杜梨砧木苗二次移植培育嫁接苗技术探讨

采用大密度播种育苗,然后进行二次移植,当年可嫁接苗达到89.2%(而常规育苗只有67.4%,提高21.8%),剩余砧木苗通过二次嫁接后,砧木苗只剩4.1%,可实现当年育苗,第2年基本全部出圃,而且苗木质量明显好于常规育苗。实践证明,采用归垄育苗可达到当年定植,及时嫁接,当年出圃,提高了苗木出圃数量。     

杜梨PbNHX1基因的克隆、表达分析及功能验证

【目的】克隆1个杜梨Na~+/H~+逆向转运蛋白基因PbNHX1,并对其序列特征、表达特点及功能进行研究。【方法】采用RT-PCR和PCR克隆PbNHX1的c DNA和DNA序列,利用生物信息学方法进行序列分析,定量PCR检测其在非生物胁迫下转录水平变化,酵母互补试验检测PbNHX1基因的离子转运能力。【结果】杜梨PbNHX1基因c DNA编码区长1 704 bp,对应基因组DNA序列长3 594 bp,由13个外显子和12个内含子组成,编码蛋白含567个氨基酸。系统进化树显示,PbNHX1位于液泡膜型Na~+/H~+逆向转运蛋白分支上,与杨树液泡膜型Na~+/H~+逆向转运蛋白Pt NHX1.3基因亲缘关系较近。正常生长条件下,PbNHX1在杜梨叶片中表达量高于根。施加200 mmol·L-1Na Cl、10%(φ)PEG6000或100μmol·L-1ABA后,PbNHX1在叶片中的转录水平持续上升;其在根中的表达量先升后降,表达高峰依次出现在处理后6、3和6 h。PbNHX1的转入可恢复Na Cl、KCl和潮霉素B对nhx1缺失酵母菌株AXT3的生长抑制,转基因酵母细胞中Na~+和K~+含量显著增加。【结论】PbNHX1具有植物NHXs基因家族的固有特征,对盐碱、渗透胁迫和ABA处理均存在转录响应,转入该基因能够提高酵母nhx1缺失突变体AXT3对盐胁迫的耐受能力,部分恢复其对阳离子的转运功能,从而促进Na~+、K~+积累。     

杜梨根癌病原菌质粒类型鉴定及枯草芽孢杆菌对其抑制研究

以杜梨根瘤为试材,采用分子生物学方法、牛津杯法和指示植物接种法,研究了杜梨根癌病原菌的质粒类型及枯草芽孢杆菌对杜梨根癌病原菌的影响。结果表明:从1年生杜梨根部冠瘿瘤上分离、纯化、培养菌株,得到4株与根癌病原菌相似菌株,对之进行PCR扩增,此4株菌株均获得特异性目的条带,鉴定为根癌土壤杆菌胭脂碱类型。将病原菌接种指示植物向日葵幼苗,4株菌株均有致病性。经室内离体试验,供试的9株枯草芽孢杆菌对病原菌表现不同程度的抑菌效果;接种指示植物试验中,菌株9076和9161过滤发酵液能够完全抑制冠瘿瘤的生长。     

杜梨根系铁吸收关键基因生物信息学分析及缺铁胁迫对其表达的影响

为了探究缺铁胁迫对杜梨根系铁吸收关键基因表达的影响,对杜梨根系铁吸收关键基因三价铁还原酶(Pb FRO2)基因和铁转运蛋白(Pb IRT1)基因的氨基酸序列进行了多重序列比对和进化树分析;采用改良的Hoagland营养液水培杜梨的方法,研究了缺铁胁迫对杜梨根系Pb FRO2和Pb IRT1基因相对表达量以及根系铁和锌含量的影响。结果表明,Pb FRO2蛋白具有还原酶特性,Pb IRT1蛋白属于二价金属离子转运蛋白家族—ZIP家族;缺铁胁迫9 d内,杜梨根系Pb FRO2和Pb IRT1的表达量整体上呈现出先升高后降低的趋势,胁迫3 d表达量达到最高点且与对照(加FeEDTA)差异显著;缺铁胁迫30 d,杜梨根系中铁含量比对照降低77.46%,而锌含量提高1 139.40%。综上可知,缺铁胁迫可诱导杜梨根系铁吸收关键基因表达量升高,进而促进二价金属离子转运蛋白的活性提高。     

异质盐胁迫对杜梨幼苗生长及光合特性的影响

盐渍土壤中盐分的空间分布是非均匀的,具有空间异质性。为探明异质盐胁迫对杜梨生长的影响,本试验利用自制沙培分根容器,对其幼苗进行异质盐胁迫处理,研究不同盐胁迫条件下杜梨幼苗的生长特征、光合特性、叶片氮含量及叶面温度等指标的变化。结果表明：不同盐胁迫处理对杜梨植株生长影响明显,异质盐胁迫0/100处理下幼苗株高、生物量、根冠比均显著高于均匀盐胁迫和异质盐胁迫0/200处理。随着盐胁迫时间的延长,均匀盐胁迫100/100和200/200处理下植株分别在41 d和26 d后萎蔫死亡。盐胁迫降低叶片的SPAD值和光合参数;异质盐胁迫处理下叶片SPAD值、叶绿素荧光参数(Fv/Fm)、净光合速率(Pn)、气孔导度(Gs)、胞间CO₂浓度(Ci)和蒸腾速率(Tr)均高于同浓度均匀盐胁迫处理,且不同时间段内异质盐胁迫叶片的Fv/Fm、Pn、Gs和Tr与均匀盐胁迫均差异显著。异质盐胁迫处理下叶片氮含量均随胁迫时间延长表现出先升高后降低趋势,而均匀盐胁迫则呈下降趋势。异质和均匀盐胁迫下,同一时间内植株的叶面温度略高于无盐胁迫,各处理间无显著差异,并随胁迫时间的延长呈现“低-高-低”的...     

