果。结果表明：1)随着绿肥种植时间增加,土壤中青枯菌数量总体呈下降趋势,绿豆(Vigna radi)根系分泌物对青枯菌的抑制效果最明显,抑菌率达69.05%。2)二月兰(Orychophragmus violaceus)根系分泌物中的氨基酸总量最高,油菜(Brassica campestris)最低,绿豆的酪氨酸含量最高,比最低含量(油菜)高54.74%,二月兰的谷氨酸和丙氨酸含量明显高于其他绿肥,毛叶苕子(Vicia villosa)的丝氨酸含量比绿豆高33.19%。3)田间施用绿肥后,绿豆处理的青枯病防控率高达55...     

2015—2016年中国部分地区PBoV检测及遗传进化分析

为了调查2015—2016年中国部分地区猪博卡病毒流行情况,在我国各地中抽取了89份猪样本,用PCR方法对这些样本进行检测,并对其中有扩增阳性的产物进行基因序列检测,将测序结果进行对比分析,找出其中可能存在的同源性或遗传性证据.在89份检测样本中,检测出PBoV的样本42分,占比47.19％,其中山东地区的样本阳性率最...     

维氏气单胞菌flrB基因敲除株构建及其生物特性鉴定

维氏气单胞菌是一种常见的人鱼共患致病菌,为研究维氏气单胞菌中的flrB基因的功能,笔者通过扩增flrB基因上下游同源臂连接至pRE112质粒中,电击转化重组质粒至大肠杆菌WM3064,接合转入野生型维氏气单胞菌,在蔗糖压力下筛选、PCR和测序验证敲除菌株.结果表明,敲除flrB基因后降低生物膜的形成,但不影响维氏气单胞...     

84K杨PagMSBP1/2a基因对木质素合成的影响

【目的】膜类固醇结合蛋白(MSBP)是一类定位在细胞质膜上的类固醇受体蛋白,通过响应激素调节信号、参与类固醇代谢影响植物生长发育过程。研究杨树MSBP对生长发育过程的影响,尤其是对木材形成过程的作用,为杨树木材品质改良提供支撑。【方法】以拟南芥MSBP1蛋白序列在毛果杨、银腺杨84K基因组中进行同源序列比对,获取杨树MSBP的核苷酸和氨基酸序列,构建系统进化树并绘制基因结构图谱;利用qPCR分析杨树MSBP基因在84K杨顶芽、根、茎、叶中的相对表达量;在AspWood表达谱数据中分析同源基因在木材形成中的表达模式;构建35 S∷GFP-PagMSBP1/2a植物表达载体,通过农杆菌介导瞬时转化烟草叶片,激光共聚焦显微镜观察其亚细胞定位情况;构建35 S∷PagMSBP1/2a植物表达载体,利用农杆菌介导的叶盘法转化84K杨,通过震荡切片观察转基因和对照植株茎段木质部差异;采用乙酰溴法和间苯三酚染色法,分析转基因和对照植株的木质素含量以及木质素在杨树茎段维管组织中的分布。【结果】同源比对鉴定出杨树7个MSBP成员,根据进化关系和基因结构对杨树基因进行命名,其中与AtMSBP1、AtMSB...     

肉果类作物ULT基因的鉴定和表达分析

[目的]本文旨在鉴定具有代表性的肉果类作物中的ULTRAPETALA(ULT)基因,分析其序列特征以及表达模式,为研究ULT基因在肉果类作物果实发育中的功能奠定基础。[方法]运用生物信息学的方法,从全基因组水平对19种作物(包括13种肉果类作物)的ULT基因进行鉴定,分析其进化关系、蛋白理化性质、蛋白保守基序、外显子/内含子结构和启动子元件等;利用公共转录组数据,分析ULT基因在不同组织中的表达模式以及番茄SlULT1在3种果实成熟突变体中的表达情况;运用实时荧光定量PCR技术,分析番茄SlULT1在不同组织中的表达水平和对乙烯的响应。[结果]19个物种中有18个物种只含有1～3个ULT基因,而荠蓝有5个ULT基因。不同物种中ULT的蛋白保守基序和外显子/内含子组成非常相似。ULT基因启动子区域含有大量光、激素和非生物胁迫响应元件。ULT基因在不同物种的不同组织中均有表达,尤其是在肉果类作物果实中也有很高的表达。番茄中SlULT1的表达量随着果实的成熟逐渐增加,并且受乙烯的诱导;在番茄rin、cnr和nor这3种果实成熟突变体中SlULT1的表达受到抑制。[结论]ULT基因在物种进化中相对保守,ULT基因除了已知的调控根、茎、叶和花的发育之外,还调控肉果类作物果实的发育和成熟。在番茄中SlULT1通过RIN、NOR和CNR基因以及乙烯的调控来参与果实的成熟过程。     

