猪低蛋白日粮研究进展

低蛋白日粮具有节省成本,低氮污染等经济的和环境的优势。利用猪的理想蛋白模式,采用可消化氨基酸和净能体系等技术配制玉米和豆粕为主要原料的猪日粮时,通过补充合成氨基酸,降低日粮蛋白水平(2%～4%)能使氮的排出量显著减少,且不影响猪的生长性能。     

表达猪瘟兔化疫苗株E0蛋白的PK-15细胞系构建

将克隆到pGEM T-easy载体中的E0基因双酶切回收后，连接到增强型绿色荧光蛋白（EGFP）中，利用Lipofectamine^TM2000将重组子转染PK-15、BHK-21、VERO 3种细胞，直接在荧光显微镜下用蓝光激发进行观察，在3种细胞中都可以观察到绿色荧光，而且在转染后的24、48、72 h 3个时间点上，观察到的荧光细胞数量逐渐增多，在72 h时荧光细胞的数量在3种细胞中都达到最多，总的来看，在PK 15中荧光细胞的数量最多。通过对细胞荧光的定位发现，重组质粒的荧光主要分布在胞浆内，而且细胞核周围的荧光较强，胞核与胞浆的界限明显，尤其是在PK-15细胞和VERO细胞中这种现象尤为明显。未携带E0目的DNA的pEGFP-N1 Vector转染3种细胞后，都可以观察到绿色荧光，但是整个细胞中是均匀出现荧光的。经酶切、PCR、单抗间接免疫荧光检测，PK-E0细胞中有大量的HCLV的E0表达，单纯的PK-15细胞中没有E0的表达。HCLV株在PK-E0细胞中从48h开始到72h的滴度比在PK-15细胞中的滴度要高。证明PK-E0细胞中E0蛋白的大量表达增加了HCLV在细胞中的复制。     

Prokaryotic Expression and Polyclonal Antibody Preparation of σC Protein of Novel Duck Reovirus DH13 Strain

The aims of the experiment was to optimize the prokaryotic expression system of σC protein,prepare polyclonal antibody against σC protein of novel duck reovirus (NDRV),and evaluate the titer of the antibody.The σC gene of NDRV-DH13 strain was amplified by RT-PCR,ligated into pET-30a(+) and pET-32a(+) expression vector,constructed prokaryotic expression plasmid,which were transformed into E.coli BL21(DE3) and the expression of the σC protein were induced by IPTG.The proteins expression were analyzed by SDS-PAGE.The recombinant protein without His tag was purified by digestion,and the recombinant protein with His-tagged was purified by Ni-NTA column.Then the polyclonal antibody was obtained from rabbits which had been immunized by the purified protein without His tag.Anti-His-labeled mAb and NDRV-σC positive serum were used as primary antibodies to evaluate antibodies specificity,the antibodies titer was detected by indirect ELISA (iELISA).SDS-PAGE results showed that the molecular weight of the expression on recombinant proteins were 34 and 37 ku respectively,the proteins were highly expression.Western blotting showed that they had the specific reaction and the prepared antibodies had higher affinity with σC protein,the titer were about 1:25 600 by iELISA detection.This study successfully constructed and optimized the prokaryotic expression system of the polyclonal antibody against σC protein,laid a foundation for the further study of σC protein and the research of genetically engineered vaccine.     

4株鸭源肠球菌的鉴定和致病性

对临床分离的4株鸭源肠球菌郑1株、郑2株、郑3株、北京株和1株粪肠球菌参考菌株进行了系统鉴定,并用SDS-PAGE和Western-blot技术对各菌株细胞壁蛋白图谱进行比较分析。结果5个菌株的形态、染色、生理生化特性均与粪肠球菌特性一致;它们均对青霉素、万古霉素和庆大霉素敏感而对四环素耐药;5个菌株人工感染雏鸭及小白鼠均有致病性,但各菌株间致病力存在差异,北京株最强,参考株最弱,其余3株介于北京株和参考株之间;各菌株的细胞壁蛋白经SDS-PAGE在相对分子质量33 370~131 690之间均显示数十条蛋白带,其中郑2株和北京株在相对分子质量66 840处均有1条染色较深的蛋白带,而用Western-blot分析显示抗北京株胞壁蛋白抗体只能检测到北京株相对分子质量为66 840的抗原蛋白。以上结果表明,这5个被检菌株为致病性粪肠球菌,且致病性以北京株最强。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白Nsp9基因的克隆与原核表达

