徒手克隆过程中的技术环节对体细胞克隆效率的影响

随着体细胞核移植技术的发展,如何快速高效的获取克隆后代已然成为科研工作者们关注的重点。本文针对受体母猪受胎率和单胎产仔数较低的问题,以本实验室徒手克隆技术平台为出发点结合多年的实验经验及实验结果,从卵巢采集、徒手克隆过程、受体母猪准备、胚胎移植和受体母猪饲养管理等方面归纳总结克隆猪各个技术环节的要点。系统的介绍了影响猪体细胞核移植效率的因素及改善和优化措施,从而在胚胎移植过程中可稳定、高效的获得克隆小猪。为克隆技术的推广和应用提供技术支持。     

猪胚胎细胞核移植

选用杜洛克２～１６细胞期胚胎卵裂球作核供体，湖北白猪卵母细胞作核受体，通过显微操作和电融合法构成重组胚。体外培养时，以融合前２ｈ，１ｈ激活及融合前不激活的卵母细胞做核受体的重组胚，发育率分别为６４．６％（３１／４８），５５．３％（２６／４７）和３４．５％（１９／５５）。６１枚重组胚移入同步发情的５头受体母猪输卵管，１头于妊娠１１７ｄ产下５头核移植仔猪。结果表明，激活卵母细胞作核受体优于未激活卵母细胞。成熟卵母细胞的胞质对于移入的核具有重排能力     

波尔-黄淮白山羊体细胞核移植重构胚电融合参数的选择

以波尔山羊耳成纤维细胞为核供体细胞,黄淮白山羊卵母细胞为受体进行核移植,对重构卵进行电融合处理,发现电融合参数为250 V·mm-1、1次电脉冲时,40μs组的卵裂率显著高于10 μs组和20μs组(P＜0.05),但10μs组融合后的存活率最高(P＜0.05).当融合参数为250 V·mm-1、10μs时,2次电脉冲组的卵裂率显著高于1次电脉冲组(P＜0.05),但1次电脉冲组的融合后存活率和胚胎获得率均高于2次脉冲组(P＜0.05).综合试验结果认为,适宜的山羊体细胞核移植的电融合参数是250 V·mm-1、10μs、1次电脉冲.     

热应激对牛卵母细胞克隆胚体外发育的影响

为了了解牛卵母细胞经短时间(30 min)热应激和采用不同供体细胞对核移植后重构胚发育的影响,对成熟前牛卵母细胞进行了不同温度(38.5(CK),39.5,40.5,41.5和42.5℃)热应激处理,以牛胎儿成纤维细胞为供体细胞,比较了重构胚的卵裂率和囊胚率;将成熟前牛卵母细胞于41.5℃热应激30 min,以未进行热应激处理的牛卵母细胞为对照,比较了3种不同供体细胞(牛胎儿成纤维细胞、牛卵巢上皮细胞、牛颗粒细胞)核移植后的重构胚囊胚细胞数。结果表明,成熟前牛卵母细胞经41.5℃热应激处理30 min,其卵裂率(72.5%)和囊胚率(18.3%)与对照组(57.6%和13.6%)相比均有显著提高(P<0.05);当温度升高至42.5℃后,虽然卵裂率有所提高,但囊胚率与对照组相比显著降低(P<0.05);其他温度处理的卵裂率和囊胚率与对照无显著差异(P>0.05)。牛卵母细胞经41.5℃热应激处理30 min,3种供体细胞形成的重构胚囊胚细胞数差异不显著(P>0.05),而且与其各自对照的囊胚细胞数差异也不显著(P>0.05)。说明41.5℃可以作为牛卵母细胞热应激处理的最佳温度,成熟前牛卵母细胞经41.5℃热应激处理30 min,能有效提高核移植效率。     

生物技术在植物育种上的新应用

生物技术又称生物工程,是生物科学与技术科学相结合的产物.它是综合利用遗传学、生物化学、微生物学和生化工程理论、基因剪裁重组、细胞融合、核移植技术来改造生物,创造新物种的技术总称.传统生物技术包括发酵工程、细胞工程、酶工程和遗传育种等几大领域.目前,生物技术已发展到以基因工程、克隆技术和生物信息学为核心的现代生物技术时代.     

转基因猪的研究进展

自80年代转基因动物模型建立以来,转基因动物己应用于生命科学的各个领域,尤其在生物反应器、异种器官移植和提高动物生产性能等方面得到了广泛的应用。转基因动物越来越受到人们的重视,由于猪在解剖、组织、生理和营养代谢等方面均与人类最接近,又是一种重要家畜。所以转基因猪的研究越来越受重视。本文综述了转基因猪的常用技术方法,尤其是显微注射法、核移植法等几种主要方法,评价了转基因的研究概况和转基因猪的热点应用领域等。     

哺乳动物核移植技术研究进展及应用的问题和前景

自从核移植产生第一头克隆羊多莉以来,对其应用一直存在争议。尽管核移植技术存在各方面的问题和不足,如技术方面的不成熟以及该技术对生物物种质量和生存能力的影响。但核移植技术正在不断被人们接受,并已用于治疗性克隆和动物实验研究。随着人们观念的改变和技术的不断完善,核移植技术的应用范围将不断扩大,具有广阔的应用前景。     

ES细胞克隆动物技术研究进展

ＥＳ细胞克隆动物在提高良种动物繁殖率和保护动物遗传资源领域具有重要的作用,ＥＳ细胞核移植是生产克隆动物的重要方法,ＥＳ细胞克隆率低和克隆动物生活力低是其存在的主要问题。     

卵母细胞冷冻保存研究进展

1977年Whittingham首次成功报道冷冻一解冻小鼠MⅡ期卵母细胞产仔,自此许多学者对多种动物及人卵母细胞冷冻保存进行了研究。目前小鼠、家兔、牛、马、山羊、绵羊及猪等动物卵母细胞的冷冻保存均有报道,而世界上已经有100多个冷冻卵母细胞的婴儿出生。卵母细胞的冷冻保存可为体外受精、核移植、转基因动物的研制提供更方便的材料来源;[第一段]     

日本克隆牛技术的研究进展

本文通过考察日本从事新生殖生物技术的研究单位，并参阅有关试验研究的资料，着重介绍了日本近几年来克隆牛技术的研究现状与发展趋势，并对胚胎细胞和体细胞的克隆牛技术、存在问题和今后研究的方面等作了阐述。