抗根肿病桔红心大白菜甲型“两用系”转育研究

根据大白菜"核不育复等位基因遗传假说"、抗根肿病基因和球心色的遗传规律,提出抗根肿病桔红心大白菜甲型"两用系"转育模式。依照转育模式采用杂交、回交、自交、系内交和测交等方法,对不同转育世代依次进行球心色筛选、抗性鉴定、经济性状筛选和育性调查,经过4代转育得到抗根肿病桔红心大白菜甲型"两用系"。     

鸭肝炎病毒RT-PCR检测方法的建立与应用

根据鸭肝炎病毒(Duck Hepatitis Virus,DHV)3D基因序列,设计合成1对引物,通过优化RT-PCR反应条件,建立了DHV的RT-PCR检测方法。特异性试验结果显示,该引物仅特异性扩增出DHV 460 bp的特异性片段,而扩增鸭瘟病毒(DPV)、鹅细小病毒(GPV)、番鸭细小病毒(MDPV)和鹅副粘病毒(GPMV)的核酸扩增结果均为阴性;敏感性试验结果显示,该方法能检测到100 pg的DHV核酸;对6份临床病料进行RT-PCR扩增,DHV的检出率为83.33%(5/6)。结果表明:该方法具有良好的特异性和敏感性,可对临床病料中的DHV进行快速检测。     

丙型肝炎病毒NS4B蛋白调控Hep3B细胞非折叠蛋白质反应研究

研究表达的丙型肝炎病毒(HCV)NS4B对Hep3B细胞非折叠蛋白质反应的影响。NS4B重组真核表达质粒pcDNA3.1(-)NS4B通过脂质体转染Hep3B细胞,G418筛选和Western blot鉴定稳定转染细胞;RT-PCR检测稳定转染细胞内XBP1 mRNA剪接,Western blot鉴定ATF6蛋白切割,荧光素酶试验检测稳定转染细胞内GRP78和XBP1启动子活性。G418筛选和Western Blot鉴定证实获得稳定表达NS4B的Hep3B细胞;在该细胞内,XBP1 mRNA剪接、ATF6切割、XBP1和Grp78启动子激活均被检测到。NS4B在Hep3B的稳定表达诱导了非折叠蛋白质反应。     

鸭肝炎病毒Ⅰ型基因片段的原核表达及单克隆抗体的制备

根据Genebank上已报道的鸭肝炎病毒Ⅰ型基因的全长序列,设计了1对引物,通过RT-PCR方法扩增出特异的DHV-Ⅰ基因片段;将该片段克隆入原核表达载体pET-28a,转化大肠杆菌Rosetta-gami(DE3),并用IPTG诱导表达后,通过Ni柱纯化,获得了表观分子量在20kD左右的融合表达蛋白;将表达纯化后的蛋白作为抗原,免疫BALB/c健康小鼠,筛选和制备了1株DHV-Ⅰ单克隆抗体细胞株。Western-blot及ELISA分析表明:表达的重组蛋白均能与鸭DHV-Ⅰ阳性血清和制备的DHV-Ⅰ单克隆抗体产生反应。同时,制备的DHV-Ⅰ单克隆抗体除了能与重组蛋白反应,还能识别天然的DHV-Ⅰ病毒蛋白。     

鸭病毒性肝炎的防制措施

鸭病毒性肝炎,是雏鸭的一种传播迅速的急性传染病,死亡率高达90%左右。病程极短,主要病变在肝脏,其特征是肝炎、肝体积肿大并有出血斑点。1流行特点本病主要发生于雏鸭,临床上以3周龄以内的雏鸭群为多发阶段,3～5周龄的雏鸭也可感染发病,一旦发病,迅速传播,死亡率20～60%不等,个别     

