犬α1干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及其抗病毒活性研究

亚克隆犬α1干扰素(CaIFN-α1)成熟蛋白编码基因并克隆到表达载体pPICZα-A,构建转移重组载体pPICZα-A-CaIFN-α。pPICZα-A-CaIFN-α经SacⅠ酶切线性化后电转化导入毕赤酵母菌株X-33。转化子经PCR分析鉴定后利用甘油增菌和甲醇诱导,实现了CaIFN-α1在毕赤酵母系统中的分泌表达。SDS-PAGE检测结果表明表达产物相对分子质量约为2.7×104,比其推导结果(约1.9×104)大,推测可能是发生了糖基化。酵母分泌表达的CaIFN-α1具有较高的抗病毒活性,约为1.45×106U·mL-1,蛋白含量约为96mg·L-1,比活性为1.49×107U·mg-1。重组CaIFN-α1的生物学活性具有较强的种属特异性,在犬肾细胞(MDCK)上具有很高的抗病毒活性,在鸡胚成纤维细胞上活性较低,而在猫肾细胞(F81)和牛肾细胞(MDBK)上几乎没有抗病毒活性。进一步研究发现,重组犬α1干扰素对犬瘟热病毒和伪狂犬病毒在犬肾细胞中的增殖具有显著抑制作用。     

Study on Antimicrobial and Antiviral Activities of Lysozyme From Marine Strain S-12-86 In Vitro

In this study, the in vitro antimicrobial and antiviral activities of the lysozyme from marine strain S-12-86 （LS） were investigated, The antimicrobial activity of LS was tested by minimum inhibition concentration （MIC） and minimum bactericidal concentration （MBC） method. The inhibiting effects of LS on pseudo rabies virus （PRV） in swine kidney cells （PK-15 ceils） were judged by cytopathogenic effect test （CPE）, The results showed LS had a broad antimicrobial spectrum against several standard strains including gram-positive bacteria, gram-negative bacteria, fungi, etc, The MIC of LS was 0.25-4.00 mg mL^-1 and its MBC was 0.25-8.00 mg mL^-1, respectively, Observation under the transmission electron microscope revealed that the cell wall of Candida albicans was distorted seriously, and the cytoplasm with many cavities was asymmetrical after being hydrolyzed by LS, The median cytotoxicity concentration （TC50） of LS was 100.0 μg mL^-1, the median effective concentration （EC50） was 0.46 μg mL^-1, and the selectivity index （TI = TC50/EC50） was 217. LS could inhibit PRV in PK-15 cells when it was added to cell culture medium at 0, 2, 4, 6, and 8 h after PK-15 cells had been infected by PRV. From the results, we concluded that LS had broad antimicrobial spectrum and good inhibiting effects on PRV,     

重组猪α干扰素理化性状及其体外抗病毒活性研究

[目的]研究重组猪α干扰素（rPoIFN-α）半成品理化性状并对其体外抗病毒活性进行测试与鉴定。[方法]用HEp-2/VSV体系对3批rPoIFN-α蛋白进行抗病毒活性检测,以重组人IFN-α为参比品,测定干扰素效价;用0.25%胰蛋白酶HCl以及鼠抗猪α干扰素单克隆抗体作用已知效价的rPoIFN-α半成品,并检测各批次抗病毒活性,对rPoIFN-α理化性状进行评价;在猪肾细胞株（PK-15）上检测rPoIFN-α对猪细小病毒（PPV）和猪伪狂犬病毒（PRV）的致细胞病变抑制效应,观察rPoIFN-α的体外抗病毒活性。[结果]HEp-2/VSV体系滴定rPoIFN-α半成品效价可达1.5×105IU/ml,比活性达1.1×106IU/mg;rPoIFN-α经0.25%胰蛋白酶37℃作用1h,效价残留率低于1%,经HCl（pH=2.0）处理72h效价残留率高达95%以上,经56℃处理30min效价残留率高于47%,经鼠抗猪α干扰素单克隆抗体37℃作用1h后效价残留率约为1%;体外抗病毒试验表明,用50和500IU/mlrPoIFN-α可分别抑制PRV和PPV对PK-15细胞株致细胞病变效应。[结论]rPoIFN-α具有IFN-α的基本理化性状,其在体外可分别抑制PRV、PPV对PK-15细胞株致细胞病变效应,但剂量有差别。     

抗病毒药物在兽医临床上的应用

抗病毒药物是用于预防和治疗病毒感染的药物,可抑制病毒复制酶.病毒与细菌不同,缺乏自身繁殖的酶系统,是细胞内寄生的微生物,依赖宿主细胞代谢系统进行生殖复制.而药物在对病毒产生作用的同时也作用于宿主细胞,从而产生毒性作用.主要分抗病毒细胞因子和化学药物,下面对其在兽医临床上的应用分别进行介绍.     

