小鼠隐藏管状线虫线粒体cox1基因的扩增及序列分析

对从试验小鼠体内分离的蛲虫样品PMZ1-5的线粒体细胞色素c氧化酶第1亚基(cox1)的部分基因(pcox1)进行PCR扩增、测序及序列分析,并与网上相关序列进行比对分析,研究其线粒体pcox1基因遗传变异情况.结果表明,获得pcox1有效序列373 bp,经序列比对分析.发现5个蛲虫样品之间的变异很小,只有1个碱基的差异,序列相似性为99.73%～100%,BLAST分析结果表明为隐藏管状线虫,与同属的Syphacia montana序列差异性为5.24%～5.68%.结果表明,隐藏管状线虫的pcox1序列种内变异很小,种间差异明显,本结果为进一步研究蛲虫的群体遗传学奠定了基础.     

关于《河南省畜牧业条例（草案）》的说明－－2001年9月24日在河南省第九届人民代表大会常务委员会第二十四次会议上

主任、各位副主任、秘书长、各位委员:根据省人大常委会立法计划的安排,受主任会议委托,农工委组织起草了《河南省畜牧业条例(草案)》(以下简称《条例(草案)》),现将起草的有关情况说明如下:     

76 份冬小麦品种（系）苗期耐旱性鉴定筛选研究

为了解不同冬小麦品种（系）的耐旱性,掌握冬小麦在轻度干旱胁迫条件下的胚芽鞘长度变化规律,缩短抗旱小麦品种筛选周期,以76份冬小麦品种（系）为试验材料,采用聚乙二醇（PEG-6000）模拟田间干旱胁迫,并对不同材料的胚芽鞘长度进行调查,运用聚类分析方法按遗传距离对所有材料进行分类。结果表明：不同品种（系）种子之间、同一品种（系）种子水处理与PEG处理之间胚芽鞘的长度均存在梯度的差异;加入聚乙二醇（PEG-6000）后,种子生长受到胁迫,胚芽鞘的生长速度比对照处理的生长速度减慢,胚芽鞘的伸长长度比对照处理的胚芽鞘长度短;经过PEG处理后的种子胚芽鞘长度明显低于在水中生长的种子。筛选出经PEG处理胚芽鞘长度高于对照洛旱7号的品种开麦1606和济麦22。与对照品种周麦36相比,胚芽鞘更长的品种有38个,胚芽鞘长度增幅1.39%～53.47%。根据胚芽鞘长度的变化,将76份小麦材料分为8类,类群IV胚芽鞘长度最长,可作为抗旱性小麦品种（系）。该结果可为抗旱品种的筛选和新品种选育及抗旱机制研究提供参考和基础材料。     

斑点叉尾(鮰)嗜麦芽寡养单胞菌的分离鉴定及系统发育分析

从发生在四川、重庆等省市的斑点叉尾(鮰)急性流行性传染病病鱼的肝脏、肾脏内分离到1株高致病性菌株(CCF00024),人工感染健康鱼表现出与自然病鱼相同的症状,并从中分离获得同种细菌,证实其为斑点叉尾(鮰)急性流行性传染病的病原菌.形态、生理生化检测表明,该菌为非发酵型直杆菌,严格需氧,革兰氏阴性,极生多鞭毛,对除麦芽糖和甘露糖以外的多种糖类不利用产酸,氧化酶阴性,DNA酶、蛋白酶、脲酶、赖氨酸脱羧酶阳性,MR、VP阴性.在以该菌16S rDNA序列(GenBank登录号AY970826)和GenBank及RDP数据库内同源性较高的细菌16S rDNA序列构建的系统发育树中,分离菌CCF00024与嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)聚在一簇,特别是与S.maltophilia M5-1的同源性最高,序列相似性达99.6%,结合形态和生理生化特点将其鉴定为嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia).药敏试验结果表明,对磺胺甲(口恶)唑、磺胺异(口恶)唑、阿齐霉素、洛美沙星高度敏感,而对新霉素、卡那霉素、氨苄青霉素,头孢唑啉、先锋霉素V和链霉素不敏感.     

苏太猪CAST基因多态性与肉质性状的相关性研究

采用PCR-RFLP方法对72头苏太猪的钙蛋白酶抑制蛋白(calpastatin,CAST)基因遗传多态性与肉质性状的相关性分析。对CAST基因第6内含子上MspⅠ、HinfⅠ、RsaⅠ三种酶切位点进行检测,结果表明:CAST基因第6内含子上,MspⅠ酶切位点的3种基因型间在肌肉的嫩度、pH值、系水力水平指标上均差异显著(P0.05);HinfⅠ酶切位点的3种基因型间在肌内脂含量指标上差异显著(P0.05),在肌肉嫩度上差异极显著(P0.01)。RsaⅠ酶切位点上也发现了3种基因型,但各基因型的不同性状间差异不显著(P0.05)。     