猕猴病毒性肝炎流行病学研究

人类病毒性肝炎(viral hepatitis)是由多种病毒引起的人类以肝细胞肿胀、汇管区水肿和炎性细胞浸润导致肝肿大为特征的一组传染病,是世界上流行久远、广泛、危害极大的传染病之一〔1,2〕。自1963年Blumberg发现乙型肝炎病毒(HBV),由于新方法的不断建立,大约每5～10年发现一种新的肝炎病毒,1973年Feninstone用免疫电镜法发现甲型肝炎病毒(HAV),1977年Rimeto用免疫荧光法发现丁型肝炎病毒(HDV),1983年Balayan用免疫电镜法发现戊型肝炎病毒(HEV),1978年Alter等发现了丙型肝炎病毒(HCV)〔3,4〕,1995年     

科技进展

瑞士屠宰场健康猪戊型肝炎和沙门氏菌抗体的血清阳性率调查戊型肝炎病毒(HEV)和沙门氏菌可通过被污染的食物传染给人,猪是它们的储存器。本研究的目标是检测瑞士屠宰场健康猪抗HEVIgG和抗沙门氏菌的抗体血清阳性率(瑞士与其他欧洲国家相比猪群健康情况要好的多,已经根除了地方性肺炎,而且瑞士的活猪进口率很低——低于1%)。基于对200个肉汁样品(每个生产商饲养的3～5个动物的膈肌肌肉制作一个肉汁样品)的检测,抗HEVIgG和抗沙门氏菌抗体阳性样品分别为120个(60%)和8个(4%)。从结果可以看出HEV在瑞士的育肥猪群中高度流行,而沙门氏菌的抗     

密码子优化的甲型H1N1流感病毒HA基因DNA疫苗在小鼠体内免疫保护效力研究

为了提高甲型H1N1流感病毒HA基因DNA疫苗的免疫原性,本研究将流感病毒rPan09(HA和NA来自A/California/04/09,其余6个片段来自PR8的重组病毒)的HA基因通过人工合成的方法将其密码子优化为哺乳动物体内偏嗜性密码子opti-HA,同未优化的rPan09的HA基因分别与真核表达载体pCAGGS连接构成重组质粒pCA-optiHA和pCA-HA转染293T细胞,48 h后采用间接免疫荧光的方法检测HA基因的体外表达情况,结果显示重组质粒pCA-optiHA的蛋白表达量明显高于pCA-HA。为评价这两种重组质粒的免疫及保护效力,选取6~8周龄雌性BALB/c小鼠,将质粒pCA-HA、pCA-optiHA以100μg/只的剂量,进行后腿肌肉多点注射,同时设立空载体pCAGGS对照,共免疫3次,每次间隔2周。结果表明DNA疫苗pCA-optiHA可显著提高小鼠的体液免疫和细胞免疫应答水平。三免2周后用107.45EID50的rPan09采用滴鼻方式进行攻毒,用Real-time PCR及制作肺组织石蜡切片检测DNA疫苗的保护效力。结果表明,pCA-optiHA免疫组的保护效力明显高于pCA-HA免疫组。本研究为进一步研究和设计有效的甲型流感病毒DNA疫苗奠定了基础。     

戊型肝炎病毒感染SD大鼠动物模型的建立

为了研究戊型肝炎病毒(HEV)4型感染远交群(SD)大鼠的全过程,试验将HEV阳性猪粪便上清液接种33只SD大鼠,动态观察动物感染前后丙氨酸转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALKP)、总胆红素(TBIL)水平的变化及血清、粪便中HEV RNA的产生,病理组织学变化及HEV在各脏器中的分布情况。结果表明:接种后TBIL水平均正常,感染后血清ALT、AST、ALKP水平均同步上升;肝脏组织出现肝细胞变性、肿胀等变化;脾脏组织出现多核巨噬细胞增多,淋巴细胞稀少等变化;淋巴结无病理变化。感染第5天在肝脏、脾脏、淋巴结细胞核内均检测到HEV病毒抗原。粪便和血清中均能检测到HEV RNA,第28天没有检测到病毒,说明SD大鼠是HEV 4型的易感动物。