犬细小病毒抗体间接ELISA检测方法的建立

利用本实验室建立的昆虫细胞/杆状病毒表达系统表达犬细小病毒病毒样颗粒（CPV-VLPs）,采用硫酸铵沉淀、蔗糖密度梯度离心对表达的CPV-VLPs进行纯化,用电子显微镜、SDS-PAGE及Western-blotting方法检测纯化效果。以纯化的CPV-VLPs作为包被抗原建立CPV间接ELISA检测方法,对各反应条件进行优化并分析其特异性、敏感性、重复性。结果显示,CPV-VLPs经过纯化后纯度可达到95%以上;优化的ELISA最佳工作条件为：纯化抗原包被浓度为5.0mg/L,4℃包被过夜;1%BSA,37℃封闭2h;待检血清1∶40稀释,37℃孵育1.5h;HRP标记的酶标二抗1∶20 000稀释,37℃孵育1h;TMB室温避光显色30min;确定的血清阴性阳性临界值D450nm值为0.264。该方法可特异性检测犬细小病毒阳性血清,与犬瘟热、犬传染性肝炎、犬冠状病毒病、狂犬病阳性血清均不发生反应。该方法的敏感性为1∶640,批内重复试验变异系数小于6%,批间重复试验变异系数小于8%。42份临床血清样本的检测结果表明,与血凝抑制试验的符合率为90.48%。     

禽流感疫苗对禽类免疫效果的检测与分析

禽流感大流行时，在非疫区对禽类用H5亚型和H5、H9二价禽流感油乳苗进行免疫接种试验，并对其结果进行比较和分析。得出不同日龄的蛋鸡免疫接种20d后其HI抗体效价不同，不同的饲养方式、不同种类的家禽及不同种类疫苗的免疫效果均不同。85日龄蛋鸡产生的HI抗体效价达到7log2，鸡、鸭、鹅混养HI抗体效价低于平养和笼养，H5亚型禽流感疫苗免疫鸡和鸽其HI抗体效价达到了5log2以上，而对鹌鹑和鸭为1log2和3．2log2；单价禽流感疫苗和二价苗对鸡群免疫的效果不同，二价苗的免疫效果不如单价苗。     

规模化猪场脑心肌炎病毒感染的血清学调查

脑心肌炎病毒(EMCV)可引起猪的脑炎、心肌炎和母猪繁殖障碍,该病已在世界上多个国家暴发和流行。我国对EMCV及其所致疾病的研究工作还处于起步阶段,为了揭示EMCV在我国规模化猪场的感染情况,我们应用酶联免疫吸附试验(ELISA)对2005-2006年间采集自全国13个省市46个规模化猪场的3250份血清样本进行了EMCV抗体检测,结果显示,各省阳性率在39.64%~90%之间,平均抗体阳性率为72%,监测的46个猪场都存在EMCV感染,猪场感染阳性率为100%;对不同生长阶段猪群检测结果表明,EMCV抗体阳性率随猪龄的增长而升高,且不同生长阶段猪抗体阳性率差异极显著;成年公猪的抗体阳性率高于成年母猪。本项调查表明,我国规模化猪场已经普遍感染EMCV,这应引起我国养猪业警惕,并做好该病的综合防控。     

牛病毒性腹泻抗体制剂的制备及其应用研究

抗体制剂是牛病毒性腹泻最为有效的临床治疗药剂,但现有制剂易在瘤胃中降解而药效不佳。本研究利用抗体包被技术开发了一种能有效避免瘤胃降解的牛病毒性腹泻抗体制剂的制备方法,对抗体制剂筛选的6个组方体系进行稳定性、安全性和药效综合考察,表明体系1（抗体5.0g、卵磷脂20.0g、聚乙二醇800 15g、β-谷甾醇1.0g、鞣云实素3.0g、吐温-20 15.0g、去离子水41.0g）为最优组方,临床疗效显著高于普通抗体制剂。该制剂具有稳定性强和安全性高的特点,能有效解除瘤胃液对口服抗体的影响,促进其在肠道中的高效吸收和利用,对临床防控牛病毒性腹泻有着重要意义。     

3种猪肺炎支原体疫苗对仔猪的免疫试验

猪肺炎支原体(Mhp)是引起猪的一种慢性接触性呼吸道病,这种病世界广泛流行,猪群感染率在30％～80％[1],由于降低了生长率和饲料利用率引起养猪业的巨大经济损失.一旦猪群中有几头猪被感染,就会在同圈猪之间传播,特别是在断奶时将猪混群以后更是这样.此外,大量研究表明,猪肺炎支原体与其他病原体具有协同感染作用,尤其是与猪繁殖与呼吸障碍综合征(PRRS)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)、猪流感病毒(SIV)等病毒性疫病混合感染后可以使病毒性肺炎的严重性和持久性明显增加[2].近年来猪肺炎支原体疫苗已在生产中广泛应用,市场上有国产、进口,肌肉注射、肺内接种、一次、二次免疫等[3-4],为了查清这些疫苗的免疫效果,我们选择不同类型的疫苗和不同的接种方法进行了免疫试验,总结如下.     

