3种兔毛的部分显微形态学特征及分析比较

哺乳动物被毛形态特征的显微结构研究可以为动物种属鉴定及识别提供依据。试验对加利福尼亚兔(Lepus californicus)、家兔(Oryctolagus cuniculus)及草兔(Lepus capensis)的毛纤维横切图和它们不同部位的直针毛髓质指数的研究表明,草兔毛纤维横切图异常特殊,可将其与加利福尼亚兔及家兔进行区分,加利福尼亚兔与家兔的毛纤维横切图相似,不能进行二者的区别鉴定;但加利福尼亚兔与家兔在髓质指数区间上的分布有所区别,依次为47.5%～71.7%和72.8%～91.1%,此指标可以将二者进行区分。     

Cdc42蛋白在牛卵母细胞中的表达分布及对其成熟的影响

【目的】探明Cdc42蛋白在牛卵母细胞成熟过程中的表达及分布规律,并且研究抑制Cdc42活性对于牛卵母细胞成熟的影响。【方法】首先通过收集体外成熟不同时间（0-24 h）的牛卵母细胞,用Western blotting的方法检测Cdc42蛋白在牛卵母细胞中的表达量变化情况,通过免疫细胞化学的方法检测Cdc42蛋白在牛卵母细胞中的分布及定位情况。根据GenBank公布的牛Cdc42基因（GenBank登录号：NM_001046332.1）的mRNA序列设计引物,并在正向和反向引物的末端分别加上KpnⅠ和EcoRⅠ酶切位点,用PCR的方法扩增牛Cdc42基因的CDS区,将PCR产物和pMD19T载体连接得到野生型的克隆载体pMD19T-Cdc42WT。用定点突变引物以pMD19T-Cdc42WT为模板进行PCR反应,得到Cdc42的显性负性突变体Cdc42T17N的克隆载体pMD19T-Cdc42T17N。将pMD19T-Cdc42WT和pMD19T-Cdc42T17N分别酶切后,将Cdc42WT（775 bp）和Cdc42T17N（775 bp）片段分别连接到pcDNA3.1（+）的多克隆位点区域,得到相应的原核表达载体pcDNA3.1（+）-Cdc42WT和pcDNA3.1（+）-Cdc42T17N。用体外转录的方法分别得到Cdc42WT和Cdc42T17N的cRNA,用显微注射的方法将相应的cRNA分别注入到牛GV期卵母细胞质内,检测其成熟率的变化。【结果】①Cdc42蛋白分别在牛卵母细胞中成熟培养0、4、8、12、16、20以及24 h时表达量没有明显差异,但是其分布规律随着减数分裂的进行发生着动态的变化：Cdc42蛋白在卵母细胞皮质区域集中分布的模式在生发泡（germinal vesicle,GV）期卵母细胞中很少出现,而在第一次减数分裂中期（metaphase Ⅰ,MⅠ）卵母细胞中出现得最多也最为明显;Cdc42蛋白在染色体附近的皮质富集的现象开始出现于前中期（pro-metaphase Ⅰ,pMⅠ）,并且出现频率从pMⅠ期到第2次减数分裂中期（metaphase Ⅱ,MⅡ）逐渐增多;Cdc42蛋白和纺锤体重叠定位的现象在第1次减数分裂后期（anaphase Ⅰ,AⅠ）到末期（telophaseⅠ,TⅠ）的卵母细胞中占有有很高比例,而到MⅡ期时这种现象又很少出现。②从牛卵母细胞的总cDNA中扩增Cdc42基因得到785 bp的片段,构建的牛Cdc42的野生型及其显性负性突变体的克隆载体pMD19T-Cdc42WT和pMD19T-Cdc42T17N经酶切鉴定和以及测序比对后,符合预期结果,即成功克隆了牛野生型Cdc42基因并得到其显性负性突变体Cdc42T17N;③构建的相应的原核表达载体pcDNA3.1（+）-Cdc42WT和pcDNA3.1（+）-Cdc42T17N经酶切鉴定和测序比对,符合预期结果,经过体外转录均得到一个3079 bases和987 bases的RNA片段,符合预期结果,即成功构建了相应的原核表达载体并获得相应的cRNA;④与正常成熟培养组和注射Cdc42WTcRNA的牛卵母细胞相比,注射Cdc42T17NcRNA的成熟率显著降低（P<0.05）。【结论】卵母细胞在卵泡发育过程中就已经积累了足够的Cdc42蛋白,而在减数分裂过程中Cdc42可以在卵母细胞的皮质以及纺锤体的位置发挥作用,而且正常的Cdc42活性是牛卵母细胞完成成熟过程并排出第一极体所必需的。     

