HBx小鼠肿瘤细胞株的建立及初步鉴定

目的建立稳定、高效的HBxAg体外表达细胞株,以便进一步研究HBX基因和HBxAg的致癌作用及机理。方法用RT-PCR技术扩增出了HBX的cDNA,并克隆到真核表达载体pcDNA3.1中,通过脂质体介导将pcD-NA3.1-HBX转染到小鼠肿瘤细胞株(EL4)中。结果RT-PCR及蛋白质印迹的实验结果表明,HBX基因在小鼠肿瘤细胞EL4细胞中得到了表达。结论本研究成功构建了表达HBx的小鼠肿瘤细胞株,为进一步研究HBX基因和HBx的致癌作用及机制奠定了实验基础。     

分泌抗犬细小病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

为制备犬细小病毒(CPV)单克隆抗体,用F81细胞繁殖CPV,病毒液经二乙烯亚胺(BEI)灭活、纯化后免疫BALB/c小鼠,将小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经筛选获得2株分泌抗CPV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为F1和B6.F1和B6分泌的单克隆抗体Ig亚类均为IgG1;以F1和B6制备的腹水,经检测,间接ELISA效价均为1×105,免疫荧光效价分别为1:3200和1∶6400;F1和B6培养上清的抗体中和效价分别为1∶1024和1∶2048,血凝抑制效价分别为1∶2048和1∶4096;免疫印迹(Western-blotting)和抗原表位分析结果显示,F1和B6分泌的单克隆抗体可能分别针对CPV的空间表位和线性表位.2株分泌抗CPV单克隆抗体的杂交瘤细胞株的建立可进一步用于开发CPV特异性诊断制剂和治疗制剂.     

顺铂对鼻咽癌细胞株端粒酶活性和凋亡的影响

目的：研究抗癌药顺铂对5株鼻咽癌细胞端粒酶活性和凋亡的影响．以探讨端粒酶活性水平与鼻咽癌的关系及顺铂诱导鼻咽癌细胞凋亡的可能机制，为端粒酶可能成为一种很好的鼻咽癌治疗靶点提供实验依据。方法：用TRAP—ELISA的方法定量检测5株鼻咽癌细胞在顺铂处理前后的端粒酶活性水平，观察细胞形态及生长状态．以流式细胞仪分析细胞周期的改变并检测凋亡。结果：5株鼻咽癌细胞端粒酶均呈阳性，其中LTRs—LMP细胞株端粒酶活性水平最高，高分化细胞株CNE—1端粒酶活性水平低于低分化细胞株CNE—2Z、HNE—2。经顺铂处理后5株鼻咽癌细胞端粒酶活性明显受抑制、细胞形态发生明显改变，出现细胞凋亡。结论：端粒酶的活化与鼻咽癌密切相关。临床常用化疗药物顺铂可能是通过在S期抑制端粒酶活性并诱导鼻咽癌细胞凋亡而发挥杭癌作用的。因此我们认为端粒酶可以作为鼻咽癌的一个治疗靶点。     

巴西菇多糖对肝癌细胞株凋亡的影响及其机制

目的：研究巴西菇多糖诱导人肝癌细胞株(SMMC—7721)凋亡的作用及机制。方法：采用电镜、DNA电泳、免疫组化法，对SMMC—772l株细胞凋亡以及凋亡抑制基因bcl—2的表达进行检测。结果：SMMC—772l株细胞经巴西菇多糖处理后出现核固缩、膜起泡、凋亡小体形成．琼脂糖凝胶电泳呈现出典型凋亡DNA梯状带．细胞内bcl—2表达较对照组低。结论：巴西菇多糖能诱导SMMC—772l株细胞发生典型凋亡．其抑制细胞内bcl—2的表达，是诱发肿瘤细胞凋亡的机制之一。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒E蛋白在Marc-145细胞中的表达

针对PRRSV E基因设计1对带有EcoRⅠ和SalⅠ酶切位点的引物,以PRRSV CC-1株为模版进行RT-PCR扩增,获得带有酶切位点的目的片段插入pMD18-T载体,对阳性重组质粒进行测序鉴定。将阳性质粒进行EcoRⅠ、SalⅠ双酶切,回收目的片段将其插入EcoRⅠ、SalⅠ双酶切的真核表达载体pEGFP-N1中构建重组质粒pEGFP-N1-E,将重组质粒用脂质体转染Marc-145细胞,通过荧光显微镜观察显示,在转染后24h出现荧光,48h出现荧光高峰,筛选阳性细胞株,进行目的基因转录、Western blot检测目的蛋白的表达鉴定。结果表明：成功构建真核表达载体pEGFP-N1-E,建立了稳定表达的细胞株。为研究E蛋白如何与宿主细胞结合形成通道,PRRSV吸附、穿入宿主细胞的作用机理以及筛选特效的粒子通道阻断剂奠定了基础。     

茄红素可藉由调降NF-kB及Sp1并降低基质金属蛋白酶-9表现而抑制人类肝癌细胞株SK-Hep-1侵袭(英文)

