山羊转基因技术研究进展

与猪、牛及绵羊相比,转基因山羊的相关研究报道较少。但是,近年来越来越多的研究发现山羊这一物种对于大动物基因工程中生物学及生理学问题的研究具有特殊意义。因此,作者对当前山羊基因组修饰的相关应用及限制的研究进展进行了综述。     

细胞松弛素B对水牛体细胞核移植效果的影响

以水牛耳皮成纤维细胞为供体细胞,采用电融合方法,探讨细胞松弛素B(CB)对水牛体细胞核移植效果的影响.体外成熟培养22～24 h的水牛卵母细胞去核后.将经0.1 mg/L Aphidicolin(APD)+0.5%FBS培养2～9 d的水牛耳皮成纤维细胞注射到卵周隙中再经电融合(100 V/mm,15μs,电脉冲3次)构建核移植重构胚.重构胚经化学激活后(5 μmol/L)离子霉素5 min,2 mmol/L 6-DMAP 3 h)培养,7～9 d评定其胚胎发育能力.结果显示,在含CB(3 mg/L)的融合液中进行电融合后,核移植的融合率、重组胚的存活率、卵裂率和囊胚率与对照组(不含CB)相比均无显著差异(P>0.05);核移植重组胚激活前用含CB(6 mg/L)的培养液培养1 h,其激活后的存活率(97.52%)和体外囊胚发育率(22.09%)均显著地高于未经CB处理的重组胚的存活率(93.87%)和囊胚率(13.25%,P<0.05);重组胚经离子霉素激活5 min后,在6-DMAP+CB中培养3 h的分裂率明显低于放在6-DMAP中培养3 h的分裂率(65.37% vs 78.92%,P<0.05),但囊胚发育率无显著差异(11.19% vs 10.96%,P>0.05).这表明水牛体细胞核移植电融合时,融合液中不添加CB,而核移植重组胚激活前经CB培养处理后,有利于胚胎的进一步发育,但激活后用CB培养处理会降低胚胎的发育率.     

供核细胞及处理方式对绵羊核移植效率的影响

旨在研究羔羊、胎儿成纤维细胞、绵羊类胚胎干细胞及处理方式对核移植效率的影响。比较了羔羊皮肤成纤维细胞饥饿及消化后平衡时间对细胞可用率的影响;胎儿成纤维细胞饥饿及消化后平衡时间对细胞可用率的影响;羔羊成纤维细胞、胎儿成纤维细胞、类胚胎干细胞在可用率及对融合率的差异和类胚胎干细胞与转基因羔羊皮肤成纤维细胞对核移植效率的影响。结果表明,饥饿对胎儿成纤维细胞可用率影响不大(P>0.05),但平衡时间影响极大(P<0.01);饥饿及平衡时间对胎儿成纤维细胞影响都很显著(P<0.01);胎儿成纤维细胞的可用率极显著高于类胚胎干细胞和羔羊皮肤成纤维细胞(P<0.01),融合率显著高于羔羊(P<0.05),但与类胚胎干细胞间没有差异(P>0.05);胚胎移植后,类胚胎干细胞的怀孕率显著高于羔羊皮肤成纤维细胞(P<0.05)。饥饿和平衡时间对供核细胞的可用率有显著影响,类胚胎干细胞的核移植效果好于成纤维细胞。     

水牛体细胞核移植方法比较及激活前的时间间隔对全细胞胞质内注射法核移植效果的影响

本研究旨在比较水牛2种体细胞核移植(Somatic Cell Nuclear Transfer,SCNT)方法的效果以及激活前的时间间隔对全细胞胞质内注射法(Whole-Cell Intracytoplasmic Microinjection,WCICSI)核移植效果的影响.采用水牛胎儿成纤维细胞作为供核,比较了透明带下注核法(Perivitelline Microinjection,PM)和WCICSI核移植效果.另外,试验了不同类型的供体细胞进行全细胞胞质内注射后与激活前的受体胞质的最适宜作用时间.结果,WCICSI构建核移植重构胚的成功率显著高于PM(87.1%vs 81.1%,P＜0.05),虽然其重构胚的分裂率极显著低于PM(49.5%vs 71.8%,P＜0.01),但囊胚率、核移植的效率无显著差异(P＞0.05).卵丘细胞和胎儿成纤维细胞在注射后3 h激活,重构胚的囊胚发育率最高;颗粒细胞注射后与激活前的最佳时间间隔可在1.5～3 h,但3 h是最佳的作用时间.结果表明,(1)WCICSI可用于水牛体细胞核移植的研究;(2)水牛胞质内注射供体细胞后3 h进行激活,核移植重构胚的发育效果最好.     

成纤维细胞的不同处理对水牛亚种间核移植效果的影响

本文探讨了成纤维细胞的不同处理对水牛亚种间核移植的影响。试验设置3个组:对照组、接触性抑制组及血清饥饿组。结果:对照组在融合率、分裂率上均显著低于血清饥饿组及接触性抑制组(63.0%vs 73.0%、77.0%,43.8%vs 49.9%、50.0%)(P<0.05)。但血清饥饿组和接触性抑制组之间的融合率、分裂率差别不显著(73.0%vs 77.0%,49.9%vs 50.0%)(P>0.05)。这3个处理组之间的囊胚率差异不显著(7.0%,7.6%,9.5%)(P>0.05)。以上表明:对成纤维细胞进行处理可以提高水牛亚种间核移植的效率。     

转基因猪的研究进展

自80年代转基因动物模型建立以来,转基因动物己应用于生命科学的各个领域,尤其在生物反应器、异种器官移植和提高动物生产性能等方面得到了广泛的应用。转基因动物越来越受到人们的重视,由于猪在解剖、组织、生理和营养代谢等方面均与人类最接近,又是一种重要家畜。所以转基因猪的研究越来越受重视。本文综述了转基因猪的常用技术方法,尤其是显微注射法、核移植法等几种主要方法,评价了转基因的研究概况和转基因猪的热点应用领域等。     

江苏：首例徒手克隆猪诞生

一胎8头体细胞克隆小猪近日在南京农业大学诞生,这是江苏省首例利用徒手克隆核移植技术生产的克隆猪。     

兔胚胎干细胞核移植克隆技术

对兔胚胎干细胞核移植过程中受体卵子的去核方法、供核兔胚胎干细胞的预处理及电融合的场强等操作技术进行了比较试验.结果表明,压迫式去核方法的去核有效率达85.71%,略高于注吸式.当电融合场强为1.6或1.8 kV/cm时,重组胚的卵裂率和桑、囊胚率较高,分别达到33.3%和16.67%.在操作液中添加PVA对獭兔干细胞核转入融合与后期囊胚发育均有不同程度的影响,使囊胚发育率显著提高.将11个融合胚及5枚发育囊胚移植到受体兔体内,未发现妊娠现象.     

动物克隆的理论与实践

动物机体的大部分分化细胞具备全能性、成熟卵母细胞胞质中mRNA、蛋白质等母型信息能使注入其中的细胞基因发生再程序化，从而启动新个体的发育。供体细胞和受体卵母细胞的周期和功能状态的同步协调是实现重构胚正常发育的关键。克隆动物的成功受供体细胞、受体卵母细胞以及二者之间的相互作用等多个因素的影响，其中的许多规律还未被掌握，动物克隆的研究必将揭示这些生物学规律，显示其巨大的科学意义。