HPLC-MSn法检测毛白杨CCR酶活及反应产物4-羟基肉桂醛类的制备

为更直观、便捷地研究木质素合成途径中CCR的酶学特性,从产物生成的方向来监测CCR的酶学特性。试题采取化学合成方法制备CCR的产物——4-羟基肉桂醛物质(香豆醛、松柏醛、咖啡醛)并利用HPLC进行纯化,液相色谱质谱联用仪(HPLC-MSn)进行鉴定,合成的4-羟基肉桂醛可作为HPLC-MSn技术研究CCR酶学特性时的标样。建立了一套HPLC-MSn技术检测CCR酶活的新方法,将毛白杨重组CCR蛋白在大肠杆菌中高效表达并利用亲和层析法获得电泳纯CCR蛋白,利用HPLC-MSn技术监测CCR酶对4种底物的酶学特性。结果显示,通过该方法能够监测到CCR底物的减少和产物的增加过程,为木质素合成途径中关键酶的酶学活性研究提供新方法。     

运用简单线性水库模型计算Pothwar黄土平原（巴基斯坦）磷灰石损失情况

Apatite is the dominant phosphorus （P） mineral in early stages of soil development, and its redistribution as labile forms under pedogenesis controls terrestrial bioavailability. Quantitative distribution of labile forms of P and apatite-P was examined in Pothwar Loess Plain, Pakistan where the degree of pedogenesis varied with relief. Four soil types, Typic Ustorthents （Rajar）, Typic Calciustepts （Missa）, Udic Calciustepts （Basal）, and Udic Haplustalfs （Guliana）, were sampled from three replicated locations at genetic horizon level. With the exception of total P value at surface, the mean total and apatite-P decreased towards the surface in Udic Haplustalfs and Udic Calciustepts where dicalcium and octacalcium phosphate increased toward surface. Iron （oxides and oxyhydroxides） adsorbed and occluded P forms were also in greater quantities in Udic Haplustalfs and increased toward the surface, whereas they were lowest and uniform in the Typic Ustorthents. Aluminum- and organic P correlated with soil organic matter. Apatite-P decreased exponentially with an increase in the sum of iron adsorbed and occluded P fractions, and fitted the equation M（x） =M0[1 - exp（-wx）] with r^2=0.996, where M（x） is the mean apatite-P concentration in solum, M0 is the apatite-P content in the loess sediments, x is the cumulative iron adsorbed and occluded P, and w is an empirical factor indicating the change rate of apatite-P in the loess. From the calculated apatite-P of 740 mg kg^-1 at the time of deposition, mean apatite-P loss was 60% in Udic Haplustalfs, 33% in Udic Calciustepts, 23% in Typic Calciustepts, and 8% in Typic Ustorthents. The transformation of soil P to labile forms was faster and deeper in level or slight depressions followed by gently sloping areas in wide plains, and was the least in the gullied land.     

家蚕β-呋喃果糖苷酶基因BmSuc1表达特征及其对激素的响应

【目的】探究BmSuc1基因在家蚕不同组织及不同时期的表达特征及经昆虫激素处理后的表达变化规律,明确昆虫激素对BmSuc1基因的调控作用,为深入解析BmSuc1基因的功能及其表达调控机制提供参考依据。【方法】利用实时荧光定量PCR检测BmSuc1基因在家蚕发育过程中不同时期和不同组织及外源激素处理后的表达特征,并通过双链RNA （dsRNA）干扰试验检测家蚕20-羟基蜕皮素（20E）受体基因（USP）干扰效果及BmSuc1基因的表达变化。【结果】BmSuc1基因在家蚕中肠中的相对表达量最高,其次是丝腺、表皮和血淋巴,在其他组织中的相对表达量很低或几乎不表达;BmSuc1基因呈脉冲型的表达模式,在家蚕每个龄期的将眠时、五龄后期（上簇前）及预蛹时的相对表达量较高。利用外源激素[20E和保幼激素（JH）]分别处理五龄第2 d发育良好的家蚕,发现经20E处理后12和18 h,BmSuc1基因相对表达量极显著高于注射0.1%二甲基亚砜（DMSO）的对照组（P<0.01,下同）,但在测定时间范围内JH处理组的BmSuc1基因相对表达量与对照组间无显著差异（P>0.05）。以体外转录合成USP基因的dsRNA注射五龄第3 d家蚕,注射后24和36 h,USP基因相对表达量极显著下调,即dsRNA干扰成功。利用RNAi技术干扰USP基因能阻断20E信号转导,致使BmSuc1基因表达受抑制,其相对表达量在干扰USP基因后24和36 h显著下调（P<0.05）。【结论】BmSuc1基因主要在家蚕蜕皮和变态时高表达,暗示其可能参与家蚕的变态发育过程。添加外源20E可诱导BmSuc1基因转录,而阻断20E信号转导途径会抑制BmSuc1基因表达,即BmSuc1基因作为20E信号转导通路中的下游靶基因,直接或间接受到20E信号调控。     

