GST、6×His融合表达杆状病毒转移载体的构建

将pGEX-3X中由血吸虫（Schistosomajaponicum）编码的26kD谷胱甘肽转移酶基因Sj26和凝血因子Xa凝血酶位点引入到BacPAK8构建了融合表达杆状病毒转移载体BacSj26;将28kD的谷胱甘肽转移酶基因通过PCR突变消除终止密码后,引入BacPAK8构建了融合表达转移载体BacGST28。将P(MFHT)中的6×His序列克隆进BacPAK8,从而构建了6×His融合表达转移载体BacHis。这些融合表达转移载体的构建,为表达产物的一步纯化奠定了基础。     

南宁郊区奶牛水牛及黄牛肝功能状况的调查

本研究于2006年7月随机抽取南宁郊区奶牛、水牛及黄牛共107头,按照Radostits等推荐给牛肝脏检查的酶类指标[2]进行少量调整,检测了其血浆天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、γ-谷氨酰转移酶(GGT)、鸟氨酸氨基甲酰转移酶(OCT)、总胆红素(TBil)、直接胆红素(DBi     

桑天牛羧酸酯酶和谷胱甘肽S—转移酶与杨树次生代谢物质相关性研究

对取食8种杨树的桑天牛幼虫羧酯酯酶和谷胱甘肽S－转移酶活力进行了测定，证实取食不同杨树的桑天牛幼虫羧酸酯酶和谷胱甘肽S－转移酶活力存在显著差异。采用高效液相色谱法对8种杨树的14种次生代谢物质含量进行了测定，经聚类分析将8种杨树分为2类：加拿大杨、I－214杨、北京杨、J－2杨、J－1杨、山海关杨为一类，毛白杨、新疆杨为另一类。对羧酸酯酶和谷胱甘肽S－转移酶活力与杨树次生代谢物质进行了逐步回归分析，逐步回归方程表明，杨树丁香酸、绿原酸含量高，苯酚、对羟基苯甲酸含量降低，则羧酸酯酶活力会较高；杨树苯酚含量增高，阿魏酸含量降低，则谷胱甘肽S－转移酶活力会较高。     

不同地理种群棉蚜三种关键性酶活差异及其与抗性相关性

【目的】研究新疆不同地理种群棉蚜3种酶的活性及抗药性的差异。【方法】测定新疆库尔勒、五家渠、石河子、奎屯、哈密地区棉蚜和实验室敏感种群羧酸酯酶、谷胱甘肽-S-转移酶、乙酰胆碱酯酶活性,并分析3种酶活性与吡虫啉抗性之间的关系。【结果】库尔勒、五家渠、石河子、奎屯和哈密地区乙酰胆碱酯酶和谷胱甘肽-S-转移酶的比活力比值分别为4.2、2.7、2.3、2.5、2.1倍和2.3、1.5、1.3、2.5、2.1倍,差异显著（P<0.05）;羧酸酯酶比活力比值为6.5、4.2、3.4、2.7、1.2倍,除哈密地区相对接近外,其余地区均明显高于1.0,差异显著（P<0.05）,2种棉蚜关键解毒酶和1种神经传导关键性酶与抗药性之间存在一定相关性。【结论】各地理种群棉蚜3种酶活性均显著高于敏感种群（P<0.05）,且彼此之间存在差异性,羧酸酯酶在棉蚜感受到吡虫啉杀虫剂胁迫时极有可能起到重要作用。     

磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶基因过量表达对集胞藻PCC6803脂肪酸合成的影响

磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶（phosphopantetheinyl transferases,PPTase）是细菌脂肪酸合成中的关键酶。本研究利用同源重组手段构建集胞藻PPTase基因（slr0495）过量表达重组质粒,在集胞藻PCC6803中进行表达研究,并在DNA和RNA水平进行验证,利用气相色谱-质谱联用仪（GC-MS）检测不同条件下突变藻株脂肪酸组分及含量。结果表明：在温度为30 ℃、光照强度为50 μmol ·m^-2 · s^-1培养条件下,过量表达slr0495基因突变藻株中C12:0、C16:0和C18:0的含量分别为1. 31 mg · g^-1、8.07 mg · g^-1和1.35 mg · g^-1,比野生型藻株分别提高了23.58%、25.31%和13.45%;在温度为20 ℃、50% NaNO₃浓度、光照强度为50 μmol · m^-2 · s^-1培养条件下,与野生型相比,突变藻株中C16:0和C18:0含量分别提高了44.71%和41.51%。以上结果表明,过表达slr0495基因增加了集胞藻PCC6803中长链饱和脂肪酸的含量,并且在低温（20 ℃）和缺氮（50% NaNO₃）双重胁迫培养条件下中长链饱和脂肪酸含量得到进一步提高。本研究为探究slr0495基因功能以及在逆境中基因产生的应激反应提供了理论依据,为微藻高产多不饱和脂肪酸代谢研究奠定了基础。     

梭梭糖基转移酶基因克隆及序列分析

以梭梭叶片为材料,根据其他植物糖基转移酶基因的保守序列设计引物,采用同源基因克隆及RACE-PCR方法克隆到2个同源的序列,分别命名为HaUGT1和HaUGT2。基因测序结果显示,HaUGT1基因编码区长1 485bp,编码495个氨基酸;HaUGT2基因编码区长1 185bp,编码394个氨基酸。HaUGT1和HaUGT2蛋白具有保守的PSPG基序、UDP-葡萄糖基转移酶结构域,与其他植物中的糖基转移酶蛋白同源性较高。     