九种野生植物走俏市场

山川野林中的野生山蘑不下十几种,如松蘑、肉蘑、白蘑、香蘑、木耳等,因其营养丰富,肉厚色好,口味独特,成为国内外市场上的抢手货,其中野生香菇售价每kg达100元以上。     

应用正交设计对组培杜梨快速繁殖的研究

以杜梨试管苗为材料,应用正交试验法研究不同植物激素及其配比对试管苗生长与增殖生长的影响.结果表明:适合杜梨试管苗生长阶段的培养基为MS培养基+6-BA 2.0mg/L+IBA 0.1 mg/L+GA3 0.1 mg/L;适合杜梨增殖生长的培养基为MS培养基+6-BA 1.0mg/L+IBA 0.6mg/L+GA3 0.6mg/L.     

外源生长素对杜梨组培不定芽生根及相关氧化酶的影响

【目的】为了解生长素诱导杜梨不定根发生效应,明确不定根诱导过程与氧化酶活性间的关系,从而为杜梨等难生根植物的生根研究提供理论指导和技术借鉴。【方法】以连续继代培养的杜梨不定芽为材料,调查了不同种类(NAA、IBA和IAA)和浓度(0.1、0.5、1.0、2.0 mg·L^-1)的生长素对不定芽生根的影响情况,分别在生根诱导0、4、8、12、16 d后观察不定根发育的内外组织形态,测定并分析相关酶活性的变化情况。【结果】外源生长素均能促进不定芽不定根的发生,在相同种类的生长素处理下,浓度分别为0.1和2.0 mg·L^-1处理的各项生根指标均显著低于浓度分别为0.5和1.0 mg·L^-1处理的。以NAA诱导产生的愈伤组织较大且松软易脱落,不利于其后期的移栽成活;以IBA处理的生根率显著高于NAA和IAA处理的,其中以浓度为0.5 mg·L^-1的IBA处理的各项生根指标均最优。对其组织形态的观察结果表明,杜梨不定根发生类型属于诱生根原基,经IBA处理4 d后,其茎基部表皮颜色变红,内部根原基发生于韧皮部和维管束形成层交界处,诱导8 d后茎段外部出现了愈伤组织且组织内部根原基已形成,诱导12 d后不定根突破表皮向外生长。在杜梨不定芽生根过程中,SOD和PPO活性在诱导的0~4 d内均快速上升,在诱导的4~12 d内均下降,而在诱导的12~16 d内均呈现缓慢上升的变化趋势;IAAO活性总体呈现先下降后上升的趋势,且每个时期的活性均显著高于对照组;POD活性呈现出上升→下降→上升→下降的变化趋势,2个峰值分别出现在诱导4 和12 d之时。【结论】0.5 mg·L^-1的IBA可有效促进连续继代培养的杜梨不定芽的生根,其不定根的形成过程与氧化酶有密切的关系。     

杜梨PbGID1家族基因克隆、CRISPR/Cas9载体构建及遗传转化

为明确杜梨赤霉素受体(GID1)的生物学功能,以杜梨为试材,通过同源克隆方法得到PbGID1s基因,利用生物信息学分析软件构建基因结构并设计靶位点;利用酶切-连接方法将带有靶点的sgRNA表达盒构建至CRISPR/Cas9表达载体上;通过农杆菌介导方法,将CRISPR/Cas9表达载体转化至杜梨子叶中。结果表明,在杜梨基因组中克隆得到4个PbGID1s,分别命名为PbGID1b-1、PbGID1b-2、PbGID1c-1、PbGID1c-2,基因结构分析显示该家族基因均由2个外显子和1个内含子组成;氨基酸序列比对发现,PbGID1s均具有GID1家族所特有的HGG和GXSXG保守结构域;将含有5个靶位点的sgRNA表达盒成功构建至pYLCRISPR/Cas9P_35S-N植物表达载体上,可同时对该家族4个基因进行编辑;杜梨遗传转化试验结果表明,共计浸染595粒杜梨子叶,获得抗性芽176个,阳性植株33株,转化效率达到5.55%。成功构建了可以同时靶向杜梨PbGID1s家族基因的CRISPR/Cas9载体,通过农杆菌介导,成功将该载体转化至杜梨子叶,并获得阳性植株。     

PEG预处理对老化杜梨种子活力的影响

将经过４８ｈ,９６ｈ,１４４ｈ,１９２ｈ老化处理的杜梨种子,经过低温沙藏后晾干,用２０％的ＰＥＧ处理,时间分别为６ｈ,１２ｈ,１８ｈ,经培养后测定其生理生化指标及活力,结果表明,ＰＥＧ处理档以提高各老化种子的活力,表现在渗漏减少,有害物质减少,ＳＯＤ活性提高。