UPLC/MS-MS结合QuEChERs检测可食性鸡组织中8-α-羟基妙林残留

为准确测定可食性鸡组织中8-α-羟基妙林的残留量,试验建立了一种高效液相色谱-串联质谱（UPLC/MS-MS）结合QuEChERs的快速检测方法。样品经酸化丙酮提取,Bond Elut QuEChERs柱净化,氢氧化钠碱溶液水解,乙酸乙酯反萃取,高效液相色谱-串联质谱仪测定。结果显示：鸡肉和鸡肝中8-α-羟基妙林在50～200μg/kg浓度范围内,方法具有良好的线性相关性,相关系数≥0.99;在可食性鸡组织中的检出限为10～20μg/kg,定量限为25～50μg/kg;8-α-羟基妙林在50、100和200μg/kg添加水平下平均回收率为65.07%～103.16%,批内、批间变异系数均≤20%。研究提示：建立的方法操作简便、结果准确,满足了兽药残留药物痕量检测方法规定要求,适用于可食性鸡组织中8-α-羟基妙林的残留量测定。     

Spectrophotometric Determination of Arginine in Grape Juice Using 8-Hydroquinoline

Arginine in grape juice can be metabolized by wine yeasts and malolactic bacteria to precursors of ethyl carbamate, known as carcinogen. The aim of this study was to develop a simple, fast, and accurate method for determining arginine in grape juice with Sakaguchi reaction by separating arginine with strong cation-exchange resins. Parameters were optimized including the concentrations of 8-hydroquinoline and sodium hydrobromite. The color stability lasted for 4 min, which is sufficient to finish the measurement. The method is simple, reproducible and accurate, and can be applied for quick measurement of arginine in grape juice to take necessary measures for controlling the level of ethyl carbamate.     

羟基磷灰石人工骨植体的制备及生物力学研究

目的：应用羟基磷灰石（HA）涂覆医用金属材料（基体）表面获得有良好机械性能与生物相容性的人工骨植体。方法：采用射频磁控溅射技术,以Ti-6AL-4V为基体材料,制备羟基磷灰石生物涂层,并研究其化学组成,微观形貌,界面结合状态及附着强度,探讨后处理对HA生物涂层组织及性能的影响。结果：涂层表面的微观形貌出现较多的孔隙和网状结构,可提高植入体的骨性结合;涂层与层体界面处结合紧密,无气孔和裂纹存在,基体成分与涂层成分相互扩散,有助于涂层与基体界面的附着强度;经后处理的涂层中不存在其它钙磷杂质相,HA的晶化程度高,具有较好的抗溶解性和化学稳定性。结论：采用磁控溅射技术可以制备性能稳定的HA生物涂层;制备的HA生物涂层与基体有较高的附着强度,涂层表面的多孔网状结构可以较好地满足新生骨组织在其表面的生长要求,形成良好的骨性结合。     

钛-二溴羟基苯基荧光酮-CTMAB-苯二甲酸四元体系的研究

在硫酸与苯二甲酸介质(Ph2.0)中,钛与二溴羟基苯基荧光酮及十六烷基三甲基溴化铵生成1:2:3(W:W:W)的灰绿色配合物,其最大吸收波长在620nm处.摩尔吸光系数为1.74×105L/(mol.cm),钛含量为0～0.16μg/Ml,符合比耳定律.此法快速,对比度大,适用于铬镍钢及铝合金中微量钛的测定.     

分离制备高纯度中性木低聚糖的研究

研究了木聚糖酶定向酶解木聚糖水解液中主要成分在聚丙烯酰胺凝胶柱层析时被洗脱分离的顺序 ,确定了较佳的洗脱速度和进样量。结果表明 ,酶蛋白、木质素是木低聚糖酶解液中分子量最大的物质 ,在层析时最先被洗脱出来。酶解液中含有 12 .8%的酸性低聚糖 ,在洗脱时和木八以上的可溶性聚糖混合在一起。用 55cm× 7.5cm层析柱在 50℃、以脱离子水为流动相的分离条件下 ,快速制备高纯度中性木低聚糖的适宜洗脱速度和进样量分别为 80 0mL/h、12 0mL     

中药莪术挥发油化学成分的研究

采用GC MS DS对莪术药材挥发油进行系统分析 ,共分离得到 10 0个气相色谱峰 ,鉴定出 62种化学成分 ,其中α 侧柏烯、β 侧柏烯、异松油烯、松香芹醇、δ 愈创木烯等 17种成分为首次鉴定。其次 ,对莪术挥发油进行柱层析分离得到一无色晶体 ,经GC MS DS分析为一混晶 ,由 4种抗肿瘤有效成分组成 :莪术醇 ( 64% )、异莪术醇 ( 30 % )、莪术二酮 ( 1.1% )、莪术烯醇 ( 4 .7% )