贵州省猪传染性胸膜肺炎的抗体检测与病原鉴定

根据《贵州省畜禽疫病志》的资料，1992年以前，我省没有发生猪传染性胸膜肺炎的病例记载。近年来，随着畜牧养殖业的迅速扩大，生产方式向集约化与适度规模化发展．从国内外反复引种以及省内畜禽的频繁流动．在贵州省的一些种猪场中出现了传染性胸膜肺炎的临床病例。2005年8月，某种猪场2—4月龄的猪群发生一种疫病．主要表现咳嗽、生长停滞、体温在38～405。C之间。病情严重者喘气．甚至呈犬坐样，早晚呼吸困难症状加剧。4月龄以后临床症状逐渐缓解或消失。在疫病流行期间．曾采用氟苯尼考、土霉素等药物治疗效果不显著．遂将两头70日龄病猪送本实验室进行检查。剖检病变如下：心包与胸壁相粘连．心包膜增厚，不透明．心包腔内可见大量黄白色浑浊液体．含有乳糜样纤维素性渗出物。肺的膈叶出现多量实变区．心叶和尖叶分布较少，肺表面可见少量灰白色坏死结节和脓肿病灶。     

抗肠炎沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌鸡卵黄抗体(IgY)的研究

通过ELISA试验发现鸡抗肠炎沙门氏菌或抗鼠伤寒沙门氏菌卵黄抗体(IgY)具有很高的特异活性。用冻干的卵黄水溶性组分制成的肠炎沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌特异性IgY粉末分别含有15．5％和10％的特异性IgY。抗肠炎沙门氏菌IgY与鼠伤寒沙门氏菌有53.3％的交叉反应，抗鼠伤寒沙门氏菌IgY与肠炎沙门氏菌有42.4％的交叉反应。曾有报道证明沙门氏菌特异性IgY可以抑制沙门氏菌在液体培养基中的生长。肠炎沙门氏菌在含有鼠伤寒沙门氏菌特异性IgY的培养基中培养4—6小时的生长速率比对照组少4倍。通过细菌计数发现鼠伤寒沙门氏菌在含有特异性IgY培养基中培养6个小时后的数量比对照组少l.6cfu／ml。用免疫荧光技术和免疫电镜技术对IgY的特异结合活性作进一步的研究，发现沙门氏菌特异性IgY能够结合沙门氏菌表面的抗原上，并导致细菌表面结构改变。     

通过抗体监测分析影响免疫水平的原因

近几年来,动物免疫抗体监测已经成为衡量动物健康状况和动物疾病预防控制的重要指标,本人自2006年至2011年,每年都在进行动物口蹄疫、猪瘟、禽流感和鸡新城疫免疫抗体的跟踪监测,     

日粮添加枯草芽胞杆菌对大肠埃希菌感染仔猪免疫功能的影响

本试验旨在研究饲粮中添加枯草芽胞杆菌对大肠埃希菌K88感染仔猪血清免疫功能的影响。选用平均体重6.8kg±0.5kg的去势"杜×长×大"三元杂交公猪8头,随机分为2组,每头猪单栏饲养,对照组饲喂基础饲粮,试验组饲喂基础饲粮+0.1%枯草芽胞杆菌,每头猪灌服致病性大肠埃希菌K88菌液(1×1011 CFU)。采用ELISA方法检测血清中细胞因子和猪瘟抗体水平。结果表明,采食添加枯草芽胞杆菌的处理组仔猪比对照组仔猪血清IL-10水平提高(P0.01),血清IL-8和TNF-α水平降低(P0.01),猪瘟抗体阻断率提高(P0.05)。结果提示,仔猪采食含枯草芽胞杆菌的饲粮时,能够调节机体免疫功能,缓解致病性大肠埃希菌K88感染造成的炎症反应。研究工作为枯草芽胞杆菌的推广应用提供了试验依据。     

猪某些免疫指标及其与部分生产性状关系的研究

实验测定了哈白、杜洛克猪３月龄和５月龄的总数Ｅ－玫瑰花环形成细胞百分率、活性Ｅ－玫瑰花环形成细胞百分率、淋巴细胞转化率、血清ＩｇＧ含量及５月龄接种布氏杆菌猪型二号苗后７、２１、３５６的特异性抗体滴度，对这些免疫指标及其与部分生产性状的关系进行了分析，旨在为猪的抗病育种提供依据。实验结果表明：（１）３月龄和５月龄几个免疫指标均存在品种差异，哈白猪显著地高干杜洛克猪；（２）３月龄与５月龄间所测细胞免疫指标无显著差异，但５月龄血清ＩｇＧ含量显著高于３月龄血清ＩｇＧ含量；（３）哈白与杜洛克猪对布氏杆菌疫苗的抗体应答能力存在显著差异；（４）所测定的细胞免疫指标间大多表现正的相关，体液免疫指标间亦表现正的相关，而细胞免疫指标和体液免疫指标间大多具有较弱的相关；（５）所测定的几个免疫指标与生产性状间大多具有较弱的相关。