nm23基因的表达与皮肤鳞癌发生、发展及转移的关系

目的：观察nm23表达与皮肤鳞状细胞癌(鳞癌)发生、发展与转移的关系。方法；采用免疫组织化学及图像分析技术检测66例皮肤鳞癌、12例淋巴结转移灶、21例假上皮瘤样增生及20例正常皮肤中nm23表达情况。结果：皮肤鳞癌中nm23表达下调，但鳞癌中nm23表达与鳞癌的转移、TNM分期、病理分化程度及发病部位无关。结论：nm23基因表达下调是发生在鳞癌演进过程中的一个早期事件。nm23可能不具有抑制皮肤鳞癌转移的功能。     

枸杞炭疽病对成熟果实侵染过程的显微观察

以往研究认为,枸杞炭疽病菌(C.gloeosporioides Penz)仅侵染花、花蕾、青果,一般不会对成熟果实进行侵染.笔者近期研究证明枸杞炭疽病可对成熟果实造成严重侵染,显微观察进一步证实:孢子接种后4 h开始入侵,48 h细胞消融,几无正常细胞,在切片中可清楚地观察到大量繁殖的菌丝体断面和枸杞炭疽病孢子.     

小鼠2细胞胚卵裂球电融合的研究

分别用８００ｖ／ｃｍ、４０～８０μｓ的单个电脉冲；８００ｖ／ｃｍ、１６０～３２０μｓ的单个电脉冲；１０００ｖ／ｃｍ、１６０～３２０μｓ的单个电脉冲；１２００ｖ／ｃｍ、１６０～３２０μｓ的单个电脉冲；１０００ｖ／ｃｍ、１６０～３２０μｓ的２个电脉冲所获得的胚胎融合率分别为８４．６％（３３／３９），１００．０％（５９／５９），９７．４％（７４／７６），９５．１％（３９／４１），６４．７％（１１／１７）。融合胚作培养后，２细胞胚的发育率分别为１５．２％（５／３３），３９．０％（２３／５９），４７．３％（３５／７４），４３．６％（１７／３９），１８．２％（２／１１）。以１０００ｖ／ｃｍ，１６０～３２０μｓ的单个脉冲诱导注射ＬＨ３９～４３ｈ，４４～４８ｈ回收的２细胞胚，胚胎融合率分别为１００．０％（２７／２７），９６．４％（２７／２８）；发育率分别为４４．４％（１２／２７），３３．３％（９／２７）。２细胞胚卵裂球融合的适宜条件为１０００ｖ／ｃｍ和１６０～３２０μｓ的单个脉冲。     

细胞表面展示有机磷水解酶的恶臭假单胞菌工程菌的构建及全细胞酶活性分析

利用丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae)冰核基因的N-末端(inpn)作为锚定单元(anchoring mo-tif),通过与来自黄杆菌属(Flavobacterium sp.)的有机磷水解酶基因(opd 构建融合基因inpn-opd,并连接于假单胞菌表达载体Pymbp,然后导入恶臭假单胞菌(P.putida)野生型菌株AB92019,获得了能在其细胞表面展示有机磷水解酶并具有全细胞酶催化活性的重组工程菌MMBL-opd.SDS-PAGE结果表明,融合基因能表达产生80 ku的蛋白质.重组菌MMBL-opd在无抗性LB固体培养基上能稳定生长,所携带的外源质粒的稳定性达到100%;在添加100 μmol/L Go2 培养基上28℃培养48 h,表面展示的有机磷水解酶具有最高全细胞酶活性,为0.036 U/mg.用蛋白酶K消化处理重组菌表面蛋白可使其全细胞酶活降低92%.重组菌在PBS缓冲液中于4℃条件下保存30 d,仍能保持93%的全细胞酶活.     

Th22细胞及其细胞因子IL-22在冠心病外周血的表达及与冠脉病变的相关性研究

目的:观察冠心病患者外周血Th22细胞及其细胞因子白细胞介素-22(IL-22)的水平变化,探讨其与冠状动脉病变的相关性。方法:入选冠心病患者60例,其中急性心肌梗死组(AMI)20例、不稳定型心绞痛组(UAP)20例及稳定型心绞痛组(SAP)20例,同时选取同期健康对照组(HC,冠脉造影正常者)20例。采用流式细胞技术检测各组外周血Th22细胞在外周血细胞中的比例;ELISA法检测血浆IL-22浓度;Gensini评分系统评价冠脉病变程度,分析Th22及IL-22与冠脉病变程度的相关性。结果:AMI组血浆Th22细胞在CD4+T细胞中的比例为(2.02±0.84)%、IL-22浓度为(39.12±5.41)pg/mL,显著高于SAP组(0.74±0.27)%、(28.14±3.78)pg/mL,UAP组(1.20±0.34)%、(33.50±3.47)pg/mL及HC组(0.48±0.19)%、(25.38±3.13)pg/mL,差异具有统计学意义(P均0.05);UAP组与SAP组和HC组差异有统计学意义(P均0.05);SAP组与HC组差异有统计学意义(P0.05)。AMI组、UAP组及SAP组患者的Th22细胞比例与IL-22浓度均呈显著正相关,γ分别为0.877,0.764,0.968,P均0.001。Th22和IL-22与Gensini评分呈显著正相关,person分析,γ分别为0.962,0.889,P均0.001。结论:Th22细胞及其分泌的主要细胞因子IL-22在冠心病的发生中起重要作用,血浆中Th22和IL-22水平的测定可为早期诊断冠心病及评估冠状动脉病变程度提供临床依据,是一种无创、有效的诊断方法,值得在临床推荐使用。     