一起兽药违法案件引发的思考

2011年,江苏省某村发生了一起使用假兽药致病猪死亡的案例。笔者对案情进行了了解,对违法案件折射出来的兽药行业相关问题进行了分析探讨,并提出了自己的思考,以供借鉴。1案件江苏省某村养猪户吉某,家中共养生猪104头,2头生猪出现发热症状,擅自决定自己给病猪打针用药。第2天生猪病情未见好转,遂请该镇兽医站副站     

三黄鸡a干扰素的克隆、表达及抗病毒活性初步研究

采用PCR方法从三黄鸡血液基因组中扩增鸡α干扰素全基因,并克隆和测序.序列分析表明,基因全长为582 bp,亚克隆其成熟蛋白编码基因489 bp.将该片段与表达载体pET-28a连接克隆至大肠埃希菌DH5α菌株,经测序和酶切鉴定,选取正向插入、读码框正确的阳性克隆.构建重组质粒并转化BL21(DE3),经IPTG诱导,...     

Tubacin对蓝舌病毒感染的抑制作用

蓝舌病(bluetongue,BT)是由蓝舌病毒(bluetongue virus,BTV)感染反刍动物,包括山羊、绵羊、水牛和骆驼等,引起的非接触性传染病,以口腔、鼻腔及胃黏膜发生溃疡性炎症病变为主要特征,库蠓是其主要传播媒介。BTV传播相当广泛,除了南极洲外的所有洲都有发现,近20年间在欧洲肆虐传播,造成了巨大的经济损失。目前发现的BTV包含26个血清型,型间没有交叉保护作用,使用传统疫苗只能提供部分保护。虽然目前已经有针对多种血清型BTV重组疫苗的研究,但保护效果并不理想。因此,研究防治BT的药物具有重要的应用价值。本研究发现,组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)的特异性抑制剂Tubacin能够抑制13型BTV感染,通过半定量PCR、Western blot、TCID_(50)等试验验证,Tubacin处理后细胞病变减轻,病毒RNA和蛋白表达水平下降,上清中病毒粒子含量减少。结果证明Tubacin可在一定程度上抑制BTV感染,Tubacin是抗BTV的候选药,HDAC6可能是抗BTV感染的靶点之一。     

双黄连水制剂治疗犬急性呼吸道感染的临床观察

急性呼吸道感染大多由病毒引起,这种感染不仅具有较强的传染性,而且易引起严重的并发症。目前尚无明确的抗病毒药物,近年来采用中药制剂治疗急性呼吸道感染,已取得一定疗效。1观察对象选择2004年1月份—2005年6月份,在北京市昌平区动物疫病预防控制中心诊治的急性呼吸道感染犬2     

世红严正声明

我世红生物干扰素是全国第一个有批文和独创具有广谱抗病毒作用,并是防治皆备的新生物制品,该药主治动物病毒性疾病,对猪黄白痢、圆环病毒、流行性腹泻、猪瘟、猪流感、禽流感显效。     

松子壳多糖对CDV和CPV的体外抗病毒活性

选用犬瘟热病毒(CDV)和犬细小病毒(CPV)标准株,体外分别以Vero和F81为受体细胞,以不同剂量的松子壳多糖和不同顺序作用于病毒复制周期的各个阶段.以病毒半数感染量(TCID50),细胞病变(CPE),MTT法作为评价松子壳多糖体外抗病毒活性的指标.结果表明,在预防给药、治疗给药、混合给药方法中,不同浓度的松子壳多糖均可不同程度地抑制病毒的致细胞病变作用,松子壳多糖最低质量浓度31.2 mg/L仍具有抗2种病毒作用,细胞存活率均在49.08%以上,且预防给药法和混合给药法的抗病毒效果要优于治疗法.