猪血凝性脑脊髓炎病毒核衣壳蛋白可抑制Ⅰ型干扰素产生

为明确猪血凝性脑脊髓炎病毒(PHEV)合成的病毒蛋白抑制Ⅰ型干扰素(IFN)产生的分子机制,本研究将PHEV接种RAW264.7细胞后利用放线菌酮药物处理,结果显示,随着药物对病毒蛋白合成的抑制,β-干扰素(IFN-β)的生成增多;通过构建不同的病毒蛋白真核表达质粒,转染至HEK293T细胞,经双荧光素酶报告基因系统筛...     

鞍带石斑鱼isg15基因cDNA克隆及其在虹彩病毒感染下的表达分析

本研究利用PCR和RACE技术首次获得了鞍带石斑鱼(Epinephelus lanceolatus)干扰素刺激基因15(interferon stimulated gene 15,isg15)全长序列.isg15基因序列长为910 bp,包含一个468 bp的开放阅读框,可编码155个氨基酸,预测分子量为17.09 k...     

姜黄素对猪瘟病毒复制的抑制作用

为了研究姜黄素(curcumin)及其衍生物在猪肾上皮细胞(PK-15)上对猪瘟病毒(CSFV)复制的影响,通过蛋白免疫印迹、实时荧光定量PCR和共聚焦检测等方法,鉴定姜黄素的抗病毒作用及其机制。结果:Western blot检测发现CSFV非结构蛋白N^pro含量显著下降(P<0.05);激光共聚焦结果发现,姜黄素处理后病毒进入细胞依赖的纤维状肌动蛋白(F-actin)重排受阻;Western blot和RT-qPCR检测显示,姜黄素可抑制热休克蛋白70(HSP70)表达,显著下调环氧化酶2(COX-2)和上调过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR-γ)(P<0.05)。研究表明:姜黄素可减少CSFV进入PK-15细胞,抑制CSFV引起的细胞应激从而抑制病毒复制,在一定程度上保护PK-15细胞免受病毒感染,为姜黄素的抗病毒作用提供了参考。     

麦冬多糖对鸡新城疫病毒作用的体外研究

为探究麦冬多糖对鸡新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)的作用,试验采用水提醇沉法提取5种分子量麦冬多糖,采取三氯乙酸法去除蛋白等杂质,用苯酚-硫酸法和考马斯亮兰G-250法分别测定提取物的糖和蛋白含量,用MTT法测定不同分子量麦冬多糖对鸡胚成纤维细胞(CEF)的安全浓度,用3种作用方式测...     

从中国商陆分离的PacPAP基因转化番茄对TMV的抗性研究

以中国商陆(Phytolacca acinosa)叶片为材料,经PCR从基因组扩增克隆缺失无毒型抗病毒蛋白基因.采用叶盘法转化番茄,对转基因植株T1代摩擦接种TMV,50d后统计发病情况.结果表明:克隆得到缺失无毒型PAP基因PacPAP,大小为714bp,与美洲商陆抗病毒蛋白基因的同源性为99.7%,GenBank登陆号为AY603353;得到PacPAP整合入番茄基因组中的阳性植株11株,检测的4个转基因番茄株系均达到抗病级别,对照为感病.     

种薯级别和抗病毒药剂处理对秋马铃薯生长与产量的影响

湖南秋马铃薯播种正值高温干旱,病毒病发生严重.该研究以"费乌瑞它"的脱毒微型薯和小个商品薯为试验材料,研究不同时期喷施抗病毒药剂盐酸吗啉胍对马铃薯生长及产量的影响.结果表明,不同种薯级别的马铃薯产量差异不显著.其中,小个商品薯各处理的产量在14.81～17.15t/hm2,平均产量高于脱毒微型薯.种薯级别和抗病毒药剂共同影响马铃薯的产量,仅齐苗期喷施药剂的小个商品薯的总产量、商品薯产量和商品薯率最高,分别为17.15t/hm2、15.59t/hm2、90.91％.     

重组扬州鹅IFN-α的表达与活性研究

为获得具有抗病毒活性的鹅干扰素,本实验参考GenBank中鹅IFN-α基因序列设计引物,采用RT-PCR方法扩增扬州鹅IFN-α的全基因。将去除信号肽的IFN-α克隆至pET32a(+)以构建pET-mGoIFN-α,重组菌经IPTG诱导表达重组蛋白,纯化后的蛋白(mGoIFN-α)免疫BALB/c小鼠,利用ELISA方法测定小鼠血清抗体效价,westernblot检测抗体特异性。同时,将IFN-α全长基因克隆至pcDNA3.1(-)以构建pcDNA-GoIFN-α,间接免疫荧光试验检测rGoIFN-α在鹅胚成纤维细胞(GEF)中的表达,细胞病变抑制法检测其抗水泡性口炎病毒(VSV)活性。结果显示:本研究扩增得到576bp的扬州鹅IFN-α全基因与486bp的成熟基因片段;原核表达的mGoIFN-α为36.3ku,免疫小鼠后可产生具有良好特异性与抗原活性的多克隆抗体,效价为1:16000;pcDNA-GoIFN-α可在GEF中表达,并具有较高的抗VSV活性。本研究为制备安全、高效的重组鹅干扰素,为研制鹅病毒性疾病的新型生物制剂奠定了基础。     

牛Ⅰ型干扰素受体α链与其配体结合活性的鉴定

为研究牛Ⅰ型干扰素受体α链（IFNAR1）与其配体结合的生物学性质，本研究采用RT-PCR方法从感染水疱性口炎病毒（vesicular stomatitis virus，VSV）的犊牛原代肾细胞中扩增得到IFNAR1基因，然后构建了表达BoIFNAR1胞外区多肽（BoIFNAR1-EC）的原核表达载体pET30a-BoIFNAR1-EC，在Rosetta^TM（DE3）pLysS宿主菌中表达出重组蛋白rBoIFNAR1-EC，并以纯化后的rBoIFNAR1-EC作为免疫原制备兔抗牛IFNAR1的多克隆抗体，随后鉴定BoIFNAR1与其配体的结合活性。结果表明，试验成功克隆得到1 685 bp的牛IFNAR1基因，编码560个氨基酸，由24个氨基酸组成的信号肽、414个氨基酸组成的胞外区、23个氨基酸组成的跨膜区及99个氨基酸组成的胞内区组成，与其他物种IFNAR1氨基酸序列同源性为63%~91%，在进化上具有高度保守性，其与羊的亲缘关系最近。随后构建了含牛IFNAR1胞外区基因的重组表达载体，并诱导表达了重组牛IFNAR1胞外区蛋白rBoIFNAR1-EC，其在大肠杆菌中几乎全部为可溶性表达，经纯化透析后作为免疫原制备了兔抗牛IFNAR1的特异性抗体，抗体效价高达1：204 800。配体结合试验表明，牛IFNAR1重组蛋白可与牛IFN-αA和IFN-ε结合，其多克隆抗体可阻断牛IFN-αA和IFN-ε与细胞表面的IFNAR1特异性结合，进而阻断牛IFN-αA和IFN-ε的抗病毒信号传导。     

猪疫病防控中选用抗病毒药物的探讨

猪疫病防控成效的高低直接关乎养殖户的养殖收益和民众的生命安全,为确保猪养殖产业的良性发展,为民众提供安全优质的猪肉制品,必须重视猪疫病的日常防控,谨慎选用抗病毒药物,本文主要基于两点就猪疫病防控中抗病毒药物的选用进行探讨。