表达RV糖蛋白的重组PRV活载体疫苗的理化学特性研究

病毒对不同理化学因子的抵抗力是鉴定病毒的一个重要依据.理化学因子包括热、辐射、pH值和化学灭活剂等,能够改变和破坏病毒核酸,使其不能完成复制、转录和翻译等功能,或者改变和破坏病毒粒子的蛋白衣壳或脂质囊膜等结构,妨碍病毒粒子对敏感细胞的吸附和侵入,阻止病毒核酸进入宿主细胞.     

猪德尔塔冠状病毒纳米PCR检测方法的建立

根据Gen Bank登录的猪德尔塔冠状病毒(PDCo V)毒株M基因设计特异性引物,建立了PDCo V纳米PCR检测方法并进行了临床样品检测。结果显示:该方法对标准品检测的最低浓度可达102 copies/μL,与其他几种常见猪病病毒无交叉反应;用该方法检测国内猪场62份腹泻粪便样品,相比常规PCR方法,该纳米PCR方法的检出率更高,而两种方法对268份进境活猪粪拭子样品检测均为阴性。结果表明,本研究所建立的纳米PCR检测方法适用于国内猪场的PDCo V检测和进境活猪的监控检测,可作为PDCo V实验室检测的有力技术手段。     

凹土纳米氧化锌对断奶仔猪血清、肝脏和肠道黏膜抗氧化指标的影响

本试验旨在研究凹土纳米氧化锌对断奶仔猪血清、肝脏和肠道黏膜抗氧化指标的影响。选取210头21日龄体重(6.30±0.51) kg的健康杜×长×大断奶仔猪,随机分为7个组,每组6个重复,每个重复5头猪。各组分别为对照组(CON组,基础饲粮)、抗生素组(ANT组,基础饲粮+抗生素)、氧化锌组(ZO组,基础饲粮+3 000 mg/kg氧化锌)、纳米氧化锌组(NZO组,基础饲粮+800 mg/kg纳米氧化锌)、低剂量凹土纳米氧化锌组(LANZ组,基础饲粮+700 mg/kg凹土纳米氧化锌)、中剂量凹土纳米氧化锌组(MANZ组,基础饲粮+1 000 mg/kg凹土纳米氧化锌)和高剂量凹土纳米氧化锌组(HANZ组,基础饲粮+1 300 mg/kg凹土纳米氧化锌)。预试期3 d,正试期9 d。结果表明:1) ZO和LANZ组的血清过氧化氢酶(CAT)活性显著高于CON组(P<0.05);ANT、ZO、LANZ、MANZ和HANZ组的血清总抗氧化能力(T-AOC)显著高于CON组(P <0. 05),且ANT组的血清T-AOC显著高于其他各组(P<0.05)。2) LANZ组的肝脏CAT活性显著高于其他各组(P<0.05)。3) ZO、NZO、LANZ、MANZ和HANZ组的空肠黏膜超氧化物歧化酶(SOD)活性显著高于ANT组(P<0.05)。ZO、LANZ组的空肠黏膜CAT活性显著高于CON和ANT组(P<0.05)。ANT、ZO、NZO、LANZ和HANZ组的空肠黏膜T-AOC显著高于CON和MANZ组(P <0.05)。4) HANZ组的回肠黏膜CAT活性显著低于CON组(P<0.05),ZO、NZO组的回肠黏膜谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性显著低于CON、ANT和LANZ组(P<0.05)。由此可见,断奶仔猪饲粮中添加适量凹土纳米氧化锌能够提高血清、肝脏和肠道中抗氧化酶的活性,增强仔猪的抗氧化性能。本试验中,饲粮中凹土纳米氧化锌适宜添加量为700 mg/kg。     

基于四环素调控系统构建白蛋白启动子调控大鼠uPA转基因表达的慢病毒载体

基于四环素调控系统构建白蛋白(albumin,Alb)启动子调控大鼠uPA(urokinase-type plasminogen activator,ruPA)转基因肝特异性过表达的慢病毒载体pLVX-Alb-TetOne-TRE-ruPA-T2A-CopGFP(pLATTRUTG)。以CTG0875-2-11质粒为模板,PCR扩增大鼠的uPA(ruPA)基因,3’端添加Flag标签,In-Fusion克隆至pLVX-Alb-TetOne-TRE-T2A-CopGFP(pLATTTG)质粒中,得到慢病毒载体pLVX-Alb-TetOne-TRE-ruPA-T2A-CopGFP(pLATTRUTG),所构建质粒经测序和酶切鉴定。将pLATTRUTG瞬时转染293T细胞,转染后24 h倒置荧光显微镜检测CopGFP表达;接着向6孔细胞培养板内加入强力霉素(Doxycycline,Dox),48 h后在倒置荧光显微镜下观察CopGFP表达(包括未加Dox的孔),随后收集细胞以提取总RNA和总蛋白,用于RT-qPCR检测ruPA及报告基因表达和Western blot检测标签蛋白Flag表达。酶切和测序确证我们成功构建了慢病毒载体pLATTRUTG;瞬转293T细胞后,24 h倒置荧光显微镜下可见零星细胞(约占0.1%)发弱的绿色荧光,加Dox 48 h后所有细胞展现强的绿色荧光,而不加Dox的孔内仍然只见到零星细胞(约占0.1%)发弱的绿色荧光。RT-qPCR和Western blot检测结果显示,与不加Dox的细胞相比,加Dox的细胞中ruPA、报告基因CopGFP和Flag表达水平显著升高。结果提示,成功基于四环素调控系统构建Alb启动子调控大鼠uPA转基因表达的慢病毒载体pLATTRUTG,为相关后续实验奠定了基础。     

