大豆耐盐相关基因GmNcl1的序列单倍型及表达分析

【目的】鉴定大豆基因GmNcl1的序列多态性,探求逆境下该基因的表达模式。【方法】通过BLASTP比对GmNCl1的氨基酸序列,寻找同源基因。测定50个大豆品种中GmNcl1的启动子和基因的DNA序列差异以及这些品种的耐盐性差异,利用MAGE软件进行单倍型聚类分析和进化树分析,寻找品种耐盐性和序列间的相关性。以耐盐品种铁丰8号和盐敏感品种85-140的幼苗根为材料,利用实时荧光定量PCR分析GmNcl1在多种处理下的表达模式,处理条件包括蛋白抑制剂阿米洛利（Na+/H+逆转运蛋白抑制剂）和钒酸钠（Ca2+-ATPase抑制剂）、pH4.0 和pH5.7、ABA处理及多浓度盐、碱、旱逆境胁迫。【结果】GmNcl1与拟南芥的Na+(K+)/H+交换蛋白CHX同源。GmNcl1序列有单核苷酸序列多态性位点16个和插入缺失位点2个,其中,包括一个位于外显子3的G/A（敏/耐）碱基改变,引起丙氨酸到苏氨酸的非同义突变。18个变异位点共组成14个单倍型,其中,耐盐品种有3种单倍型,盐敏感品种有11种单倍型。由6个位点组成的单倍型GAGATATTC（耐）/TTT----CT（敏）能高效区分耐盐和盐敏感品种。大豆幼苗根中的GmNcl1在阿米洛利处理下表达量增加,在钒酸钠处理下表达量不变。GmNcl1在碱性pH处理下表达量增加,在酸性pH处理下呈现上调和下调波动。GmNcl1受ABA诱导上调表达。在碱和旱胁迫下表达强度增大,在盐胁迫下上调表达最为明显,3种逆境胁迫强度越大,GmNcl1表达量上调幅度越大。耐盐品种铁丰8和盐敏感品种85-140的GmNcl1在盐处理下有近似的上调表达趋势,但85-140中GmNcl1的上调幅度大于铁丰8。【结论】GmNcl1与Na+(K+)/H+交换蛋白高度相似,该基因的序列多态性与耐盐相关,GmNcl1参与调节pH平衡,受ABA强烈诱导,响应盐、碱、旱胁迫。     

离子交换色谱法对肌肉中钙激活酶分离纯化的研究

试验通过离子交换色谱法对肌肉中钙激活酶(Calpain)进行定量分析研究,确定了Calpain粗提液制备工艺。对Calpain粗提液进行全波长紫外扫描说明276～280nm处有一个吸收高峰。应用DEAE离子交换层析对Calpain进行纯化,用0～500mmol·L-1NaClTris-HCl进行离子强度线性梯度洗脱,在280nm波长下测定洗脱液的光吸收值,洗脱得3个蛋白峰,μ-Calpain和m-Calpain分别在NaCl为130～180mmol·L-1和260～300mmol·L-1时洗脱下来,钙激活酶抑制蛋白(Calpastatin)在NaCl为70～110mmol·L-1时洗脱下来。Calpain分子量为110000u,通过电泳试验表明,本检测结果提取液正好在分子量约为110000u处有一条清晰的带,说明所得提取物为Cal-pain,而且纯度较高。     

玉米淀粉浸泡水的回用及内循环反应器的应用——以我国西北某企业为例

玉米淀粉生产废水属高浓度有机废水,可生化性好,处理难度大。以我国西北某玉米淀粉生产企业为例,采用离子交换柱将玉米浸泡水提取菲叮,玉米浸泡水回用率达到100%,并在原污水处理站工艺上增加了IC(内循环)反应器,使处理后污水目标水质达到《污水综合排放标准》(GB8978-1996)一级排放标准,大大减少污染物的排放,对控制玉米淀粉生产废水的污染有重要借鉴意义。     

鸡蛋清中溶菌酶的分离提取

采用二次硫酸铵沉淀和离子交换层析透过法分离溶菌酶,并用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS\|PAGE）检测其纯度,研究鸡蛋清中溶菌酶的分离提取工艺。鸡蛋清原液用Tris\|HCl缓冲液稀释5倍,4℃下静置6 h,经50%硫酸铵沉淀后收集上清,再经80%硫酸铵收集沉淀后溶于pH 90的Tris\|HCl后经Q\|Sepharose FF阴离子交换层析直接在透过液中一步就可分离得到SDS\|PAGE电泳纯的溶菌酶,酶比活由14413 U·mg-1提高到2 235 U·mg-1,酶活提高超过15倍,回收率为1576%。通过硫酸铵两级沉淀后只需收集Q\|Sepharose FF阴离子交换层析的透过液即可分离得到溶菌酶,同时还可一次性制备其他中性和酸性蛋白,简化了工艺,降低了生产成本。     

