蜡梅花cDNA文库构建及其高频出现脂转移蛋白cDNA的表达

【目的】构建蜡梅花cDNA文库，分析蜡梅脂转移蛋白基因的表达，为探索蜡梅冬季开花分子机理，分离克隆特色基因奠定基础。【方法】以蜡梅花器官为材料，用SMART cDNA Library Construction Kit 构建文库，RT-PCR分析基因表达。【结果】经测定原始文库滴度达到1.4×106 pfu/ml，扩增总文库滴度约为1010pfu/ml，重组率达到96%，插入片段在0.5 kb 以上，平均约1.1 kb，通过PCR 检测，从总文库中检测到了表达丰度不同的蜡梅PI、AP3和LTP基因的特异片段，说明所构建的文库覆盖度高、代表性强，LTP基因具有内含子，而总文库中扩增出的LTP基因不含内含子，说明所构建的cDNA文库无基因组DNA污染， LTP基因在蜡梅开花各个时期均表现较高的转录水平，与EST分析时高频率出现LTP序列的情况相符，证实所构建的文库能够反映蜡梅开花过程基因表达的基本情况。【结论】已获得高质量的蜡梅花cDNA文库，可以用于进一步的基因克隆或EST测序分析，这是首次正式报道蜡梅cDNA文库的构建。LTP基因在蜡梅开花过程中可能具有重要的生物学功能，为探索蜡梅冬季开花分子机理提供了线索。     

蜡梅花瓣基因组DNA提取及RAPD-PCR反应体系优化

以蜡梅花瓣为试材,用改良CTAB法提取基因组DNA,并设置不同浓度梯度对每个PCR反应因子进行相应试验,结果表明,改良CTAB法提取蜡梅花瓣基因组纯度高、质量好。并采用正交试验设计的方法,对蜡梅RAPD-PCR条件进行了优化,结果表明,最佳的蜡梅RAPD-PCR反应体系(20μL)为:1×buffer,1.0 U TaqDNA聚合酶,2.0 mmol/L MgCl2,0.15 mmol/L dNTPs,0.5μmol/L引物和模板DNA 30～40 ng;适宜的扩增条件为:94℃预变性3 min;94℃变性30 s,38℃退火30 s,72℃延伸90 s,38个循环;72℃延伸7 min,4℃保存。     

柳叶哈克木生物学特性与育苗技术

柳叶哈克木生物学特性与育苗技术廖美兰（广西林业科学研究院南宁５３０００１）绿化新秀──柳叶哈克木（Ｈａｋｅａｓａｌｉｃｉ－ｆｏｌｉａ）花期长，一年开花两次，花色艳红，花序密集成稠密的穗状，形状奇特，酷似洗濯玻璃瓶的毛刷子，嫩叶浅紫红色，枝垂如柳，集观...     

湖北神农架地区阳日镇野生蜡梅资源的调查

通过对湖北省神农架地区阳日镇野生蜡梅资源的3次实地调查,在对蜡梅在神农架地区的自然状况进行简要评述的基础上,观察分析了神农架地区阳日镇蜡梅(Chimonanthus prae-cox)野生资源的形态特征、群落学特点、生长发育习性和生物学特性、分布式样和开发利用状况.并提出要加强当地蜡梅的就地保存工作,以确保资源的永续利用.     

花卉门诊

1.今年夏天出于好奇采了些蜡梅种子种下,没想居然发芽了,现已长出六片真叶,不知能否安全越冬？     

北京地区地栽蜡梅修剪技术

蜡梅是一种极具观赏价值的冬令香花植物,其生命力顽强且于冬季开放,在园林应用中越来越受重视。园林养护是精品景观可持续性发展的保障,而修剪是蜡梅精细化养护中的关键技术,探讨蜡梅修剪技术,对充分开发和应用蜡梅景观资源具有十分重要的意义。通过对玉渊潭公园蜡梅为期8年的修剪实践总结和对资料文献的综合分析,阐明了蜡梅的生态习性和花期,分析了花芽分化特点和成花特性,总结了蜡梅修剪技术措施,以为北京地区蜡梅栽培、养护提供参考。     

不同保存方法对蜡梅总DNA提取效果的影响及ISSR-PCR验证

本文以蜡梅新鲜成熟叶片为对照,比较了真空冷冻干燥、硅胶干燥、压标本干燥、45℃烘干、75℃烘干5种叶片干燥方法和4℃保鲜、-20℃冻存、-70℃冻存法对蜡梅总DNA提取效果的影响.结果表明硅胶干燥的样品提取的DNA完整无降解,纯度高,DNA得率为鲜叶的1/3多,压标本干燥的样品可以提到完整的DNA,DNA得率与硅胶干燥的样品相近,提取的DNA含多酚,纯度低.真空冷冻干燥样品的DNA在冷冻干燥过程中小部分受到损伤,DNA得率较鲜叶稍有下降.45℃烘干的样品可以提取到完整的DNA,纯度高,DNA得率约为鲜叶的1/2,75℃烘干的样品的DNA全部降解.ISSR扩增结果表明75℃烘干的样品提取的DNA没有获得扩增产物,其他4种干燥方法提取的DNA的扩增结果与鲜叶相同.鲜叶可在4℃冰箱保鲜存放6 d,在-20℃冰箱中冷藏半月,可在-70℃超低温冰箱中长期放置而不影响总DNA的提取质量和ISSR扩增结果.     

蜡梅ISSR反应体系的优化

通过不同浓度Mg2 、dNTP、模板DNA、引物的组合试验、及不同浓度引物、Taq DNA聚合酶的单因素试验,筛选蜡梅最佳ISSR反应体系为:每20μL中含1×PCR buffer、2.5 mmol·L-1 MgCl2、0.2 mmol·L-1 dNTP、0.3μmol·L-1引物、30ng模板DNA、1U TaqDNA聚合酶;同时通过梯度PCR试验确定了不同引物的适宜退火温度.     

柳叶蜡梅真菌病害分离鉴定及生物学特性

[目的] 为明确柳叶蜡梅(Chimonanthus Salicifolius)的叶部病害的病原种类,进行病叶病原分离鉴定并研究病原菌株生物学特性. [方法] 对福建省寿宁县福瑞泰生物技术有限责任公司种植基地的柳叶腊梅叶斑病病叶采用离体组织分离法进行分离,对分离的病原菌采用形态学结合分子方法(rDNA-ITS和TUB序列...     

蜡梅品种分类研究

在对栽培蜡梅品种系统调查的基础上,对蜡梅品种资源进行了初步分类研究。在前人研究的基础上,结合实地调查的结果,分析了蜡梅品种的主要形态特征和分类依据。遵循《国际栽培植物命名法规》与品种演化规律,同时考虑到实际应用,确定蜡梅品种分类的依据,制定蜡梅品种分类的三级标准。按照花色将蜡梅品种分为3个品种群:蜡梅品种群、白花蜡梅品种群和绿花蜡梅品种群。认为花色、内被片颜色、花型、花径大小及花期是蜡梅品种分类的主要依据,而叶片特征、果实形状、株型及枝条特征仅作为辅助依据。同时提出,进行蜡梅品种识别应抓住典型的、较为稳定的性状以及某些品种特有的个性,而非典型、不稳定的性状不应该作为品种区分的依据。