东方百合杂交种胚囊发育与双受精过程细胞学观察

以东方百合索蚌(Sorbonne)和元帅(Acapulca)为试材,采用石蜡切片法和荧光显微技术研究其胚囊发育,观察花粉管生长和双受精过程,研究适合百合的授粉及进行胚抢救的时期.结果表明:百合大孢子的发育形式为贝母型,其胚囊发育最终形成育性正常的7细胞胚囊,-2级的胚囊已经发育成熟,适宜授粉受精.异花授粉后花粉管3～5d到达胚囊,并释放出2个精核进行双受精.百合胚胎发育经过合子、原胚、球形胚、子叶型最终发育成熟.胚乳发育与胚胎同步,属于核型胚乳,在形成球形胚后胚乳细胞逐渐形成细胞壁.授粉后45d进行胚抢救较好.     

稻壳生物质颗粒成型机理的显微观察

采用电子显微镜对稻壳生物质颗粒进行显微观察,从而分析了稻壳生物质颗粒的成型机理,包括化学和物理两方面。该研究工作为稻壳生物质颗粒燃料技术的开发及产业化应用奠定了基础。     

6种紫珠属药材的性状·半显微及显微比较鉴别研究

[目的]建立简单易行的紫珠鉴别方法,准确鉴别杜虹花等6种紫珠,保证临床用药的安全有效,为紫珠药材及其中药制剂质量控制提供参考。[方法]采用性状鉴定、半显微及显微鉴定方法对紫珠属6种不同紫珠叶进行鉴别。[结果]在外观形状方面,不同品种的紫珠形态特征较相似,但叶形、叶端、叶基、叶缘、厚薄、表面毛茸及色泽等特征有一定差异,基本可区分;在显微特征方面,腺毛、非腺毛及草酸钙结晶等有明显区别。[结论]性状鉴定方法基本可以鉴别几种紫珠的原药材,但个别品种难以区分;而采用半显微及显微鉴定方法观察其表面制片及粉末制片的腺毛、非腺毛、结晶的形态特征以及分布特点等可鉴别紫珠各品种。准确快速且简便经济的显微鉴定方法是鉴别紫珠属植物药材叶片的关键手段。     

部分桑树品种花粉亚显微形态观察及比较

[目的]了解桑树花粉的亚显微结构及形态学特征。[方法]对7个桑树品种的花粉通过戊二醛固定制样处理,酒精梯度脱水、冷冻干燥和金属喷镀制备后利用扫描电子显微镜进行形态大小及表面纹饰观察。[结果]花粉表面特征及纹饰均清晰可见,表明该试验方法适合桑树花粉的扫描电镜观察;供试桑树花粉为近球形,具2个萌发孔,孔膜具刺突;极轴大小15.99～22.63μm,赤道轴大小14.98～20.78μm,‘育2号’花粉体积最大,而‘晋选7号’花粉最小;花粉外壁均分布有不同密度的点状颗粒,花粉表面呈现平滑和瘤状突起2种纹饰类型。[结论]戊二醛固定液–酒精梯度脱水法是进行桑树花粉形态观察的一种较理想的研究方法;该研究结果或可为桑属植物的孢粉学鉴定及种甚至种下等级的系统分类研究提供有益资料。     

