香蕉枯萎病菌myosin-1基因的功能分析及外施dsRNA介导的抗性评估

 香蕉枯萎病是由尖孢镰刀菌古巴专化型(Fusarium oxysporum f. sp. cubense,Foc)引起的香蕉毁灭性土传病害,其中 4号生理小种(Foc4)能感染几乎所有的香蕉品系,危害最严重。SMART在线软件分析myosin-1基因具有肌球蛋白马达蛋白(myosin motor domain, MMD),肌动蛋白尾结构TH1(myosin tail)和 Src家族同源结构域SH3(src homology domain 3),与禾谷镰刀菌中氰烯菌酯靶标基因myosin-5具高度的蛋白同源性,相似性高达83%。利用Split-marker基因重组技术获得Foc4的myosin-1基因敲除突变体,Δmyosin-1突变株丧失了对氰烯菌酯的敏感性,菌丝生长缓慢,产孢量减少且孢子畸形,对香蕉致病力严重下降,证实myosin-1是氰烯菌酯在Foc4中的作用靶标基因。外施靶向myosin-1体外转录的dsRNA,能抑制菌丝的生长,降低菌丝活性;菌丝膨胀扭曲分枝增多,出现典型的球状结构,与氰烯菌酯处理后的表型一致。在盆栽活体人工接种实验中,体外施用dsRNA可以明显抑制枯萎病外部症状的发展,推迟发病时间,赋予寄主抗性,结果说明体外施用dsRNA可以作为新型杀菌剂防治香蕉枯萎病。综上,myosin-1基因作为氰烯菌酯在Foc4中的靶标基因具有高度的序列保守,在调控菌丝生长发育,产孢以及致病力等方面发挥重要作用,而外施dsRNA具有防治香蕉枯萎菌的巨大潜力。     

玉米灰斑病菌生理分化的鉴别寄主体系

玉米灰斑病现已成为北方玉米产区的主要病害之一，但国内外关于玉米灰斑病菌Cercospora zeaemaydis Tehon ＆ Daniels致病力分化等方面的研究较少，尚未建立该病菌生理分化的鉴别寄主系统，无法明确我国是否存在玉米灰斑病菌致病性分化类群或生理小种及优势菌群和分布，限制了有针对性地进行品种合理布局和抗病育种工作，因此研究玉米灰斑病菌致病性分化鉴别寄主体系是一项重要的基础性工作。作者采用田间成株期鉴定技术，对不同的玉米灰斑病菌菌株进行致病力划分，研究其鉴别寄主体系。     

柑橘黄龙病菌浓度对琼中绿橙果实品质的影响

为了定量衡量黄龙病菌量对琼中绿橙果实品质的影响,本实验以采自海南琼中橘园中感染了柑橘黄龙病的琼中绿橙为实验材料,用实时荧光定量PCR相对定量的方法测定果实中柑橘黄龙病菌的浓度,同时对果实品质的8个外在指标（果实纵经、横径、果形指数、单果重、果皮率、残渣率、种子数量、种子重量）和5个内在指标（果汁率、可食率、可溶性固形物含量、可滴定酸含量、固酸比）进行测定,研究黄龙病菌浓度对琼中绿橙果实品质的影响。结果表明：随着琼中绿橙果实中柑橘黄龙病菌浓度的增大,果实外观品质变化明显的指标包括果实纵经、果形指数、单果重（p<0.05）,其中果实纵经呈现明显下降趋势,从64.97mm下降到57.44mm,相对较少11.59%;果形指数呈现明显上升趋势,从0.83上升到0.94,相对增多13.25%;单果重呈现下降趋势,从166.35g下降到109.66g,相对较少34.08%;果实横径、果皮率、残渣率、种子数量、种子重量等指标变化不明显。随着琼中绿橙果实中柑橘黄龙病菌浓度的增大,果实内在品质变化明显的指标为可溶性固形物含量,可溶性固形物含量呈现明显下降趋势（P<0.05）,从9.65%下降到8.19%,相对减少15.13%;果汁率、可食率、可滴定酸含量和TSS/TA没有明显变化。结论：在黄龙病菌浓度增加的情况下,琼中绿橙在果实外观、内在品质等多个指标呈现下降趋势。研究结果为定量评价黄龙病对柑橘果实的影响提供参考。     

大白菜软腐病菌游动性突变体在大白菜体内增殖扩展研究

 用培养皿滤纸吸附测定法和不伤根土壤拌菌处理及针刺接种法,测定了大白菜软腐病菌游动性突变体进入大白菜体内、并在其中侵染定殖和扩展的特性。结果表明,游动性丧失和增强的突变体都可以通过种子萌发和主动接触进入大白菜体内、并可以在体内有短期的繁殖,但菌量远低于野生菌。大白菜叶片接种实验说明,这两种突变体也都可以进行短距离扩展,但扩展距离和菌的繁殖量低于野生菌。     

