拟南芥Ran2小GTP结合蛋白抗血清的制备及其FITC荧光标记

将原核表达、纯化的Ran2蛋白对新西兰兔进行免疫制备抗血清,ELISA测定其效价为1∶51 200。免疫印迹分析表明,原核表达、纯化的Ran2和拟南芥可溶性蛋白杂交带均在26 ku处。FITC荧光标记抗体检测Ran2绿色杂交带主要出现在细胞分裂间期的核膜上。     

赤霉病菌特异抗体-防御素融合蛋白的表达和功能鉴定

选择对赤霉病菌具有高度特异性和亲合力的单链抗体,与植物防御素构建成融合蛋白基因,将融合蛋白及防御素基因分别与细菌表达载体pGEX和植物表达载体pMBL4构建成重组载体,在细菌中经IPTG诱导表达GST融合蛋白,亲和层析纯化蛋白;经根癌农杆菌介导的真空渗入法在烟草叶片中瞬间表达,提取叶片总蛋白用于鉴定。抑菌活性分析表明,烟草叶片瞬间表达的防御素和抗体-防御素融合蛋白,均对赤霉病菌有强烈的抑菌作用;从细菌中纯化的防御素蛋白,也能有效抑制赤霉病菌生长。说明赤霉病菌抗体-防御素融合蛋白基因,可作为抗赤霉病资源,用于改良植物的抗赤霉病性。     

鸡毒霉形体黏附素截短蛋白表达条件的优化

研究了培养温度、培养时间、培养基pH值以及异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropylthio-β-D-galacto-side,IPTG)浓度等不同条件对鸡毒霉形体黏附素截短蛋白在大肠杆菌中表达量的影响。经SDS-PAGE分析表明:诱导温度为28℃、诱导时间为9 h、培养基pH值为7.0、IPTG浓度为0.010 mmol/L时目的蛋白在细菌裂解沉淀和上清液中均最大量表达,分别达到30%和17%左右。上清液经GST.Bind Resin亲和层析分离纯化后,洗脱产物中pMGAⅣ融合蛋白纯度高达95%。Western-blot分析表明,该蛋白可被鸡毒霉形体阳性血清识别,具有较好的免疫学活性。     

大米蛋白酶水解条件及水解度对合成类蛋白的影响

观察了胰蛋白酶、碱性蛋白酶和胃蛋白酶水解米渣蛋白的条件及其水解度对合成类蛋白反应的影响。结果表明:胰蛋白酶、碱性蛋白酶和胃蛋白酶水解大米蛋白的最适温度分别为50℃、60℃和60℃,最适起始pH值分别为10.0、11.0和1.0,底物浓度分别为7%、5%和5%,E/S为1%、3%和7%,水解时间为4 h;该条件下,3种酶水解大米蛋白的水解度分别为54.0%、71.4%和57.3%,氮收率分别为56.3%、73.8%和58.1%;随着水解时间的延长,胰蛋白酶和胃蛋白酶水解产物中肽类组分变化小,而碱性蛋白酶水解产物中小分子的组分显著增加;大米蛋白水解产物的水解度对类蛋白反应的产率有显著影响,以胃蛋白酶为类蛋白合成酶时,大米蛋白的胰蛋白酶、碱性蛋白酶和胃蛋白酶水解产物的水解度分别在54.0%、71.4%和69.1%时,合成类蛋白的产率最高,分别为2.6%、17.5%和15.2%。     

鱼类弹状病毒分子生物学研究动态

鱼类弹状病毒(Fish rhabdovirus)是一类引起鱼及其他水生动物致死性和流行性病害的重要病毒病原。对鱼类弹状病毒基因组的结构和功能研究,是深入探讨这类病毒感染和致病机理、研制病毒疫苗及诊断试剂的理论基础。本文就鱼类弹状病毒的基因组结构,包括N基因、P基因、M基因、G基因、NV基因、L基因及编码的相应蛋白、3′前导区和5′拖尾区、基因连接区等的组成及功能的研究进展作一综述,旨为抗病毒疫苗的研制及建立准确高效的检测方法提供借鉴。     

介绍鱼类组织中蛋白质及同功酶的电泳方法

<正> 近年来用醋酸纤维薄膜、琼脂糖、淀粉凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等作为支持物的电泳分离技术,对生物的各种组织蛋白及同功酶的研究已广泛应用。目前利用蛋白电泳和同功酶谱的变化来鉴定鱼类、了解种的地理分布、生理情况以及遗传育种、生物进化等方面已成为一种有效的实验生化技术。几年来,我们摸索了一些方法,通过实验在某些方面作了改进,效果较为满意,现将方法和经验分别作介绍,供参考。     