基于数码显微互动系统之高校创新型植物学实验教学体系构建研究

基于当前国内最先进的数码显微互动系统,进行了新时期高校创新型植物学实验教学体系构建的初步研究。该实验教学体系以Motic数码显微互动教学系统为平台,在植物学实验教学内容、教学方法、显微图像获取及分析、课程考核方式等方面对传统高校植物学实验课程教学体系进行了根本上的改进,实现了植物学实验教学过程中师生实时交互的现代化教学模式,可以大大提高我国高校植物学实验课程教学水平。     

家兔超数排卵和胚胎移植妊娠率的影响因素分析

应用FSH和HCG相结合的不同方法 (递减量与恒量法),对不同兔龄和是否经产的中国家兔进行了超数排卵处理。其中,递减量法超排处理:每间隔12 h依次肌肉注射15、15、10、10、5及5 U/只共60 U的FSH,6次之后间隔12 h,经耳缘静脉注射HCG 100 U/只,合笼;恒量法超排处理:每间隔12 h肌肉注射10 U/只共60 U的FSH,6次之后间隔12 h,经耳缘静脉注射HCG 100 U/只,合笼。17 h后,取卵经显微注射后移植到排卵点分布不同的家兔输卵管中,比较分析了超数排卵及胚胎移植妊娠率的影响因素,旨在优化兔超数排卵和胚胎移植方法。结果显示,①总量为60 U的FSH递减量肌肉注射法超排效果略优于恒量法(688枚、671枚),但差异不显著(P>0.05);②9～11月龄的母兔超排效果明显优于6～8月龄的母兔(794枚、565枚),差异显著(P<0.05);③经产母兔的超排效果明显优于未经产的母兔(887枚、472枚),差异显著(P<0.05);④经显微注射重组DNA的胚胎移植受体时,两侧卵巢均有排卵点的胚胎移植受体妊娠率明显高于一侧卵巢有排卵点和两侧卵巢均无排卵点的受体(81.25%、38.46%、37.50%),差异显著(P<0.05)。试验证明,通过肌肉注射递减总量为60 U的FSH对9～11月龄经产母兔的超排效果最佳,且两侧卵巢均有排卵点的受体胚胎移植妊娠率最高,为胚胎研究工作者提供了一定的参考依据。     

原木灵芝孢子研究：（Ⅲ）与木屑袋栽灵芝孢子的鉴别

原木灵芝孢子与木屑袋栽灵芝孢子可以鉴别如下:1.在扫描电镜下,前者形态饱满,后者大多数孢壁内陷;2.X-射线能谱面扫描分析结果表明,两者Mg、Al、Si、P、S、Cl、K、Ca、Fe、Ni等无机元素相对含量差异显著,前者Si、Ca含量较高;3.高效液相色谱分析结果表明,前者灵芝酸(Ganoderic acid)A、B等灵芝三萜酸含量较高,而后者未检出Ganoderic acid C;4.孢子粉经乙醚脱脂后用乙醇回流提取、浓缩成浸膏,前者提取率(固形物含量)达4.2％～4.8％,而后者仅为1.9％～2.1％。     

荧光显微技术在枣疯病病原鉴定中的应用

以易感染枣疯病的阜平大枣为试材，对影响枣疯病病原荧光显微观察的主要因素进行了系统研究。结果表明：苯胺蓝（ａｎｉｌｉｎｅ ｂｌｕｅ）、ＤＡＰＩ（４’，６－ｄｉａｍｉｄｉｎｏ－２－ｐｈｅｎｙｌｉｎｄｏｌｅ·２ＨＣＩ）和阿的平（ｑｕｉｎａｃｒｉｎｅ）３种荧光染料均可用于枣疯病病原鉴定，其中以ＤＡＰＩ效果最佳。ＤＡＰＩ用于定性分析的是了适浓度为０．３μｇ·ｍＬ＾－１，用于定量分析的最适浓度为１．０μｇ·ｍ