稳定表达猪skMLCK基因的小鼠成肌细胞株构建及鉴定

为了获得稳定表达猪skMLCK基因的小鼠成肌细胞C2C12细胞株,将猪skMLCK基因cDNA序列T-A克隆至pMD-18T载体;重组质粒经双酶切后,定向克隆至真核表达载体,获得表达重组质粒pEGFP-N1-skMLCK;经脂质体介导,重组质粒稳定转染入C2C12细胞中;通过实时定量PCR方法检测skMLCK基因的表达水平,以及其他相关基因的表达情况。结果:获得了稳定表达猪skMLCK基因的C2C12细胞株;连续培养30d后,用实时定量PCR方法检测到skMLCK基因高表达,同时发现CFL2b和MEF2C基因表达下调。试验表明稳定表达猪skMLCK基因的小鼠成肌细胞系构建成功,为猪skMLCK基因功能的进一步研究提供了前期工作基础。     

二仙汤及其拆方对GT_(1-7)细胞株GnRH基因转录和表达的影响

目的:运用血清药理学方法,观察补肾方二仙汤及其温肾、滋阴两个拆方对 GT_(1-7)细胞 GnRH基因转录和表达的影响。方法:SD 大鼠连续4天灌服中药二仙汤及两个拆方,末次给药1 h 后取其血清作体外细胞培养实验;用放免法测定 GT_(1-7)细胞 GnRH 的分泌;用 Northern bolt 方法观察二仙汤及其拆方对 GT_(1-7)细胞 GnRH mRNA 的影响。结果:(1)二仙汤全方及其两个拆方均能促进 GnRH 释放,以全方效果最好。(2)孵育24 h 后全方组和温肾组 GnRH mRNA 水平有下降趋势。(3)孵育48 h 后滋阴组 GnRH mRNA 的表达明显增加。结论:中医“肾主生殖”的功能似涉及下丘脑 GnRH 神经元及其调控性腺轴的机能,二仙汤及其拆方能够直接调节 GT_(1-7)细胞 GnRH 的释放及基因表达。     

抗鸡IgG,抗鸭IgG单克隆抗体杂交瘤细胞株的稳定性研究

抗鸡ＩｇＧ、抗鸭ＩｇＧ单克隆抗体杂交瘤细胞株的稳定性研究张春红伍惠卿杜伟贤黄忠（广东省农业科学院兽医研究所，广州５１０６４０）自１９７５年Ｋｏｈｌｅｒ和Ｍｉｌｓｔｅｉｎ首次利用Ｂ淋巴细胞杂交瘤技术生产单克隆抗体（ＭｃＡｂ）以来，为所有需要制备和使用抗...     

蜘蛛毒素对人胃腺癌细胞株BGC-823增殖的抑制作用

为比较不同蜘蛛毒素对肿瘤细胞的抑制作用,采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)测定了不同浓度的虎纹单柄蛛(Ornithocton huwen)、海南单柄蛛(Ornithoctonus hainana)、敬钊缨毛蛛(Chilobrachy jingzhao)和雷氏大疣蛛(Macrothele raveni)4种蜘蛛毒素对人胃腺癌细胞株BGC-823的抑制作用。结果表明:4种蜘蛛毒素对人胃腺癌细胞株BGC-823的细胞增殖均有不同的抑制作用;同一蜘蛛毒素浓度越高抑瘤作用越好,蜘蛛毒素作用时间越长抑瘤效果越强,量效关系和时效关系良好;不同蜘蛛毒素对BGC-823细胞增殖的抑制作用效果不同,以敬钊缨毛蛛毒素作用最强,IC50为0.109μg/μL。     

抗AIV(H9)独特型杂交瘤细胞株检测方法的建立

采用兔抗AIV IgG作为检测抗原,通过预试确定了包被抗原的工作浓度为800μg／mL,以间接ELISA 方法检测融合细胞培养上清液,筛选到产生抗AIV鸡和兔种间共有独特型抗体的杂交瘤细胞,间接ELISA试 验中P／N值达12,证明杂交瘤细胞分泌目的单克隆抗体旱现强阳性。运用该检测方法,排除了分泌抗鸡同种 型表位以及超变区其他表位抗体的杂交瘤细胞,从而为筛选分泌抗H9亚型AIV独特型单克隆抗体的杂交瘤 细胞确定了可靠的方法。     

己烯雌酚单克隆抗体细胞株的筛选及间接ELISA法的建立

以自行合成的己烯雌酚(DES)免疫原免疫BALB／c小鼠，采用细胞融合、显微克隆等单克隆抗体技术，制备了5株抗DES单克隆抗体分泌杂交瘤细胞株(7B6、4B10、1G10、4E4、2C7)；选择其中的7B6株抗体，建立了间接竞争ELISA法(indirect competitive inhibition ELISA)，通过初步优化，其检测限为10pg／孔，与同类二苯乙烯类雌激素的交叉反应高，而与天然雌激素雌二醇几乎无交叉反应性。这项研究为DES残留检测试剂盒的开发打下了基础。     

鱼类的组织培养

鱼类的组织培养研究，开始得较迟(Wolf and Dunbar，1957)，至今不过20几年历史，进展也较慢，到目前为止，陆续培养成功了包括海水和淡水鱼在内的约20余个细胞株。国内对鱼类的组织培养研究，近年来刚开始，迄今未见正式报导。为了给鱼类遗传育种、鱼类病理学，