大黄酸治疗腹泻的潜在机制研究

[目的]评估大黄酸对金黄色葡萄球菌生长和猪小肠上皮细胞IPEC-J2增殖的影响。[方法]用0.3～19.2μg/mL大黄酸处理金黄色葡萄球菌,分光光度计法检测肉汤培养法菌液在600 nm处的OD值,观察并拍照平板培养法细菌的生长情况;用1～5μmol/L大黄酸处理加或未加脂多糖刺激的IPEC-J2细胞,CCK-8法检测细胞的增殖情况。[结果]大黄酸在低剂量(0.3μg/mL)时对金黄色葡萄球菌的生长有显著抑制作用;大黄酸在高剂量(10μmol/L)时对IPEC-J2细胞的增殖也有显著抑制作用,同时,大黄酸不能缓解脂多糖诱导的IPEC-J2细胞的增殖抑制。[结论]低剂量的大黄酸可通过抑制肠道致病菌的生长来缓解由致病菌引起的肠道炎症,但不能直接作用于猪小肠上皮细胞IPEC-J2。     

自噬抑制细胞焦亡对脓毒症肺损伤的保护作用

为研究自噬抑制细胞焦亡对脓毒症肺损伤的保护作用,研究先于体外使用盲肠内容物刺激小鼠腹腔巨噬细胞使其发生炎性反应,通过乳酸脱氢酶检测法、酶联免疫吸附(ELISA)法及Western blottin法检测雷帕霉素激活自噬对巨噬细胞发生细胞焦亡的影响。结果发现激活自噬能降低巨噬细胞炎性小体的活化及炎性细胞因子的释放,抑制细胞焦亡。随后对健康C57小鼠构建脓毒症模型,观察雷帕霉素预处理对各组小鼠死亡率的影响,并通过Western blotting检测肺组织中LC3蛋白表达变化,HE染色观察肺组织形态学改变,发现雷帕霉素预处理能够减轻脓毒症小鼠肺组织病理损伤,降低小鼠死亡率。结果表明自噬能够抑制细胞焦亡,对降低脓毒症急性肺损伤具有重要意义。     

siRNA介导的Plk1表达沉默对食管癌细胞生长的影响

在包括食管癌在内的多种肿瘤中,Plk1呈现过表达且具重要预后价值,表明该分子是一个潜在的肿瘤治疗靶点.为了探讨Plk1作为分子靶点用于食管癌治疗的潜在价值,采用siRNA技术抑制Plk1的表达,并观察了其对3株代表性食管癌细胞生长的影响.结果表明:合成的特异性短链Plk1 siRNA在mRNA和蛋白质水平上均能高效、特异性地抑制3株代表性食管癌细胞系中Plk1的表达.同时,siRNA介导的Plk1表达沉默显著抑制了食管癌细胞的生长,细胞活力同时显著下降.另外,Plk1表达被抑制后,大量细胞有丝分裂受到阻滞,并进而发生大规模细胞死亡.这些结果表明,siRNA介导的Plk1表达沉默能显著抑制食管癌细胞的生长,Plk1是一个潜在的用于食管癌治疗的新靶点.     

辽棉19号转化耐盐基因AlNHX1的研究

为提高辽宁棉花品种的耐盐性,利用农杆菌介导上胚轴外植体转化法,将来源于盐生植物獐茅的Na~+/H~+逆向转运蛋白基因(AlNHX1)导入棉花辽棉19号中,分析影响棉花上胚轴外植体农杆菌转化的几个重要因素,建立并优化了该品种的转化体系,结果表明:1)农杆菌侵染的最佳时间为90s,共培养过程中乙酰丁香酮最适浓度为100 mg/L,筛选培养基中潮霉素最适浓度为30 mg/L,生根培养基中吲哚乙酸IBA的最适浓度为10mg/L;2)对转化植株进行PCR检测,表明耐盐基因AlNHX1已导入辽棉19号中;3)在盐胁迫下,转基因植株的电导率,渗透势都显著低于未转化植株。结果表明,通过筛选并优化转化体系,辽棉19号品种的耐盐性有较明显的提升,为沿海滩涂地区种植棉花提供了一定的参考。     

柿自然脱涩能力与单宁细胞发育规律的研究

研究了三种不同甘、涩类型柿果实中可溶性单宁含量，单宁细胞和薄壁细胞发育规律，结果表明，完全甜柿和不完全甜柿的主要脱涩期明显不同，前者在果实发育的早期，后者在近熟期；完全甜柿自然脱涩主要是由于薄壁细胞的持续增大和单宁铁早期停止发育，造成单宁细胞占果肉面积比下降所致，而不完全甜柿的树上脱涩主要依赖果实成熟前单宁的凝固作用。