脱毒大蒜无公害高产栽培技术

河南省杞县是全国最大的无公害大蒜生产基地之一，由于多年种植，品种退化严重，病虫害逐年加重，蒜头、蒜薹的产量和品质下降，严重影响了大蒜生产的进一步发展。2004年我们在国家农业科技成果转化资金项目的资助下与河南省农科院生物技术研究所合作．用组织培养繁殖的大蒜脱毒良种对其无公害高产栽培技术进行了系统研究。经过2年的试验、     

农杆菌介导的马铃薯试管薯遗转化体系的优化及反义class Ⅰ patatin基因的导入

用两个马铃薯栽培品种“鄂马铃薯3号”和“甘农薯2号”的试管薯为供体材料，建立了一种农杆菌介导的简单、快速和高效的遗传转化系统。在含有75mg／L卡那霉素的选择培养基上，2～3周可产生抗性芽，4～5周获得完整的转基因植株。筛选出了试管薯遗传转化的优化条件，特别是在再生培养基中加入2mg／L玉米素，两个品种的转化频率分别高达45．5％和43．9％。周期短(4～5周)、一步培养和转化频率高，使该转化体系能够广泛用于马铃薯转基因的研究。用含有反义class Ⅰ patatin基因的表达载体pBSAP转化两个品种，共获得120株卡那霉素抗性植株。PCR、PCR-Southern和Northern杂交分析证明，此反义基因已整合到马铃薯基因组中并在转基因植株中正常转录。反义基因的表达导致部分转基因植株的试管结薯株率和单株结薯数降低。结果表明，该class Ⅰ patatin基因可能参与了块茎形成的调控。     

转甜菜碱醛脱氢酶基因马铃薯的抗旱耐盐性

通过根癌农杆菌介导法将甜菜碱醛脱氢酶(BADH)基因导入马铃薯栽培品种甘农薯2号, 经PCR、Southern杂交和Northern杂交证明BADH基因已整合到马铃薯基因组中并在转基因植株中转录和表达。测定表明对照植株没有BADH酶活性, 各转化株系在胁迫前后BADH酶活性近似, 在2~11 U之间。BADH酶活性与叶片的相对电导率呈一定的负相关(y= –3.7738x+57.083, r=0.989^**)。在NaCl和PEG胁迫下, 转基因植株生长正常, 株高比对照提高0.41~1.00 cm, 单株重量比对照增加10%~35%, 说明外源BADH基因的导入提高了马铃薯植株对干旱和盐碱的抗性。     

根癌农杆菌介导籼稻遗传转化影响因素研究

研究了抗生素种类、继代和菌液浓度对农杆菌介导籼稻转化的影响，并将反义蜡质基因导入4个高产、直链淀粉含量高的籼稻品种中。结果显示，羧苄青霉素的抑菌效果优于头胞霉素，其适宜浓度为250～350mg/L；4个品种继代愈伤比初代愈伤能获得更高的抗性愈伤得率；各个品种转化有其最佳的农杆菌菌液浓度（OD600值），茉莉新占和绿黄占为1．0，粤香占和矮秀占为0．6。应用此优化的农杆菌转化体系，我们得到了转化植株；PCR扩增和Southem杂交结果证明外源基因已经整合到转基因水稻的基因组中。     

转Bt-CpTI-GNA基因棉花的研究

采用农杆菌介导法将外源三价抗虫基因(Bt-CpTI-GNA)导入常规棉花品种中,获得转基因再生株,分子检测表明外源基因已在棉花体内表达,并遗传给后代材料。PCR分子检测与转化的标记基因和外源目的基因抗性三者极有规律性。其所携带的基因在转基因棉花中有分离现象,这可能是外源基因整合到受体棉株体内“基因沉默”而引起所致。     