马铃薯sgt2基因启动子的克隆及其活性分析

糖苷生物碱(SGAs)是一类存在于茄科和百合科植物的重要次生代谢物,与植物的抗逆性和产品品质有密切关系.茄啶葡糖基转移酶(SGT2)是SGAs合成代谢途径的末端关键酶之一,研究其编码基因的启动子序列对于SGAs生物合成代谢调控有重要的作用和意义.本研究采用染色体步移技术,克隆到马铃薯茄啶葡糖基转移酶基因(sgt2)起始密码子上游2 098bp的启动子序列,已注册到GenBank(注册号:KC331038).构建该启动子驱动报告基因gfp∶∶gus的植物双元表达载体p1304sgt2p,采用农杆菌介导的烟草叶片瞬时表达,通过GUS组织化学染色分析sgt2p启动子的活性.结果表明:gus基因在转化烟草叶片中高效表达,克隆的启动子具有活性.     

母猪饲料营养配制的两大要素

1矿物元素 骨骼和肢蹄发育对于长期饲养的繁殖母猪是非常重要的,因为肢蹄问题导致的母猪淘汰在很多猪场是非常普遍的。因此日粮钙磷水平需要高于肥育猪,通常后备母猪日粮钙磷的水平需达到0.80%的钙,0.70%的总磷或0.40%有效磷;生产母猪日粮钙磷水平保证至少0.90%的钙,0.80%的总磷或0.45%的有效磷。     

Effect of diacylglycerol acyltransferase 2overexpression in 3T3-L1 is associated to an increase in mono-unsaturated fatty acid accumulation

Background：Fatty acid（FA） composition is the most important parameter affecting the flavor and nutritional value of the meat.The final and the only committed step in the biosynthesis of triglycerides is catalyzed by diacylglycerol acyltransferase 2（DGAT2）.The role of DGAT2 in lipid accumulation has been demonstrated in adipocytes,However,little is known about the effect of DGAT2 on the FA composition of these cells.Methods：To investigate the role of DGAT2 in regulating lipid accumulation,FA composition and the expression of adipogenic genes,we cloned the open reading frame of the porcine DGAT2 gene and established 3T3-L1 cells that overexpressed DGAT2.Cells were then cultured in differentiation medium（DM） without FA,with a mixture of FAs（FA-DM）,or containing a ~（13）C stable isotope-labeled FA mixture（IFA-DM）.The FA composition of adipocytes was analyzed by gas chromatography-mass spectrometry and gas chromatography-isotope ratio mass spectrometry.Quantitative PCR and western blotting were employed to detect expression of adipogenic genes in 3T3-L1 adipocytes cultured with FA-DM for 12 d.Results：The triacylglyceride（TAG） content was significantly higher in 3T3-L1 adipocytes overexpressing DGAT2 than in control cells.When cultured in DM or FA-DM for 12 d,cells overexpressing DGAT2 showed a higher proportion of unsaturated FAs（C16：1 and C18：1）.However,when cells overexpressing DGAT2 were cultured with FA-DM for30 min,the FA composition was almost identical to that of controls.Further,the proportion of stable isotope-labeled FAs were similar in 3T3-L1 adipocytes overexpressing DGAT2 and control cells cultured in IFA-DM for 12 d.These results collectively indicate that the higher proportion of mono-unsaturated FAs,C16：1 and C18：1,may originate from de novo FA synthesis but not from the uptake of specific FAs from the medium.This hypothesis is further supported by evidence that both mRNA and protein expression of genes involved in FA synthesis（ACACA,FASN,SCD1,and A-FABP?     

紫果西番莲果实发育过程中挥发性香气物质及相关酶活性的变化

以西番莲香气物质较丰富的紫果‘台农1号’为试材,选取未成熟（T₁）、近成熟（T₂）和完全成熟（T₃）3个时期果实,采用顶空–固相微萃取–气质联用（HS-SPME-GC-MS）技术测定3个果实发育过程的挥发性香气物质组成及含量变化情况,同时检测对应果实中酯类香气物质合成相关的脂氧合酶（LOX）和醇酰基转移酶（AAT）活性,以期了解不同发育时期果实主要致香物质变化情况及物质与相关酶活性之间的相关性。结果表明：随着西番莲果实成熟度的增加,挥发性香气物质的种类和含量均有很大的提高,3个时期检测的香气物质总数分别为72种、95种和136种,总峰面积呈倍数增加;未成熟（T₁）和近成熟（T₂）2个时期萜烯类和酯类物质为主要的挥发性香气物质,在完全成熟（T₃）时期主要的挥发性香气为酯类,其峰面积占总峰面积达80.31%;随着果实成熟度的增加,酯类香气的种类和含量不断的提升,其中己酸乙酯,1-甲基己酯-己酸、丁酸乙酯、辛酸乙酯、1-甲基辛酯-丁酸、己酸己酯、1-甲基己酯-丁酸、丁酸己酯、(Z)-3-己烯基酯-己酸、乙酸己酯、2-甲基-辛酯-丙酸、辛酸己酯、3-羟基乙酯-己酸、(Z)-2-丁酸-乙酯等含量提升或占比较大,这些脂肪酸代谢途径产生的酯类在西番莲果实成熟过程中可能发挥了致香作用。LOX是酯类合成第一步的限速酶,AAT为酯类合成最后的关键酶。对不同发育期果实酯类合成相关酶活性测定结果表明,随着果实成熟度的增加,LOX、AAT酶活性呈上升趋势,尤其是T₃时期AAT酶活性显著的提升。由此推断,紫果西番莲果实发育过程中LOX和AAT酶的活性与酯类香气成分形成直接相关,酶活性的提升促进酯类香气的合成。