柑橘黄龙病实时荧光PCR鉴定技术研究

[目的]建立一套高效、准确的柑橘黄龙病（HLB）早期鉴定手段。[方法]根据HLBsecE基因（EF164805.1）保守区域设计引物和探针,建立HLB的TaqMan探针实时荧光PCR鉴定技术。[结果]被检测的236个柑橘苗圃样品中,有54个苗圃感染了HLB,检出率为22.9%。引物特异性好。[结论]该检测方法具有快速、灵敏、重复性好等优点,其检测灵敏度达0.01 ng。     

重庆江津区柑橘地土壤大孔隙特征

以重庆市江津区不同柑橘地为研究对象,采用土壤坡面染色法标记大孔隙、利用土壤水分穿透曲线方法及Poiseulle方程分析其土壤大孔隙特征。结果表明:染色区较非染色区有更大的稳定出流速率,大孔隙使染色区的水分渗透速率较非染色区提高了1.48倍以上,随着土层深度增加,其提高程度有增大的趋势。虽然染色区较非染色区更利于水分或溶液传导,但相比非染色区,染色区水分渗透曲线的波动更大。柑橘地大孔隙孔径范围在0.3～1.7mm之间,0.3～0.7mm孔径数量虽然为104数量级,但对染色溶液优先迁移的作用较弱;实际影响染色溶液迁移的为半径大于0.7mm的土壤大孔隙;20年林龄柑橘地10-20cm土层有效大孔隙数量高于10年林龄柑橘地。半径大于1.0mm的大孔隙在水分输入初期起到迅速排导水分的作用。柑橘地土壤大孔隙率在1.5%～19.5%之间,与稳定出流速率呈极显著正相关关系,决定了稳定出流速率71.9%的变异;半径大于0.7mm的大孔隙数量与稳定出流速率呈极显著正相关关系,决定了稳定出流速率90.9%的变异。     

A8菌对香蕉枯萎病菌的室内抑制效果研究

通过测定A8菌对香蕉枯萎病菌孢子萌发和菌落生长的影响,以及测定香蕉枯萎病菌在不同碳源培养液中菌丝生长。结果表明:药剂对香蕉枯萎病菌孢子萌发和菌落生长有一定的影响。在同一碳源培养条件下,处理菌和对照菌的菌丝干重并没有显著性差异。     

香蕉枯萎病生防菌对杀虫剂的适应性研究

将3株香蕉枯萎病生防菌bio-B、bio-d4和bio-d5分别与杀虫剂福气多、乐斯本、绿色金通混合,测定其混合液对香蕉枯萎病菌孢子萌发的抑制作用以及杀虫剂对生防菌生长繁殖的影响。结果显示,乐斯本和绿色金通对生防菌Bio-B的抑菌作用没有影响,而福气多减弱bio-B的抑菌作用;福气多、乐斯本和绿色金通对bio-d4的抑菌作用没有影响;乐斯本和绿色金通对生防菌Bio-d5的抑菌作用没有影响,而福气多减弱bio-d5的抑菌作用;杀虫剂绿色金通对生防菌bio-B的生长影响最大,bio-B与绿色金通混合在平板上形成的菌落明显小于对照;杀虫剂福气多对生防菌bio-d5的生长影响最小,bio-d5与福气多混合在平板上形成的菌落明显大于对照。     

柑橘渣对玉米、水稻生长和土壤肥力

通过盆栽试验研究施用柑橘渣对玉米、水稻生长和土壤肥力性状的影响。结果表明,施用不同用量柑橘渣增加水稻株高,降低玉米株高（施柑橘干渣5g/kg土的Oc5处理除外）。Oc5处理对玉米的生物量有明显的提高作用,而Oc20处理（施柑橘干渣20g/kg土）对提高水稻生物量的作用最大。柑橘渣促进玉米吸收钾素,抑制氮素和磷素的吸收。Oc20处理对水稻的全氮、全磷、全钾吸收有很好的促进作用。施用柑橘渣对土壤pH值影响不大,土壤有机质含量随柑橘渣施用量的增加而提高,其中玉米土壤有机质提高18．6％-69．7％,水稻土壤有机质提高0．5％-7．1％,旱地（玉米）土壤碱解氮、有效磷、有效钾和淹水（水稻）土壤碱解氮含量也有随着柑橘渣施用量的增加而增大的趋势。