牛源性成分LAMP检测方法的建立

根据牛cytB基因设计3对特异性引物,运用GenieⅡ等温扩增荧光检测系统,以环介导等温扩增(LAMP)荧光检测方法为基础,建立了牛源性成分LAMP检测方法,并对该方法进行了反应体系和条件的优化。试验结果表明:该方法操作简单、特异性好;灵敏度比普通PCR方法高100倍,达到5.408×10~(-2)μg/μL;反应时间短,最快的10分钟内即可完成反应。     

氧氟沙星联合多西环素对牛源大肠杆菌突变选择窗的研究

研究氧氟沙星与多西环素联用对牛源大肠杆菌耐药突变选择窗(MSW)及防突变浓度(MPC)的影响。该试验通过琼脂二倍稀释法分别测量了氧氟沙星(OFL)及多西环素(DOX)两药单用及联合用药时牛源大肠杆菌临床分离株E.coliⅠ、E.coliⅡ。试验结果测得E.coliⅠ、E.coliⅡOFL单独用药时MSW为2.95、9.74,DOX单独用药时MSW为48.43、53.64,OFL及DOX联合应用时对OFL其MPC分别缩小了4倍、6倍,与8MIC浓度DOX联用时分离株E.coliⅡMSW完全关闭。研究表明,OFL和DOX联用,可以缩小各自单独用药对牛源大肠杆菌的MSW,降低其MPC,减少耐药突变菌株产生。     

动物源性饲料中牛源和羊源性成分的检测方法

主要介绍了几种动物源性饲料中牛源和羊源性成分检测较为常用的检测法:显微组织检测法、免疫学法、近红外光谱检测法和PCR检测法以及不同检测方法的适用范围,重点介绍了PCR检测法及注意事项。     

牛源肺炎克雷伯氏菌的分离和鉴定

牛源肺炎克雷伯氏菌的分离和鉴定陈兴生叶育桐（海南省定安县兽医诊断室，５７１２００）陈永林（中国兽药监察所）肺炎克雷伯氏菌为肠杆菌科的条件病原菌，能使人畜发生肺炎、子宫炎、乳房炎及其它化脓性炎症，甚至发生败血症，对人畜具有高度病原性［１，２］。我们在开...     

应用PCR-RFLP法鉴别肉制品中的猪和牛源性成分

以动物线粒体DNA中Cytb区段的保守序列为目的基因进行PCR-RFLP,从猪、牛、羊、鸡、鸭、兔6种生肉及高压猪肉、猪肉火腿肠、猪肉枣、猪肉松、牛肉干、牛肉枣、牛肉火腿肠7种加工肉制品中鉴别出猪源性和牛源性成分.所有样品经PCR扩增均产生359 bp的片段.扩增子采用AluⅠ限制性酶切所产生的片段差异可用于区分猪肉和牛肉.     

一种牛肉检测的荧光实时定量方法研究

[目的]开发一种用于牛源性成分检测的荧光实时定量检测方法。[方法]通过序列比对后,以牛源性线粒体DNA中cytb基因为模板,设计特异性的引物和探针,并以不同来源的DNA为模板,分析引物和探针的特异性。对牛源性DNA进行梯度稀释后,分析不同浓度下扩增曲线,分析检测方法的灵敏度。以牛源性DNA稀释液为模板,进行10个平行扩增试验,分析检测方法的精密度。[结果]该研究所用的引物和探针对牛源性DNA具有明显的扩增曲线,而对非牛源性(鸡、鸭、猪、人)DNA模板不进行扩增。灵敏度分析结果显示,该检测方法对浓度仅为24.4 pg/μL牛源性DNA模板仍进行阳性扩增。精密度分析显示,10个平行试验扩增曲线相似,Ct值的标准差(SD)仅为0.41,精密度(CV)也仅为1.6%。[结论]该研究开发的牛肉成分检测的荧光实时定量方法特异性高,仅对牛源性DNA发生扩增。同时该方法灵敏度也很好,检出限为24.4 pg/μL,精密度也很高,重复性良好,适用于市场上肉制品中牛源性成分的检测。     

牛源抗腹泻芽孢益生菌的分离与N-4菌株的鉴定

为了获得对痢疾病原菌有拮抗作用的益生菌株,以0.5%牛胆酸盐为筛选压力,痢疾杆菌菌株作为病原指示菌,从健康青年牛的粪便中,分离对痢疾杆菌具有拮抗作用的产芽孢菌株。通过平板生长对峙法进行初筛,共得到对痢疾杆菌具有拮抗作用的菌株26株,利用发酵液平板打孔法进行复筛,选出1株拮抗活性较高的菌株N-4,抑菌圈直径达到17.6 mm。根据N-4菌株形态和生理生化特征,结合对N-4菌株的16S rDNA序列分析结果,最终鉴定N-4菌株为Bacillus amyloliquefaciens。     

牛源MRSA新疆流行株的分离鉴定及spa基因多态性分型

[目的]明确新疆地区牛源耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)流行株的流行特点,为有效防控新疆奶牛乳房炎和子宫内膜炎提供参考依据.[方法]采用分离培养、生化鉴定、药敏试验等方法对牛源MRSA进行鉴定,并以PCR扩增牛源MRSA新疆流行株spa基因的X区,测序结果列提交至spa分型数据库(http://www.ridom.de/spaserver/)进行spa基因多态性分型.[结果]从221份样品中共检测出71株金黄色葡萄球菌,其中对苯唑西林抑菌直径小于10 mm的有8株;而以mecA引物进行PCR扩增,发现扩增结果呈阳性的有13株,MRSA检出率为18.3%.spa基因分型有4种,分别为t779、t2883、t13751和t1939,其中5株为t779(r08),4株为t2883(r07-r23-r21-r17-r34),2株为t13751(r07-r23-r12-r21-r17-r12),2株为t1939(r07-r23-r02-r34),即t779(r08)为MRSA新疆流行株的主要spa基因分型.[结论]MRSA在新疆不同地区均有分布,且其耐药情况不断变化,以t779(r08)为MRSA新疆流行株的主要spa基因分型.     

吉林省育肥牛呼吸系统疾病的病原分离鉴定及耐药性分析

以吉林省规模化肉牛养殖场为监测基地,对2010年²012年期间发生呼吸系统疾患的病牛进行病原分离与鉴定,共获得8株牛源荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌和2株牛支原体。耐药性检测结果表明,大部分牛源荚膜血清A型巴氏杆菌为多重耐药株,且不同养殖场所分离的菌株耐药谱不同,2株牛支原体对受检药物相对敏感。     

应用三重PCR方法鉴别肉制品中猪和牛源性成分

<正>近年来,江苏、山西等地出现的猪肉合成假牛肉事件引起人们高度关注,这些假牛肉不但严重危害群众的身体健康,也极易造成由于宗教信仰引发的矛盾和纠纷(伊斯兰教禁食猪肉)。因此肉制品的成分鉴别已成为食品检测部门和消费者所共同关心的问题,为调查珠海市场上是否存在猪肉合成的牛肉制品,应用通用的真核、猪线粒体、牛线粒体DNA保守序列建立一套准确、快速的三重PCR方法鉴别肉制品中猪和牛源性成分,对珠海地区流通的不同品牌的牛肉制品检验是否