牛DHX36解旋酶及其突变体底物结合与解旋活性研究

【目的】研究牛(Bos taurus)解旋酶DHX36(BtDHX36)及其突变体蛋白对含有G4结构底物结合和解旋活性的差异,为深入研究牛DHX36酶学特征和结构提供理论参考。【方法】制备底物16nt-ssDNA、Telomere G4和Telomere G4-16T,构建重组质粒pET15b-sumo-BtDHX36,通过Overlap PCR引入点突变,构建位于RSM区和OB域的突变重组质粒,分别将质粒导入大肠杆菌BL21(DE3)菌株中诱导表达;经过Ni-NTA和Hi Trap SP HP柱纯化得到目的蛋白。以解离平衡常数为判定指标,利用荧光各向异性法(FA)对酶蛋白与底物结合时的KCl浓度(0,50和100 mmol/L)、反应温度(25,30和37℃)、MgCl_2浓度(0,2和5 mmol/L)、pH(6.5,7.5和8.5)进行优化,确定BtDHX36的体外最佳底物结合条件,比较野生型BtDHX36及其突变体对含有G4结构底物结合活性的差异。以解旋比例和速率常数为判定指标,利用快速停流-荧光共振能量转移(FRET)技术,比较野生型BtDHX36及其突变体对G4结构的解旋活性差异。【结果】成功构建了野生型BtDHX36重组质粒pET15b-sumo-BtDHX36及其RSM区突变体BtDHX36~(R63AI65A)、BtDHX36~(Y69A)、BtDHX36~(K76AN77AK78A)和OB域突变体BtDHX36~(Y862A)的重组质粒,诱导表达纯化后得到了纯度大于95%的酶蛋白。确定了野生型BtDHX36的体外最佳底物结合条件为:KCl 50 mmol/L、MgCl_2 2 mmol/L、20 mmol/L Tris-HCl pH=7.5、反应温度37℃。各突变位点均可降低酶蛋白与Telomere G4的结合活性。OB域的Y862A突变和RSM区K76AN77AK78A突变对酶蛋白解旋Telomere G4-16T活性均无明显影响;RSM区的R63AI65A和Y69A突变对酶蛋白解旋Telomere G4-16T均有较大影响。【结论】获得了高纯度的野生型BtDHX36及突变体酶蛋白,明晰了其体外最佳底物结合条件;RSM区的R63AI65A和Y69A突变均可明显降低酶蛋白解旋Telomere G4-16T的活性。     

气候变化下西北太平洋大海洋生态系海表面温度特征分析

气候变化和气候事件对海洋环境有着重大的影响,其影响存在着时空差异。研究以西北太平洋五个大型海洋生态系统(Large Marine Ecosystem,LME,包括西白令海,鄂霍茨克海,黑潮、亲潮以及日本海)的海表面温度(Sea surface temperature,SST)为研究对象,分析SST的随时空变化趋势及其与太平洋年代际振荡((Pacific Decadal Oscillation, PDO)和厄尔尼诺(El Ni?o)、拉尼娜(La Ni?a)事件的影响。研究发现,除了西白令海,其它四个大型海洋生态系统的SST都在1987年左右发生了急剧的上升,呈现出两个变化模态;将SST的长期变化趋势去除后,可以发现,五个LME的SST随着时间上下波动,并没有固定的周期性变化存在,但是与厄尔尼诺拉尼娜事件有着密切联系。水温的空间分布上看,各区域的SST都呈现由北向南逐渐增高的趋势,但是增温趋势不尽相同,在西白令海的整个区域SST都在升高,降温区域围绕在库页岛和日本的北海道附近,这其中相关机制有待后续进一步研究。     

中国农业生产资料集团公司

中国农业生产资料集团公司是中华全国供销合作总社直属的全国性集生产、流通、服务为一体的专业经营化肥、农药、农膜等农业生产资料的大型企业。中国农资集团注册资本233亿元人民币,总资产140亿元人民币,机构网络和业务覆盖全国。在沈阳、天津、上海、广州、成都、深圳、海南设有7个全资子公司,     

