体细胞核移植技术在猪育种上的应用

基因工程带动了生物工程的迅猛发展,转基因技术在改良家禽品种上得到广泛的应用.本文就体细胞克隆猪的关键技术加以论述.     

山羊转基因技术研究进展

与猪、牛及绵羊相比,转基因山羊的相关研究报道较少。但是,近年来越来越多的研究发现山羊这一物种对于大动物基因工程中生物学及生理学问题的研究具有特殊意义。因此,作者对当前山羊基因组修饰的相关应用及限制的研究进展进行了综述。     

动物克隆的理论与实践

动物机体的大部分分化细胞具备全能性、成熟卵母细胞胞质中mRNA、蛋白质等母型信息能使注入其中的细胞基因发生再程序化，从而启动新个体的发育。供体细胞和受体卵母细胞的周期和功能状态的同步协调是实现重构胚正常发育的关键。克隆动物的成功受供体细胞、受体卵母细胞以及二者之间的相互作用等多个因素的影响，其中的许多规律还未被掌握，动物克隆的研究必将揭示这些生物学规律，显示其巨大的科学意义。     

牦牛异种核移植显微操作针的制备

结合制备用于牦牛异种核移植显微操作针的经验,介绍了制备显微操作用针的具体方法,并对一些在显微操作针制作过程中可能出现的影响因素及其注意事项加以总结。     

体细胞核移植技术在转基因动物研究中的应用

利用基因工程技术将目的基因整合入动物体细胞染色体中，并将其作为供体核移植入受体－－去核卵母细胞构成重建胚，然后将其移植入假孕母体，待其妊娠、分娩，便可得到经定向遗传修饰的转基因克隆动物。本文就这一领域的发展历史、研究现状、应用前景及存在的问题等方面作一概述。     

生物新技术在牛上的突破与应用前景

生物新技术在牛上研究和应用最重要的是胚胎工程技术与基因工程技术，胚胎移植，核移植等技术可母年繁殖率呈数十至百倍乃至几何级数的提高；分子遗传标记在牛上的应用可能实现牛的早期选种。     

不同电融合条件对莎能奶山羊转基因(GFP)核移植胚胎发育的影响

以莎能奶山羊（Saanen dairy goat）转基因（GFP）成纤维细胞为核供体细胞，以普通山羊卵母细胞为受体细胞进行了核移植，试验中对转基因核移植胚胎的电融合条件进行了优化，发现对于莎能奶山羊转基因（GFP）重构胚胎的处理，电融合时方案B（1．5kV／cm、3μs／次、间隔1s）电融合参数最适合用于莎能奶羊的转基因（GFP）核移植胚胎，其重构卵电融合率为89．4％，重构胚分裂率为68．0%。     

猪克隆技术的最新进展

猪克隆的生产技术体系不仅对增加优良猪种的生产有重要意义 ,而且对于不带有抗体的能够进行器官异种移植的动物生产和对离体人类基因功能的分析也有重要的意义。但目前还没有建立和完善这一克隆体系。我们试着将培养的细胞移植到去核的卵母细胞中来生产克隆猪 ,并且已经获得一些克隆胚胎。为了建立一个克隆猪的生产体系 ,人们需要不断完善和提高基本的技术和技能     

细胞松弛素B对水牛体细胞核移植效果的影响

以水牛耳皮成纤维细胞为供体细胞,采用电融合方法,探讨细胞松弛素B(CB)对水牛体细胞核移植效果的影响.体外成熟培养22～24 h的水牛卵母细胞去核后.将经0.1 mg/L Aphidicolin(APD)+0.5%FBS培养2～9 d的水牛耳皮成纤维细胞注射到卵周隙中再经电融合(100 V/mm,15μs,电脉冲3次)构建核移植重构胚.重构胚经化学激活后(5 μmol/L)离子霉素5 min,2 mmol/L 6-DMAP 3 h)培养,7～9 d评定其胚胎发育能力.结果显示,在含CB(3 mg/L)的融合液中进行电融合后,核移植的融合率、重组胚的存活率、卵裂率和囊胚率与对照组(不含CB)相比均无显著差异(P>0.05);核移植重组胚激活前用含CB(6 mg/L)的培养液培养1 h,其激活后的存活率(97.52%)和体外囊胚发育率(22.09%)均显著地高于未经CB处理的重组胚的存活率(93.87%)和囊胚率(13.25%,P<0.05);重组胚经离子霉素激活5 min后,在6-DMAP+CB中培养3 h的分裂率明显低于放在6-DMAP中培养3 h的分裂率(65.37% vs 78.92%,P<0.05),但囊胚发育率无显著差异(11.19% vs 10.96%,P>0.05).这表明水牛体细胞核移植电融合时,融合液中不添加CB,而核移植重组胚激活前经CB培养处理后,有利于胚胎的进一步发育,但激活后用CB培养处理会降低胚胎的发育率.     

不同来源供体细胞及含羞草素对水牛体细胞核移植的影响

本文主要探讨供体细胞类型及含羞草素对水牛体细胞克隆的影响。结果如下:与成纤维细胞相比,卵丘/颗粒细胞可以获得较高的融合率和分裂率,但两者的囊胚率差异不显著;克隆水牛的成纤维细胞能用于核移植,而且对核移植结果没有影响;性别对重构胚的早期发育影响不大;含羞草素处理可以替代血清饥饿处理。