人CD14信号肽介导卵清蛋白在HEK293T细胞的高效表达

本试验将人CD14信号肽序列与卵清蛋白（ovalbumin,OVA）基因融合,旨在提高OVA在非输卵管上皮细胞中的表达。提取鸡输卵管上皮细胞总RNA,经反转录合成的cDNA,再利用修饰的特异性引物,通过PCR从cDNA中分别扩增出5’端与人CD14信号肽序列融合和非融合的OVA基因,并将它们分别插入到真核表达载体pcDNA3.1A中,构建成表达载体pcDNA-CD14sp-OVA和pcDNA-OVA。经磷酸钙介导,将质粒转染至HEK293T细胞,使其进行表达,用鼠抗OVA单克隆抗体通过免疫印迹（Western blot）法检测OVA表达水平。结果表明:本试验扩增的OVA基因序列与GenBank中的序列（登录号NM₂05152）一致,构建的人CD14信号肽序列融合OVA基因的表达载体结构正确。经过在HEK293T细胞的表达,融合人CD14信号肽序列的重组蛋白OVA的表达水平明显得到提高。结果提示,融合人CD14信号肽序列后的重组蛋白OVA在非输卵管上皮细胞中的表达水平明显提高,为OVA基因作为DNA疫苗模式抗原的应用提供了必要的条件。     

饲料中维生素D3添加水平对黄鳝外周免疫相关组织细胞增殖和凋亡的影响

本试验旨在探索维生素D3添加水平对黄鳝(Monopterus albus)外周免疫相关组织细胞增殖和凋亡的影响。挑选体质健康、平均体重为(21.7±2.1)g的黄鳝360尾,随机分为6组,每组2个重复,每个重复30尾。6组黄鳝分别饲喂在基础饲料中添加0(对照)、250、500、1 000、2 000和4 000 IU/kg维生素D3的试验饲料。试验期60 d。饲养试验结束后,从各组随机选择6尾黄鳝,分别采集其肝胰脏、脾脏、头肾和后肠组织,采用流式细胞术检测样品细胞的增殖和凋亡情况。结果表明:饲料中维生素D3添加水平对脾脏、后肠和头肾3种组织细胞增殖和凋亡的影响变化趋势基本一致,即1 000 IU/kg组细胞增殖指数(PI)最高,凋亡指数(AI)最低,与对照组和4 000 IU/kg组差异显著(P<0.05)。肝胰脏细胞PI随饲料中维生素D3添加水平的增加而降低,以4 000 IU/kg组最低,显著低于对照组(P<0.05);肝胰脏细胞AI以1 000 IU/kg组最低,显著低于对照组和4 000 IU/kg组(P<0.05)。由此得出,饲料中添加1 000 IU/kg维生素D3可降低黄鳝外周免疫相关组织细胞凋亡,促进脾脏、头肾和后肠细胞增殖,有利于外周淋巴器官生长;饲料中添加4 000 IU/kg维生素D3可致黄鳝外周免疫相关组织细胞增殖受阻,细胞凋亡加快,引起机体免疫功能抑制。     

猪丁型冠状病毒在悬浮培养猪肾细胞LLC-PK1上的增殖特性分析

旨在分析猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)在悬浮培养的猪肾细胞LLC-PK1上的增殖特性,为PDCoV灭活疫苗的规模化生产提供细胞材料。采用逐步降血清法优化LLC-PK1细胞悬浮培养工艺;利用有限稀释法筛选PDCoV适应性细胞株;利用间接免疫荧光法鉴定PDCoV对LLC-PK1细胞的感染性;分别对PDCoV接种LLC-PK1悬浮细胞的初始密度、MOI、收毒时间、TPCK胰酶浓度等参数进行优化,确定最佳悬浮培养条件。成功筛选出可高效增殖PDCoV的单克隆悬浮细胞株LLC-PK1Sa,且利用其增殖的PDCoV可特异性的感染LLC-PK1细胞;PDCoV按MOI为10^-3接种于密度为2×10⁶ cells·mL^-1的LLC-PK1Sa细胞,当TPCK胰酶终浓度达到7.5 μg·mL^-1时,接毒后48 h收获的病毒液滴度最高。本研究首次实现了PDCoV在LLC-PK1Sa悬浮细胞中的高效增殖,并对悬浮培养条件进行了初步优化,可为PDCoV灭活疫苗的规模化生产提供理论参考。     