家兔Zfx基因shRNA干扰载体构建及验证

研究主要是为了构建出针对家兔Zfx基因的shRNA重组载体及效果验证。根据家兔Zfx基因mRNA序列特征,设计出3条shRNA片段,再与线性化的pLL 3.7载体进行连接重组,最后经过qRT-PCR检测Zfx基因mRNA表达量筛选出有效重组表达载体并通过体内试验进行效果验证。结果表明:试验组shRNA-c和shRNA-f干扰效率分别为74%和67%,与空白对照组相比差异极显著(P<0.01);试验组shRNA-e干扰效果为17%,与空白对照组相比差异不显著(P>0.05)。用shRNA-c和shRNA-f进行体内试验,结果显示,两试验组雄性率分别为44.92%(P>0.05)和33.16%(P<0.01)。本试验成功构建针对家兔Zfx基因的重组载体,体内试验显示子一代出现性别偏移,说明Zfx基因对动物的性别决定有一定作用,关于导致体内验证出现反转的原因仍需进一步验证。     

HMBi对绒山羊绒毛品质及氨基酸转运载体基因表达的影响

试验旨在研究蛋氨酸羟基类似物异丙酯(HMBi)对哺乳期母羊和羔羊绒毛品质以及哺乳羔羊体内含硫氨基酸转运载体相关基因表达量的影响。选取27对年龄、体重、分娩日期相近且均产单羔的哺乳初期陕北白绒山羊母羊及其初生羔羊,随机分为3组(每组3个重复,每个重复3对母子),对照组饲喂基础日粮,试验组在基础日粮中分别添加2%和4%的HMBi。预试期10 d,正试期60 d。结果表明:(1)试验母羊绒毛和粗毛长度随HMBi添加水平提高有增加趋势,其中4%组母羊绒毛长度显著大于对照组(P0.05);各组试验羔羊绒毛、粗毛长度及绒毛细度均无显著性差异(P0.05);(2)母羊饲喂不同水平HMBi对其哺乳羔羊皮肤内SLC3A2基因的表达量和空肠内SLC1A5基因的表达量有显著影响(P0.05),SLC38A2和SLC6A19基因的表达量在各处理组之间无显著差异(P0.05);(3)在不同组织中,4种基因的肝脏表达量最高,皮肤表达量最低;在小肠不同区段,SLC3A2基因表达量由高到低依次为十二指肠、空肠、回肠,SLC38A2、SLC1A5和SLC6A19基因表达量由高到低依次为空肠、十二指肠、回肠。综上,哺乳期绒山羊饲粮中添加HMBi可提高母羊绒毛生长速度,但对其哺乳羔羊绒毛品质无明显影响;根据4种氨基酸转运载体相关基因表达量的表达规律,可以推测出:肝脏是氨基酸代谢较为活跃的场所;小肠中的十二指肠和空肠可能是肠道游离氨基酸被吸收的主要部位,而在回肠的吸收量较少。     

纳米蒙脱石护肠宝~(TM)替代氧化锌的应用实例

试验显示。添加3％。的纳米蒙脱石护肠宝TMSD3004S和添加3％。的氧化锌的乳猪饲料料肉比分别为1．59和1．64;腹泻情况分别为1头次（稠状不成形）和2头次（稠状不成形）;耗料量分别为259．30g和273．95g;在控制腹泻的发生频率和腹泻程度方面没有差异。提示在断奶仔猪日粮中纳米蒙脱石护肠宝TMSD3004S可完全替代氧化锌。与陈大水、王修启等的研究结果相一致。     

鸡β－防御素－2基因的克隆及原核表达载体的构建

鸡β－防御素是一类广谱抗茵阳离子小肽的总称,一般具有3个分子内二硫键。防御素对细菌、真菌乃至某些被膜病毒具有广谱杀伤作用。试验根据已发表的Gal－2基因序列,设计并合成了一对引物。以骨髓中的总RNA为模板,利用RT—PCR技术扩增目的片段并克隆到pGEM—TEasy载体上,经筛选鉴定获得阳性重组子pGEM—T—Gal－2。再经EcoRI、XbaI双酶切,插入pMAL—c2x质粒构建表达载体。利用PCR技术和酶切反应筛选转化子成功获得pMAL—c2x—Gal－2重组质粒。