牦牛分割肉加工中HACCP体系的建立

为了规范牦牛屠宰加工,提高产品卫生质量,保证肉品安全。本文从甘肃首曲生态食品有限公司碌曲加工厂牦牛的宰前管理、屠宰加工、预冷排酸、分割和成熟等方面入手,在对屠宰加工工艺流程进行分析研究和检测的基础上,确定了危害点,制定出一套完整、切实可行的牦牛屠宰加工的HACCP食品安全管理模式,经过一段时间的运行,取得了较好的效果。     

实时荧光定量PCR检测鸭疫里默氏杆菌方法的建立和应用

根据我们实验室发现的鸭疫里默氏杆菌（RA）荚膜多糖蛋白基因序列（DQ151838）,设计和合成荧光定量PCR引物和探针,建立了检测RA的实时荧光定量PCR方法。该法的表达式Y=-3.416X＋39.492,相关系数1.000,PCR循环效率96.2%,DNA拷贝数在10^0～10^8范围内检测曲线有良好的线性关系。该法的最适Mg^2＋、引物和探针浓度分别为4～5mmol/L、0.16～0.2μmol/L和0.16μmol/L,最低能够检测到RA的DNA模板为2.0copies/μL。1/10半数致死量的RA人工皮下注射感染7日龄樱桃谷鸭后2h即可在心、肝、肺、胸腺、食管中检测到RA核酸;感染后8h即可在心、肝、脾、肺、肾、脑、胰、食管、气管、胸腺、法氏囊、十二指肠、直肠、血液和咽喉拭子检测到RA核酸,36～120h是RA在感染雏鸭除了咽喉、食管和气管各个组织器官繁殖数量最高峰期,其后逐渐下降。RA人工感染致死雏鸭的心、肝、脑RA分离和FQ-PCR检测符合率为100%。对临床送检具有典型鸭疫里默氏杆菌病临床症状和病理变化的死亡雏鸭的肝脏、心血和脑组织的FQ-PCR检测的阳性率均为100%,而RA分离的阳性率分别只有74.3%（26/35）、82.9%（29/35）和91.4%（32/35）。FQ-PCR可用于鸭疫里默氏杆菌感染的快速诊断、流行病学调查和鸭产品的检疫等。     

扩展莫尼茨绦虫DAZ基因保守结构域所在片段的克隆及原核表达

为了克隆和表达编码扩展莫尼茨绦虫无精症缺失(DAZ)基因,试验根据GenBank中扩展莫尼茨绦虫DAZ基因cDNA序列(登录号为GH291478)设计1对特异性引物,以扩展莫尼茨绦虫组织总RNA为模板,RT-PCR扩增DAZ基因,并克隆到pMD19-T载体中进行序列测定,构建重组质粒pET28a-DAZ,转化BL21(DE3)大肠杆菌感受态细胞,以异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达;利用非变性聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)分析表达产物,通过螯合琼脂糖凝胶FF亲和层析柱对重组蛋白进行纯化。结果表明:重组DAZ基因在大肠杆菌中高效表达,表达的融合蛋白分子量约为14 ku。     

用免疫组织化学染色法检测猪生殖-呼吸道综合征病毒(PRRSV)抗原的研究

本试验用抗 Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ 单克隆抗体（ Ｓ Ｄ Ｏ Ｗ １７）建立了检测猪体内 Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ 抗原的免疫组化染色法,主要步骤：组织块在１００ ｍ Ｌ／ Ｌ中性缓冲液福尔马林中固定２４～４８ ｈ→常规脱水、石蜡包埋、切片４～５μｍ →二甲苯脱蜡→１００％ 酒精→１０ ｍ Ｌ／ Ｌ盐酸酒精 ３０ ｍ ｉｎ（消除内源性过氧化物酶）→９５％ 酒精→８５％ 酒精→７５％ 酒精→蒸馏水→０．０１ ｍ ｏｌ／ Ｌ Ｐ Ｂ Ｓ→１０％ 马血清３７ ℃３０ ｍ ｉｎ 后转４ ℃过夜→０．０１ ｍ ｏｌ／ Ｌ Ｐ Ｂ Ｓ３×５ ｍ ｉｎ→生物素化马抗鼠 Ｉｇ Ｇ（１∶２００） ３７ ℃ ６０ ｍ ｉｎ→０．０１ ｍ ｏｌ／ Ｌ Ｐ Ｂ Ｓ３× ５ ｍ ｉｎ→辣根酶标记链亲和素（１∶２００）３７℃ ６０ ｍ ｉｎ→０．０１ ｍ ｏｌ／ Ｌ Ｐ Ｂ Ｓ３×５ ｍ ｉｎ→新鲜配制的 Ｄ Ａ Ｂ室温下显色 ５～１５ ｍ ｉｎ→０．０１ ｍ ｏｌ／ Ｌ Ｐ Ｂ Ｓ洗→常规脱水、透明、封片。经对８ 例试验感染 Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ 仔猪各种组织内 Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ 抗原的检测,本法具有简单、快速、特异性强,结果清晰、稳定及重复性好等特点,是检测组织内 Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ 抗原的一种好方法。