生物技术在植物检疫检测中的应用

深入阐述了近年来免疫学技术(包括酶联免疫法、免疫荧光技术、斑点免疫法、免疫电镜技术、免疫染色标记技术及其他抗体介导的检测方法)、核酸技术(包括核酸探针、RFLP技术、PCR技术等)在植物检疫检测方面研究取得的巨大进步，同时，对生物技术的应用进行了展望，认为今后随着技术的不断改进和试验程序的简化，其免疫学及核酸技术在不久的将来作为常规的检疫检测手段将会变成现实。     

在低温锻炼中毛白杨幼苗可溶性总蛋白、RNA、DNA、RNase及抗冻性的变化

低温锻炼不仅提高了毛白杨幼苗存活率和抗冻性以及RNA和可溶性总蛋白的含量 ,降低了RNase活性 ,而且能减轻低温胁迫引起的RNA和可溶性总蛋白含量的下降程度和RNase活性的提高 ,有利于幼苗在恢复过程中RNA和可溶性总蛋白水平的迅速回升以及RNase活性的降低 .进一步研究发现 ,DNA含量无论在低温锻炼中还是在低温胁迫下或是在随后的恢复生长期均保持相对稳定 ;低温锻炼所引起的RNA含量的增加 ,与RNase活性的降低呈明显的负相关 ,与可溶性总蛋白含量的增加以及幼苗抗冻性的提高成正相关 .这表明低温锻炼可能抑制RNase活性 ,有效地促进RNA含量的增加 ,而RNA可能参与了可溶性总蛋白的合成及抗冻性的诱导     

枣树愈伤组织培养中几种物质的变化研究

枣树愈伤组织在继代培养中,前期(第5～15天)淀粉、还原糖、蛋白质、核酸的含量都在增加;在第15～35天,淀粉和还原糖的含量下降,蛋白质和核酸的含量上升,并在第35天时达到最大值;第35天以后它们的含量都在减少.说明枣树愈伤组织继代培养中,快速增长期在第15～30天,第35天以后生长速度在逐渐减慢.由此确定枣树愈伤组织培养最佳的继代周期为第30～35天.     

雷竹鞭侧芽发育过程中核酸含量,过氧化物酶和淀粉酶同工酶的变化

雷竹鞭侧芽从潜伏芽、饱满芽发育为萌发芽、强萌发芽，核酸含量有规律地显著上升，潜伏芽与饱满芽过氧化物酶的活性和变化有相同的规律，总体活性较强，笋期后活性急剧上升，而和萌发芽、强萌发芽有显著差异；不同类型侧芽，过氧化物酶和淀粉酶同工酶明显不同，存在遗传信息顺序表达的规律，这种表达是内外环境相互作用的结果；从核酸含量、过氧化物酶的活性及其同工酶和淀粉同工酶变化看，从潜伏芽、饱满芽到（强）萌发芽，从萌发芽萌发到笋是两个较为独立的变化过程。     

大豆功能因子连续提取技术

国家大豆深加工研究与推广中心、中国食品工业协会植物蛋白专业委员会中试基地——营口渤海天然食品有限公司完成了利用高、低温豆粕在一条生产线上连续提取大豆功能因子和浓缩蛋白生产     

应用热扩散式探针法对南方红壤丘陵区湿地松人工林耗水量的研究

运用Granier热扩散式探针法对湿地松(Pinus elliottii)树干液流密度进行长期连续测定,并对其周围多个气象要素和土壤要素进行同步测定。湿地松生长旺季不同月份晴天液流密度日变化规律基本一致,但液流启动、到达峰值的时间以及开始升高、开始下降的时间间隔存在差异。样木解析结果表明,处于低龄期的湿地松,整个木质部都可看作边材,边材面积和胸径可用二次函数很好地拟合。方差分析结果表明:不同胸径湿地松树干液流密度不存在显著性差异,与胸径无紧密关系。回归分析结果表明:湿地松日累计液流量与边材面积呈显著的线性相关关系,相关关系的判定系数达0.99。另外,单位边材面积日累计液流量与入选各气象因素的相关性显著,相关程度大小顺序为光合有效辐射>冠层相对湿度>冠层温度。结合边材面积-胸径回归方程和样木胸径调查资料,分别采用2种方法推算整个标准地的耗水量。经比较,2种方法所得结果差别不大,各自适用于一定的范围。     