猪圆环病毒2型PK15细胞适应株的培养特性

猪圆环病毒2型（PCV2）及其相关的疾病已在全世界范围内发生与流行,是危害养猪生产的严重传染病之一,PCV2与仔猪断奶后多系统衰竭综合征（PMWS）H～102、猪皮炎与肾病综合征（PDNS）、猪的流产和不孕性疾病、猪增生性坏死性肺炎（PNP）和猪先天性脑震颤（CT）等多种疾病的发生密切相关。     

奶牛乳房水肿的防治

<正>奶牛乳房水肿是一种围产期代谢紊乱疾病,临床症状是乳腺细胞间的组织孔隙出现液体的过量积累。严重时,乳房和腹的下部水肿、充血,在前胸及外阴部、乳镜部表现更为明显。一般情况下妊娠青年母     

CnAβ基因对大鼠RBL-2H3细胞脱颗粒的影响

过敏是人和养殖动物常见的疾病,而且发生的频率呈现逐渐增加的趋势.为了深入了解过敏反应的机制,本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,构建钙调磷酸酶A beta(calcineurin A beta,CnAβ)基因敲除的大鼠RBL-2H3细胞株,并探讨CnAβ基因对RBL-2H3细胞生长及脱颗粒的影响.选取大鼠Cn...     

miRNAs在结核分枝杆菌逃逸巨噬细胞免疫杀伤中的作用机制

结核分枝杆菌(MTB)是导致结核病的病原菌,其感染可引起慢性、致死性人兽共患传染病,严重危害人畜健康和生命安全。结核分枝杆菌在与宿主长期相互作用下,形成一系列免疫逃避机制,包括改变巨噬细胞的摄取方式、抑制细胞凋亡及自噬、阻止吞噬溶酶体的成熟及酸化、及避免反应氧产物(Reactive oxygen species, ROS)和反应氮产物(Reactive nitrogen species, RNS)的毒性效应[ 1 ],进而逃避宿主细胞的免疫杀伤,这给结核病防治带来极大阻碍。     

抗鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体的制备

本文主要论述了ＳＰ２／０骨髓瘤细胞与经传染性法氏囊病病毒三次免疫后的ＢＡＬＢ／Ｃ的小白鼠的脾细胞，在融合剂ＰＥＧ（ＭＷ４０００）的作用下，融合形成杂交瘤细胞，融合率可达９６％，将杂交瘤细胞上清液用ＥＬＩＳＡ法检测，其阳性率可达８０％，将阳性杂交瘤细胞进一步克隆化，进行抗体检测，阳性率可达９９％，单克隆产生的抗体经大量生产后，为以后的抗原血清型鉴定，抗独特型抗体疫苗的制备打下了基础。     

弓形虫病的研究进展

弓形虫病（toxoplasmosis）是一种由刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）引起的呈世界性分布的人兽共患寄生虫病,严重危害人体健康,并给全世界的畜牧业造成很大的经济损失。刚地弓形虫是一种专性细胞内的机会性致病寄生原虫,可寄生在除红细胞外的所有有核细胞中。人类对弓形虫普遍易感,特别是免疫缺陷患者、癌症患者、孕妇及幼儿等人群,由于免疫力低下,对弓形虫的易感性比健康成年人高,先天感染可致胎儿畸形,病死率高。     

接种猪瘟疫苗后ELISA抗体反应规律

猪瘟是我国强制免疫接种预防的疾病之一,猪瘟疫苗免疫效果监测由最初的中和试验逐步转变为ELISA方法。但目前还没有关于猪瘟疫苗接种后ELISA抗体反应规律的研究,因此本研究以猪瘟细胞苗接种非免猪进行ELISA抗体反应规律的研究,希望能为生产实践中使用ELISA方法监测猪瘟疫苗免疫效果提供参考。一、材料与方法1.材料猪瘟细胞苗(由四川省华派生物制药有限公司生产,规格20头份/瓶,8000RID/头份);猪为非免猪只24头,逐头标识,ELISA抗体阻断率小于30。分为4组,每组6头,1组为对照组,另3组为试验组,每组隔离饲养;ELISA试剂盒(购自北京天之泰生物科技有限公司,由法国LSI公司生产,批号为5-vetppc-004)。