鸡新城疫无毒株—V4株的研究概况及应用前景

本世纪30年代以来,澳大利亚一直没有发生过临床型的鸡新城疫(简称 ND),鸡群亦不接种 ND 疫苗,但血清学检查发现广泛存在 ND 的血球凝集抑制抗体。为此,澳大利亚学者 Simmons 作过许多研究,终于1967年在 Queensland 州从一只营养不良并伴有感染葡萄球菌的肉鸡腺胃中分离到无毒的 ND 毒株,当时命名为 Queensland 株,后定为 V_4株。     

中国黑茶对消化道肿瘤的作用

本实验利用HCT-8及SGC-7901两种细胞株研究黑茶对消化道肿瘤细胞生长的抑制作用,结果发现,黑茶具有良好的抑制消化道肿瘤细胞生长的作用。黑茶中含有两种抑制活性物质,其中对SGC-7901细胞株具有抑制能力的物质的极性要比对HCT-8细胞株具有抑制能力的物质极性低一些。黑茶具有对两种细胞株抑制的功能可能是多种物质成分共同作用的结果,而中低极性的物质抑制能力较强。     

抗软骨藻酸单克隆抗体杂交瘤细胞株的构建

为了获得稳定、高效分泌抗软骨藻酸(DA)单克隆抗体的杂交瘤细胞株,采用活泼酯法制备软骨藻酸免疫抗原(DA-KLH)和包被抗原(DA-BSA),以DA-KLH免疫BALB/c小鼠,用细胞融合技术筛选抗软骨藻酸单克隆抗体杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法制备大量单抗,捕获EL ISA法测定小鼠免疫球蛋白亚型,间接ELISA法测定腹水效价;用G蛋白亲和层析法来纯化腹水。结果显示,成功构建2株能稳定分泌DA单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株2B1和4C2,抗体亚类分别为IgG1和IgG2a,间接EL ISA检测小鼠腹水的抗体效价达1∶64 000,腹水纯化后蛋白浓度为1.27和0.675 mg/mL。研究结果表明,成功制备的抗DA单克隆抗体杂交瘤细胞株稳定、高效,为利用该单抗研制快速检测软骨藻酸的胶体金免疫层析试纸条打下基础。     

鱼呼肠孤病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及鉴定

采用杂交瘤技术,用浓缩的鱼呼肠孤病毒(Fish Reovirus FRV)免疫BALB/C小鼠,取脾细胞与小鼠骨髓瘤SP2/O细胞融合,经筛选克隆,共获得B_7、C_6.D_9.G_7、E_4、F_5,F_7七株分泌抗鱼呼肠孤病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株。这七株细胞经液氮反复冻存、复苏及连续培养,可稳定分泌抗FRV的单克隆抗体.这七株杂交瘤细胞的染色体数为90～98条,明显高于SP2/O细胞(71条).分泌的单克隆抗体经琼脂双扩散法证实分别属于小鼠r球蛋白中的IgG_1、IgG_(2a)和IgG_(26)亚类.ELISA测得腹水抗体滴度1:2万～1:40万,病毒中和试验显示C_6、G_7有中和作用,滴度达1:64.     

细胞内分裂及细胞内复制诱导

以中国雄性仓鼠饰成纤维细胞(Don细胞株)为实验材料,用二乙基己烯雌酚(DES)作诱导物,诱使细胞进行细胞内复制和细胞内分裂。实验采用不同剂量、不同处理时间和恢复时间,取得了良好的结果。在18个试验组中,有50％的试验组获得成功,最高诱导频率达56％,是前人研究结果的2.4倍,同时降低了诱导物质的毒性,加大了有效诱导剂量与毒害剂量间的差距,使有效诱导剂量的变化,高低相差10倍;使发生诱变的细胞大量存活,同时进行分裂活动。     

天花粉蛋白对A549细胞增殖的影响

目的；观察天花粉蛋白对人肺腺癌细胞株A549生长增殖的影响。方法；应用MTT法检测天花粉蛋白对A549细胞生长增殖的影响。结果：经天花粉蛋白处理后A549细胞生长明显受抑，并呈一定的剂量时效依赖性。结论：天花粉蛋白在体外能抑制A549肺腺癌细胞的生长繁殖。     

HBx小鼠肿瘤细胞株的建立及初步鉴定

目的建立稳定、高效的HBxAg体外表达细胞株,以便进一步研究HBX基因和HBxAg的致癌作用及机理。方法用RT-PCR技术扩增出了HBX的cDNA,并克隆到真核表达载体pcDNA3.1中,通过脂质体介导将pcD-NA3.1-HBX转染到小鼠肿瘤细胞株(EL4)中。结果RT-PCR及蛋白质印迹的实验结果表明,HBX基因在小鼠肿瘤细胞EL4细胞中得到了表达。结论本研究成功构建了表达HBx的小鼠肿瘤细胞株,为进一步研究HBX基因和HBx的致癌作用及机制奠定了实验基础。     

睾酮单克隆杂交瘤细胞株的筛选及性能鉴定

为建立大批量样品中睾酮残留的检测方法,采用细胞融合技术、间接ELISA和间接竞争ELISA(icELISA)等方法,对睾酮单克隆杂交瘤细胞株进行了筛选及性能鉴定。结果表明:筛选出5株(T2C3,T2D9,T3A5,T4B1、T4E8)杂交瘤细胞,抗体亚类均为IgG1型,具k轻链,亲和常数为4.38×108～5.24×109 L/mol;腹水纯化后的抗体效价和灵敏度(IC50)分别为0.64×105～2.56×105和1.58～2.92ng/mL。以T2D9细胞株建立icELISA标准曲线,其线性范围为0.06～63.5ng/mL,检测限和IC50值分别为0.04和1.55ng/mL。     

环氧合酶-2的DNA疫苗构建及其在COS-7细胞中表达

构建了环氧合酶-2(Cyclooxygenase-2, COX-2)的DNA疫苗载体pVAX1-COX-2, 并考察在COS-7细胞中表达. 用RT-PCR法从肺癌A549细胞中获得环氧合酶-2基因片段, 此片段插入pVAX1载体构建pVAX1-COX-2真核重组表达质粒, 脂质体介导法转染COS-7细胞, 以pVAX1为对照, 收集稳定转染细胞, 利用RT-PCR和Western-blot分别在mRNA和蛋白水平上考察COX-2表达. 实验结果表明: RT-PCR法从A549细胞mRNA中扩增1.8 kb的COX-2基因片段, 酶切与测序结果表明所构建的真核表达载体pVAX1-COX-2与预期相符, 质脂体法成功地将质粒DNA转染到COS-7细胞中. RT-PCR和Western-blot分析结果表明COX-2已表达. 因此, 所构建的真核表达载体pVAX1-COX-2正确, 且在COS-7细胞中表达.