豆类活性肽PA1b在大肠杆菌中的多拷贝串联表达

为构建能表达串联豆类活性肽PA1b(pea albumin 1 subunit b)基因的重组大肠杆菌,并进行诱导表达和产物纯化。通过合成PA1b基因,采用同尾酶技术构建1～4拷贝数的串联PA1b基因,分别克隆至pET32a(+)原核表达载体上,转化入大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,亲和层析纯化融合蛋白,肠激酶切除融合标签和切开串联体,获得单体PA1b肽。结果显示,大肠杆菌转化子中的重组质粒pET32a(+)-nPA1b(n=1～4)经PCR及测序验证正确,经1 mmol/L IPTG 25℃诱导8 h,均能以包涵体形式表达出重组融合蛋白。SDS-PAGE分析结果表明,串联拷贝数越多,融合蛋白中PA1b含量越高。Ni-NTA亲和纯化得到高纯度的4拷贝串联PA1b融合蛋白,经肠激酶充分酶切、超滤浓缩后获得重组PA1b多肽。获得了表达1～4拷贝串联PA1b基因的重组大肠杆菌,并通过酶解4拷贝PA1b融合蛋白制备了重组PA1b,为多拷贝法制备PA1b肽奠定基础。     

烟嘧磺隆对甜玉米糖酵解和三羧酸循环途径中关键物质的影响

为探明烟嘧磺隆对甜玉米生长过程中糖酵解、三羧酸循环(TCA)途径的影响,减轻其药害作用,以1对对烟嘧磺隆表现出不同耐药性的甜玉米姊妹系(耐药性甜玉米自交系HK301、敏感性甜玉米自交系HK320)为试验材料,研究烟嘧磺隆胁迫对甜玉米糖酵解和TCA途径的影响。结果表明,相较于耐药性甜玉米自交系HK301,敏感性甜玉米自交系HK320糖酵解途径的葡萄糖(GLU)含量、6-磷酸葡萄糖(6PG)含量、丙酮酸(PA)含量和己糖激酶(HK)活性显著升高。在TCA循环中,相较于HK301,HK320的苹果酸(MDH)含量、柠檬酸(CA)含量、草酰乙酸(OAA)含量、三磷酸腺苷(ATP)含量和磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)活性显著下降。由研究结果可知,烟嘧磺隆胁迫影响不同耐药性甜玉米的糖酵解途径和TCA途径的程度,研究结果可为揭示烟嘧磺隆胁迫下甜玉米幼苗的糖代谢途径提供理论依据。     

禽腺病毒4型湖北株的分离鉴定及其Fiber2蛋白在乳酸菌中的表达

为研究湖北地区禽腺病毒4型遗传进化情况及其Fiber2蛋白在乳酸菌中的表达情况,将采集于湖北省某养鸡场的病变组织样处理后接种至LMH细胞,分离出2株禽腺病毒,通过PCR鉴定和Hexon基因测序分析表明为禽腺病毒4型,并命名为HBJZ2021A和HBJZ2021B,遗传进化树分析结果表明,其与国内山东、浙江和北京等地区的毒株亲缘关系较近,处于同一进化分支。以其基因组DNA为模板扩增Fiber2基因并克隆至乳酸菌表达载体pNZ8148,通过酶切和测序表明成功构建了重组表达载体pNZ8148-Fiber2,并通过电转转化至NZ 9000乳酸菌,采用不同浓度梯度的Nisin进行诱导表达,SDS-PAGE及Western-Blot分析结果显示,成功在上清中表达了Fiber2蛋白。该研究结果为湖北地区禽腺病毒4型的流行情况及其口服疫苗的开发提供了参考依据。