通过PCR方法从重组质粒pSK-B2扩增得到非结构蛋白Nsp9的基因片段。将基因克隆至原核表达载体pET-28a( ),得到重组表达载体pET-28-Nsp9,转化Escherichia coliBL21(DE3)细胞。经IPTG诱导,Nsp9蛋白以包涵体形式表达,SDS-PAGE分析表明重组蛋白的分子量约为27.3 kD,表达量占菌体蛋白的43.2%。Western-Blotting结果表明重组蛋白可被PRRSV阳性血清所识别。表达的重组蛋白为进一步研究PRRSV的免疫特性和分子生物学功能奠定了基础。     

猪繁殖障碍与呼吸道综合征病毒基因组及其结构蛋白的研究

猪繁殖障碍与呼吸道综合征病毒是猪的一种重要传染性疾病的病原。作者对该病毒粒子的形态结构和理化特性、基因组的结构和功能、基因组的转录与表达和病毒结构蛋白及其有关免疫学特性进行了综述。     

热应激对肉鸡试验性大肠杆菌病发病过程的影响

研究37℃热应激对肉鸡试验性大肠杆菌病发病过程的影响。结果表明,热应激条件下感染大肠杆菌肉鸡比单纯感染大肠杆菌肉鸡的临床症状出现晚、持续时间短,脏器病变率降低,死亡率极显著下降(P<0.01)(10%,55%),体温和呼吸频率极显著升高(P<0.01)。结论:37℃热应激在一定程度上可能会阻断肉鸡大肠杆菌病的发病过程。     

猪脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白基因Bsm Ⅰ位点多态性与肌内脂肪含量的相关研究

本研究利用PCR—RFLPs标记技术，对中国地方猪种雅南猪、大河猪、培育品种大河乌猪以及三元杂交群体DLY共113头个体的脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白基因的内含子Ⅰ区域进行了分析研究，发现BsmⅠ酶切位点具有多态性，并分为3种基因型（即AA、BB和AB型），通过构建固定效应模型，分析了基因型与肌内脂肪含量的关系。结果表明：基因型从的肌内脂肪含量极显著的高于基因型AB和BB（P〈0．01）。     

嗜热毛壳菌纤维素酶对小尾寒羊瘤胃代谢的影响

本试验研究不同水平嗜热毛壳菌纤维素酶对小尾寒羊瘤胃代谢的影响。试验动物为4只安装有永久性瘤胃瘘管的成年小尾寒羊公羊(平均体重为45 kg),采用4×4拉丁方试验设计,在基础日粮中分别添加0％、0．3％、0．6％和0．9％4个水平酶制剂,采集瘤胃液测pH值、氨氮浓度和挥发性脂肪酸(VFA)浓度。试验结果表明:各组试羊瘤胃液平均氨氮浓度的变化范围为10．01-12．80 mg/dL,各组之间相同时间点差异不显著(P>0．05)。瘤胃液平均pH值在6．50-6．80范围内变动,试验组pH值低于对照组(P<0．05),以0．6％水平较好。各组试羊瘤胃乙酸、丙酸及总 VFA浓度的变化规律基本相同,即喂料后逐渐上升,其中乙酸和总VFA浓度在2 h后达到最高点,丙酸浓度在4 h 达到最高点,随后平稳下降于饲喂前降至最低点,再次采食后又重复出现此规律。试验组瘤胃乙酸和总VFA浓度显著或极显著高于对照组(P<0．05或P<0．01),以0．6％水平组最高。     

哈默教授眼中的中国养猪业

未来10年,中国动物蛋白的消费将成倍增长,而这种增长需要依靠高效率和高性能的生产得以实现。现代高效率养猪业依赖于学科的综合应用,这必将使养猪业经历一场技术革新,使得产品在产量、质量和生产效率等方面得到改善。在过去的5年时间里,哈默国际工作网络的专家组足迹已踏遍中国的大江南北,并先后与国内近20家饲料企业建立合作关系。他们将先进的技术和管理理念引入中国,在一定程度上加速了中国养猪业的发展。那么,这些国外动物营养专家如何看待中国的养猪业?在全球逐步一体化的今天,我们在产品技术的研发方面应该做哪些准备?面对动物疫情频发而食品安全呼声愈加强烈的矛盾,我们又该如何解决这一问题?《中国畜牧杂志》携您一起走近哈默,再次审视中国养猪业。