BAC滤池无脊椎动物滋生对饮用水安全性的影响

生物活性炭(Biological activated carbon,BAC)滤池能够为无脊椎动物提供理想的生境,但无脊椎动物可能给饮用水带来负面的健康效果和感观问题.2006年9月～2007年9月,对南方某水厂BAC滤池无脊椎动物滋生状况进行了为期13个月的调查研究,共发现无脊椎动物23种(属或类),优势类群为轮虫,其他类群还有桡足类、枝角类、寡毛类、无节幼体、线虫等.调查期间炭总管水无脊椎动物的平均密度是主臭氧后水的6.8倍.BAC滤池经过13个月的运行使用后,炭滤后水(1#和2#),炭层(1#和2#),炭总管水无脊椎动物密度分别增长了3～17倍.BAC炭层富含无脊椎动物,最高密度可达52 645个/kg.相关性分析表明:水温对无脊椎动物生长有重要影响,夏季无脊椎动物密度通常高于冬季.这些发现表明:BAC滤池存在复杂的食物网关系,及由无脊椎动物引起的饮用水安全性风险.     

不同茎长移栽及施肥方式对烤烟前期生长发育的影响

[目的]为实现烟株早生快发提供可行的技术参考。[方法]采用盆栽试验,研究高茎壮苗、常规苗移栽以及基肥底施、环施对烤烟前期生长发育的影响。[结果]高茎壮苗深栽平均萌发不定根的长度为16.1cm,与常规苗移栽的差异达极显著水平。高茎壮苗深栽+基肥底施萌发的不定根数量最多,达147根/株。相同茎长移栽的烟株鲜重均为基肥底施高于基肥环施。基肥底施比环施更有利于烤烟茎萌发不定根,并且基肥环施对烤烟茎萌发不定根的不利影响随着茎长的增加而增大。[结论]高茎壮苗深栽+基肥底施促使烟株提前形成了较多根系,提前吸收养分和水分,地下部分和地上部分生长迅速,利于实现早生快发。     

粘弹性基桩中应力波的传播特征

将基桩视为一维粘弹性杆件,同时考虑桩侧土体对基桩产生摩阻力作用的情况下,研究了位移波和应力波在不同类型的基桩中的传播特性.同时,分析了桩身驰豫时间、桩侧土的等效粘滞阻尼系数、桩底土的单位刚度等因素对应力波的影响.指出桩侧土的等效粘滞阻尼系数仅影响应力波的振幅,对其频率和相位没有影响;桩底土的单位刚度仅影响应力波的相位,对其频率和振幅没有影响;而桩身驰豫时间不仅影响应力波的振幅,而且影响其频率,随着桩身驰豫时间的增大,其频率越低.     

基于道路交通事故深层调查的大型车事故特征分析

以156起有大型车参与的事故为例.从事故量、受伤人数、死亡人数等三个方面进行了统计分析:以大型车与大型车碰撞事故(包括卡车单车事故)、大型车与乘用车碰撞事故、大型车与车外人员碰撞事故为分类,分别对三种类型的事故进行了深入的分析:同时结合法规对大型车的侧面防护装置、后下防护装置、前下防护装置以及大型车驾驶室的安全作用进行了探讨.     

淄博购机补贴拉动农机化水平提高

2007年,淄博市共争取中央、省、市农机购置补贴资金900万元,比上年增长95％以上。共补贴购置机具2374台,其中70马力以上的大型拖拉机236台。玉米联合收割机385台,免耕播种机134台。受益农户2000户,带动社会农机购置资金3600万元。     

温度荷载对大型U形预应力渡槽的

U型渡槽由于自重较轻,在施工上相对于矩形渡槽有较大的优势,因此在南水北调工程中具有较大的运用前景,而温度荷载是大型渡槽的重要荷载之一,由于其计算较为复杂,目前对大型渡槽的研究较少.采用三维有限元方法分析了重力荷载作用下的大型U形渡槽的受力特点,给出了相应的预应力钢筋布置方案,并通过瞬态有限元方法计算了夏季日照与冬季寒潮两种最不利工况下的渡槽应力值,并分析了温度荷载对大型U形预应力渡槽的影响。