目的:近年来许多研究显示,摄取较多富含茄红素的食物可降低摄护腺癌以及肝癌的发生率。虽然茄红素被证实具有抑制癌症转移的能力,但目前为止其作用机制仍不清楚。因此,本研究的主要目的在于探讨茄红素的抗癌转移作用及机制。我们提出的假说为:茄红素具有抑制癌转移的能力,其机制可能与调降基质金属蛋白酶-9(matrixmetalloproteinase-9;MMP-9)的表现有关。试验方法:将高侵袭能力的肝癌细胞株SK-Hep-1以茄红素预培养2h,以磷酸盐类缓冲溶液清洗后并继续培养24h,之后进行各种分析,包括:以transwell分析癌细胞侵袭能力;以同功酵素图谱(zymography)及西方墨点法个别分析MMP-9的酵素活性及蛋白表现;另外,利用电泳移动偏移分析(electrophoreticmobilityshiftassay;EMSA)检测转录因子NF-kB、AP-1以及Sp1对MMP-9启动子(promoter)的结合能力。结果:茄红素具有抑制肝癌细胞侵袭的能力,而抑制效果与剂量关系呈钟型曲线,亦即以5mmol/L剂量的抑制效果最好(抑制率达63%,P<0.001);同时,在抑制MMP-9的活性及蛋白表现上也呈相同趋势。此外,茄红素也会降低转录因子NF-kB及Sp1对MM-9启动子的结合能力。结论:茄红素具有抑制癌细胞侵袭的能力,其机制可能与降低转录因子NF-kB和Sp1结合至MMP-9启动子的能力以及减少MMP-9蛋白的表现有关。本研究增加了对茄红素抑制癌转移作用机制的了解,将有助于茄红素作为保健食品上的实用基础。     

茄红素可藉由调降NF—κB及Sp1并降低基质金属蛋白酶-9表现而抑制人类肝癌细胞株SK—Hep-1侵袭

目的：近年来许多研究显示，摄取较多富含茄红素的食物可降低摄护腺癌以及肝癌的发生率。虽然茄红素被证实具有抑制癌症转移的能力，但目前为止其作用机制仍不清楚。因此，本研究的主要目的在于探讨茄红素的抗癌转移作用及机制。我们提出的假说为：茄红素具有抑制癌转移的能力，其机制可能与调降基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9；MMP-9）的表现有关。试验方法：将高侵袭能力的肝癌细胞株SK—Hep-1以茄红素预培养2h，以磷酸盐类缓冲溶液清洗后并继续培养24h，之后进行各种分析，包括：以transwell分析癌细胞侵袭能力；以同功酵素图谱（zymography）及西方墨点法个别分析MMP-9的酵素活性及蛋白表现；另外，利用电泳移动偏移分析（electrophoretic mobility shift assay；EMSA）检测转录因子NF—κB、AP-1以及Sp1对MMP-9启动子（promoter）的结合能力。结果：茄红素具有抑制肝癌细胞侵袭的能力，而抑制效果与剂量关系呈钟型曲线，亦即以5mmol／L剂量的抑制效果最好（抑制率达63％，P〈0．001）；同时，在抑制MMP-9的活性及蛋白表现上也呈相同趋势。此外，茄红素也会降低转录因子NF—κB及Sp1对MM-9启动子的结合能力。结论：茄红素具有抑制癌细胞侵袭的能力，其机制可能与降低转录因子NF—κB和Sp1结合至MMP-9启动子的能力以及减少MMP-9蛋白的表现有关。本研究增加了对茄红素抑制癌转移作用机制的了解，将有助于茄红素作为保健食品上的实用基础。     

牛病毒性腹泻病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的鉴定

筛选建立了8株牛病毒性腹泻病毒（BVDV）单克隆抗体杂交瘤细胞，通过对其染色体的分析、单克隆抗体免疫球蛋白类型及病毒中和活性等指标的检测，表明8株单克隆抗体杂交瘤细胞的染色体数目均接近两亲本细胞的染色体数目之和；单克隆抗体免疫球蛋白类型均为IgG，其中6株为IgG1,2株为IgG2a，且以BVDV具有不同程度的中和能力。     

分泌抗禽呼肠孤病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立与鉴定

采用腹腔的接种１次脾内注射禽呼肠孤病毒（ＡＲＶ）蛋白免疫小鼠，经３次融合后，共筛选８株分泌抗禽呼肠孤病毒（单克隆抗体杂交瘤细胞株，这８株ＭｃＡｂ均可与ＡＲＶＳ１１３３株，ＦＤＯ株发生反应，而与ＩＢＤＶ，ＭＤＶ，ＥＤＳ－７６病毒不发生反应，经亚类鉴定，ＡＥ７，ＡＦ８，ＢＤ１，ＤＨ１０，ＥＥ５为ＩｇＧ１；ＡＤ６，ＣＧ４为ＩｇＣ２ａ，ＡＧ７为ＩｇＧ２ｂ。腹水效价在１０＾３～１０＾５之间。     

抗猪瘟兔化弱毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用猪瘟兔化弱毒（ＳＦＶ—Ｃ）牛睾丸细胞培养上清液，经ＰＥＧ—２００００沉淀和蔗糖密度梯度离心提纯制备ＳＦＶ—Ｃ抗原，腹腔免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，取抗体阳性的免疫小鼠脾细胞，在５０％（Ｗ／Ｖ）ＰＥＧ—４０００作用下，与ＳＰ２／０－Ａｇ１４小鼠骨髓瘤细胞进行融合，产生杂交瘤细胞。用间接ＥＬＩＳＡ法筛选阳性杂交瘤细胞株。通过有限稀释进行３次克隆，获得了２株分泌抗ＳＦＶ—Ｃ的单克隆抗体杂交瘤细胞株，并对其染色体形态和数目进行分析鉴定。