稳步推进草业科技成果转化的措施

近年来,赤峰市畜研所本着“科研立所、开发强所”的办所方针,围绕国家实施西部开发、生态环境建设战略,始终把“小草”当作大产业来抓。采取创办草业科研生产基地、蒙东草业公司等相关措施,稳步推进草业科技成果转化,取得明显的效益。     

根癌农杆菌介导ipt基因对切花菊的遗传转化

以根癌农杆菌(Agrobactcium tumefaciens)LBA4404菌株介导异戊烯基转移酶基因(ipt)转化切花菊(Dendrathema grandiflorum)，对转化材料进行连续的Kan抗性筛选，获得69株抗性株。部分植株经PCR和Southern blot检测呈阳性，对照均为阴性；ELISA检测抗性株衰老同期叶片内源iPAs含量是对照株的4．7倍。田间观察株型、叶色、花芽分化等性状和对照相比出现差异。叶绿素含量测定显示，抗性株叶片在花芽分化期、盛花期和衰老期总叶绿素含量分别是对照株的1．47、2．26和2．60倍。     

山羊乳腺上皮细胞的培养及EGFP基因转化

用组织块培养法获得山羊乳腺细胞原代培养物，并根据山羊乳腺成纤维细胞与上皮细胞对胰蛋白酶的敏感性不同将二者分离纯化。对细胞形态进行光镜观察发现：纯化的山羊乳腺上皮细胞传代至第15代时其生长仍正常。纯化的乳腺上皮细胞增殖可形成圆顶型结构，呈乳头状，称之为乳球体；乳腺上皮细胞可产生并分泌乳汁。山羊乳腺上皮细胞含不同的细胞类型，大多数上皮细胞呈短梭形或多角形，呈蜂窝状；部分细胞呈圆饼状，体积较大；部分细胞呈长形。采用电穿孔法将绿色荧光蛋白（EGFP）基因转化体外培养的山羊乳腺上皮细胞，荧光显微镜下观察到EGFP基因的表达。     

农药在土壤中迁移及其影响因素的初步研究

本文运用非饱和土壤中水分运动和溶质运移基本理论,建立了非饱和土壤中农药运移的数值模拟模型.模型中考虑了农药在土壤中迁移与转化的主要过程:附土壤水分的对流;水动力弥散;土壤吸附及生物化学降解等.模型得到了室内土柱中灭幼脲-Ⅲ号杀虫剂淋溶试验的验证.文中分析了各种因素对该农药存土壤中迁移的影响,并且对两种不同的农药进行了比较.研究表明,在本文所研究的条件下影响农药在土壤中迁移与转化的主要因素是土壤吸附和农药在土壤中的降解.     

土壤酸度与代换性氢、铝的关系

1.近百个红黄壤类土壤标本的分析结果表明,我国酸性土壤的代换性酸主要是由铝离子所引起。代换性氢量一般都很少,仅占总酸度的(?)1—3%,只有在土壤含有大量有机质时,氢量才可超通每100克土壤中0.1毫当量。土壤pH 在5.5以上时,代换性铝量即很少。2.滴定曲线和氢铝的转化试验指明,在人为地制成氢质土壤后,代换性氢也会逐渐为铝离子所代替,这种转化过程进行极快,主要发生于最初的一小时内。有机质含量对氢铝的转化速度有一定影响,土壤的有机质含量愈高,则转化速度愈慢。3.土壤用酸处理以去除一部分易分解的铝以后,非代换性铝转化成代换性状态者的速度减低。但是即使在用浓酸处理以使晶格受到剧烈破坏以后,仍有大量铝迅速转化为代换性状态,说明晶格中的铝也可与氢相代换。4.各种土壤中的代换性铝易于被KCl 溶液代出的程度(活动度)是不同的,高者97%,低者仅30%;在灼烧以后,活动度降低。5.作者根据所得的试验结果而认为,氢质土是不稳定的,在自然情况下,即使有氢离子进入土壤的吸收复合体,也会逐渐为铝离子所代替。