两种盐度下凡纳滨对虾饲料中的最适动植物蛋白比

试验研究了不同盐度下（3和22）,以鱼粉和大豆浓缩蛋白为蛋白源,配制6种不同动植物蛋白比的饲料对凡纳滨对虾生长、成活和肝胰腺可溶性蛋白质含量的影响,饲养试验为期40 d。结果显示：（1）饲料动植物蛋白比可显著影响凡纳滨对虾增重率、成活率、肝体指数、肥满度和肝胰腺中可溶性蛋白质含量。增重率随饲料动植物蛋白比升高而升高,但当饲料中动植物蛋白比升至29∶8时,增重率不再明显升高,其它指标均先随饲料动植物蛋白比升高至一定程度,而后则稍有下降;（2）盐度22组对虾的增重率、成活率和肥满度显著高于盐度3组对虾,肝体指数却显著低于盐度3组,不同的盐度对凡纳滨对虾肝胰腺可溶性蛋白含量的影响不显著;（3）双因素方差分析结果显示,盐度和饲料动植物蛋白比对凡纳滨对虾增重率、成活率和肝体指数存在显著交互作用,最大值分别出现在盐度22下全动物蛋白饲料组、盐度22下全动物蛋白和动植物蛋白为29∶8的饲料组、盐度3下饲料动植物蛋白比为14∶23的饲料组中;（4）Broken-Line分析表明,3‰盐度下凡纳滨对虾最适饲料蛋白比为29.12∶7.79~30.29∶6.71,盐度22时为26.05∶10.95~29.03∶7.44。结果提示,饲料中氨基酸的组成和含量会随配方中动植物蛋白配比而改变,且不同盐度下凡纳滨对虾对饲料中动植物蛋白比的要求有所不同,但配饵中适当的动植物蛋白比可以满足虾对各种氨基酸的适宜需求。因此,在养殖过程中,需结合实际的养殖环境和饲料蛋白源种类,来设计适宜的实用饲料配方,这样才能达到降低生产成本,提高经济效益的目的。     

响应面法同步优化褶牡蛎中蛋白和多糖提取工艺

于单因素试验基础上,以牡蛎蛋白和多糖提取率(Y1和Y2)为响应值,利用响应面法对牡蛎中蛋白和多糖提取工艺进行同步优化.试验结果表明,液料比(X1)、提取时间(X2)、提取温度(X3)及pH值(X4)4个因素对Y1和Y2均有显著影响.由响应面三维及等高线叠加图得到牡蛎蛋白和多糖提取率均高的最佳提取工艺参数:液料比33∶1,提取时间2.6h,提取温度40℃,pH值4.2.在此条件下,验证试验得到牡蛎蛋白提取率为21.15％,牡蛎多糖提取率为12.07％,与数学模型预测值非常接近.可见,响应面同步优化法对牡蛎蛋白和多糖提取条件进行同步优化合理可行.     

叶蛋白提取与应用的研究进展

叶蛋白是从绿色植物的茎叶中提取得到的一种功能性蛋白质,其粗蛋白质含量一般可达30%～60%。随着经济与科技的发展,人类营养和动物营养逐渐得到调整完善。叶蛋白作为蛋白质的良好来源,在人类蛋白质营养补充和蛋白源饲料开发中具很大的发展前景。本文根据国内外相关研究资料,概述了叶蛋白的营养价值,对目前叶蛋白常用的提取技术进行了综述和讨论,并展望了叶蛋白的应用前景,以期为未来新型叶蛋白产品开发奠定理论基础。     

猪流行性腹泻病毒S1蛋白的免疫原性评估

为了评估猪流行性腹泻病毒(PEDV)S1蛋白的免疫原性,利用果蝇胚胎S2细胞表达重组S1蛋白,将纯化的S1蛋白免疫4周龄昆明小鼠,收集免疫血清及脾淋巴细胞,通过ELISA、病毒中和试验和流式细胞术等方法分析表达的重组S1蛋白的免疫原性。结果显示,与对照组(PBS)相比,重组PEDV S1蛋白免疫组小鼠血清中特异性IgG抗体水平显著提升;二免后14 d,果蝇细胞重组PEDV S1蛋白免疫组小鼠的中和抗体效价达到1∶320;免疫后小鼠脾脏淋巴细胞具有更强的增殖能力;外周血CD3⁺T细胞百分比显著增加,CD4⁺/CD8⁺T细胞比值高于对照组;小鼠血清中IL-4、IFN-γ水平显著上升。综上,成功表达了重组PEDV S1蛋白,其可以诱导小鼠产生高效价的中和抗体,促进细胞免疫应答。