寄生虫半胱氨酸蛋白酶核酸疫苗的研究进展与应用前景

就寄生虫半胱氨酸蛋白酶的一些生理生化与免疫学性质进行了概括,阐述了该酶与宿主免疫应答之间的作用关系,证明了该酶具有作为研制高效核酸疫苗的条件,同时综述了寄生虫半胱氨酸蛋白酶核酸疫苗的发展以及应用前景。     

兔瘟病毒VP60基因重组真核表达质粒的构建及其免疫原性

采用RT-PCR方法扩增兔病毒性出血症病毒(rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)衣壳蛋白VP60基因,PCR产物纯化后克隆到pMD19-T载体,获得重组质粒pMD19-T-VP60,并进行序列测定。测序正确的pMD19-T-VP60经EcoRⅠ与XhoⅠ双酶切后,将目的片段VP60插入真核表达载体pVAX-1,构建真核表达质粒pVAX1-VP60。将构建好的重组质粒pVAX1-VP60按500μg/只腿部肌肉注射25日龄家兔,同时设pVAX-1组、兔瘟组织灭活苗组和PBS组。分别于免疫后7,14,21,28,35,42 d对各组兔静脉采血,间接ELISA法检测血清中特异性抗体水平,结果显示PBS组和pVAX-1组未检测到特异性抗体,pVAX1-VP60组和兔瘟组织灭活苗组家兔都能产生高水平的特异性抗体,在特异性抗体水平高峰期,2组数据差异不显著(P0.05)。于免疫后3,7,14,21,28,35,42 d随机剖杀pVAX1-VP60组试验兔3只,取心、肝、脾、肺、肾、腿部肌肉,提取组织DNA,进行PCR检测,结果均检测到目的基因VP60的存在。免疫后28 d以滴度10~8的RHDV 0.5 m L/只腿部肌肉注射攻毒,pVAX-1组、PBS组、兔瘟组织灭活苗组、pVAX1-VP60组的相对保护率分别为0%,0%,90%,85%,表明pVAX1-VP60具有良好的免疫效果。     

猪瘟病毒野毒株与疫苗株E2基因双重TaqMan real-time PCR鉴别检测方法的建立

为建立猪瘟病毒(CSFV)野毒株和疫苗株快速定量鉴别检测方法,根据CSFV野毒株和疫苗株E2基因序列差异,设计了2对特异性引物及1条Taq Man探针,以含CSFV HB株和C-株E2基因的重组质粒p BS-E2C和p BS-E2作为标准品,建立了能同时检测CSFV野毒株和疫苗株的双重Taq Man real-time PCR鉴别检测方法。结果表明,建立的CSFV双重Taq Man real-time PCR标准曲线Ct值与1×101~1×106copies/μL之间的E2基因拷贝数呈良好的线性关系,灵敏度达10 copies/μL,且特异性和重复性很好。综上,本试验建立的Taq Man real-time PCR检测方法可用于CSFV野毒株和疫苗株的鉴别诊断及病原定量分析。     

四种核酸染料对用LAMP方法检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的影响

本研究旨在建立一种基于颜色变化的北美洲型猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)RT-LAMP检测方法及结果判定方法,方便LAMP技术的现场检测应用。根据Gen Bank中美洲型PRRSV的保守序列设计一套LAMP引物,对反应进行优化后建立了PRRSV LAMP检测方法。对比Dye63、钙黄绿素(Calcein)、SYBR Green I和Picogreen 4种核酸染料对于LAMP反应的适用性。结果显示,只有Calcein、Dye63适于LAMP反应前加入,但对扩增效率均产生一定抑制,造成反应时间延迟:Calcein的延迟作用更强(约10min),Dye63延迟作用较小(约5min)。加入Dye63的LAMP反应灵敏度为2×101拷贝,而加入Calcein的灵敏度要低10倍。经多功能酶标仪对荧光强度的检测,含Dye63的反应阴阳性差异明显,可用于LAMP反应结果的判定。据此建立的基于新型核酸染料Dye63的PRRSV RT-LAMP检测方法操作简单、方便、直观,可大大减少环境污染造成的假阳性。Dye63有望成为继Calcein之后,可用于LAMP反应前加入,反应后闭管判定的一种新核酸染料,方便LAMP检测技术现场应用。