Ultrafiltration and Ionic Exchange Purification of ACE Inhibitory Peptides from Hydrolysate of Porphyra yezoensis Protein

对条斑紫菜ACEI抑制肽进行了超滤分离和离子交换纯化的试验研究.先后采用截留分子量分别为10 kDa和3 kDa的超滤膜对条斑紫菜ACEI抑制肽超滤,分子量小于3 kDa的组分对ACE活性抑制最高,多肽的IC50值从超滤前的0.844 mg/mL下降到0.523 mg/mL.南开D61阳离子树脂对分子量小于3 kDa的ACEI抑制肽组分吸附率最大,用不同浓度氨水阶梯洗脱,得到第2个洗脱峰的蛋白回收率和活性回收率最高,分别为45.2％和61.5％,其IC50值最低,为0.127 mg/mL,比纯化前下降了75.7％.     

禾谷镰刀菌14α-脱甲基酶的原核表达与纯化

近年来,三唑类杀菌剂成为生产上防治小麦赤霉病(Fusarium Head Blight,FHB)的主要药剂,主要作用于甾醇生物合成中的14α-脱甲基酶(CYP51),使真菌麦角甾醇的合成受阻,从而破坏细胞膜功能,起到杀菌的功能.本研究的目的是采用结构生物学的方法探究禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)中14α-脱甲基酶(FgCYP51B)的三维结构、生化功能以及其与三唑类杀菌剂的互作机制,进一步阐释禾谷镰刀菌对三唑类杀菌剂潜在的抗性风险.以禾谷镰刀菌(F.graminearum)的cDNA为模板,根据14α-脱甲基酶基因(FgCYP51B)序列设计特异性引物进行PCR扩增,克隆了FgCYP51B基因并构建了3个全长表达载体pHAT2-CYP51B、pETM-20-CYP51B和pETM-30-CYP51B以及3个蛋白截短体表达载体pHAT2-CYP51B50-527,pETM-20-CYP51B50-527和pETM-30-CYP51B50-527,将重组表达载体转化到大肠杆菌BL21(DE3)和Rosetta(DE3),并利用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达.结果表明:全长FgCYP51B蛋白在BL21(DE3)和Rosetta(DE3)中均不表达;重组蛋白pHAT2-CYP51B50-527在大肠杆菌中不表达,而重组蛋白pETM-20-CYP51B50-527和pETM-30-CYP51B50-527成功表达,并通过亲和层析、离子交换与分子筛对重组蛋白进行纯化.该蛋白的表达与纯化为其结构功能的研究奠定了基础.     

离子交换层析法纯化羊血SOD及其稳定性研究

以羊血为原料,通过热处理、透析、离子交换层析等方法获得SOD提取物,测定其酶活力和蛋白质含量,并从温度、pH稳定性和外源试剂耐受性等几个方面对SOD稳定性进行了研究.结果表明:经过离子交换层析后,SOD的比活力达到5289.1U·mg-1,回收率为60%,纯化倍数为25.3倍;在40～60℃保温30min,SOD酶活力基本不变;pH6～9范围内SOD的稳定性较好;SOD对2mmol·L-1H2O2和尿素较敏感,2mmol·L-1SDS对SOD没有明显的抑制作用.     

植物原料的水解及其产品的加工技术(中)

三、呋喃呋喃又名氧杂茂,无色透明液体,具有氯仿气味。熔点为-85.68℃,沸点为32℃,相对密度0.937(20℃),溶于乙醇和乙醚等,不溶于水,易挥发,并易燃烧,对酸不稳定,是一种有机合成原料。     

树脂膜测定氮肥在不同酸度黑土的铵态氮变化

采用阳离子交换树脂膜对3种肥料(尿素、硫酸铵、氯化铵)5种pH值(5、5.5、6、6.5、7)黑土中的NH4+-N进行提取研究。结果表明,3种肥料铵态氮释放速率在施肥后35 d内增加较慢,在施肥后35～49 d速率增加最快,尿素相对于硫酸铵、氯化铵速率增加较慢;用该方法提取铵态氮在土壤中的累计释放量也是在35 d内增加较慢,在施肥后35～42 d累计量增加较快,在42 d以后累计量增加最快;以施尿素的铵态氮累计提取量在各酸度土壤中最小,施硫酸铵的铵态氮累计提取量除在pH5.5黑土外都为最大;施尿素铵态氮提取量随土壤pH值增大而减小。     

自聚焦透镜最佳离子交换时间的实验研究

介绍了用离子交换法制作铊型自聚焦透镜及其干涉片工艺, 通过对经过不同交换时间的自聚焦透镜的折射率分布的测试及成像特点的分析, 得出透镜离子交换时间与交换深度、折射率分布的关系, 由此确定用离子交换法制作自聚焦透镜的最佳离子交换时间.