小反刍兽疫疫苗毒株与强毒株的鉴别性荧光RT-PCR检测方法的建立

对GenBank已公布的小反刍兽疫病毒N基因序列进行分析,设计引物与探针,建立PPRV通用型与Ⅱ系疫苗毒特异型二重实时荧光RT-PCR方法,同时建立针对PPRVIV系强毒株的特异型荧光PCR方法。特异性试验和灵敏度试验表明：建立的二重荧光RT-PCR方法可特异性检测PPRV病毒,其HEX信号通道（通用型）和TAMRA信号通道（Ⅱ系疫苗毒特异型）的检测灵敏度分别可达10^1 TCID50/mL和10^2 TCID50／mL,完全满足PPRV的检测要求。用二重荧光RT-PCR方法对西藏采集的14份羊血清样品进行检测,并用建立的Ⅳ系强毒株特异型荧光PCR方法对二重荧光RT-PCR的检测效果进行评估,结果显示,该方法可有效甄别PPRV强毒株和疫苗毒株,避免假阳性结果的出现。     

小反刍兽疫病毒原核表达体外转录系统的建立

构建了小反刍兽疫病毒(PPRV)辅助质粒和微型复制子(minireplicon)并进行功能学研究。RT-PCR克隆PPRV疫苗株N75/1N、P和L基因,亚克隆至有T7启动子的原核表达载体pGEM3Z构建完成3个辅助质粒,分别命名为pGEM3Z-N、pGEM3Z-P和pGEM3Z-L,并通过全基因合成构建含PPRV病毒5′端启动子序列(AGP)、3′端启动子序列(GP)、T7转录终止信号、丁型肝炎病毒核酶序列HamRZ及氯霉素乙酰转移酶(CAT),获得PPRV微型复制子重组质粒pGEM3Z-CAT。构建完成的微型复制子及辅助质粒在表达T7RNA多聚酶(T7RNP)感染痘病毒VTF7-3后,通过脂质体法优化4种质粒配比,并将其转染至Vero细胞,通过间接免疫荧光分析CAT的表达情况,荧光显微镜观察到荧光的表达,并通过免疫印迹分析CAT蛋白的表达,表明构建的PPRV微型复制子具有转录和复制功能,这将有助于进一步开展以PPRV反向遗传操作为基础的免疫学及蛋白功能研究。     

各地动态

甘肃省外来动物疫病及新城疫监测与采样技术培训班在嘉峪关举行为加强外来动物疫病和新城疫防控知识宣传普及,提高甘肃省基层兽医技术人员的重大外来动物疫病防控能力,促进重大外来动物疫病监测与采样工作,提高样品质量,甘肃省动物疫控中心与中国动物卫生与流行病学中心于2012年8月27日至30日,在嘉峪关市举办了一期全省兽医技术人员非洲猪瘟、小反刍兽疫、疯牛病     

PMWS油乳剂灭活苗的制备及临床免疫效果

1材料与方法 1.1 引物 PCV2检测用引物:Uorfl:5'-AGTGAG CGG GAA AAT GCA GA-3',Lorfl:5'-TCCTCC GTG GAT TGT TCT GT-3',扩增片段417bp,由上海博亚生物技术工程有限公司合成.     

浅析小反刍兽疫的流行与防控

小反刍兽疫（Peste des petites ruminants,PPR）被世界动物卫生组织动物卫生法典列为必需报告的动物疫病,在我国被列为一类动物疫病.该病由副粘病毒科麻疹病毒属小反刍兽疫病毒（Peste des petites ruminants ruminants Virus,PPRV）引起的严重烈性、接触性传染病,易感动物为山羊、绵羊等小反刍动物,其临床特征与牛瘟及其相似,患病动物出现精神萎靡、食欲不振、随后眼鼻部出现浆性分泌物、口腔糜烂,进而引发肺炎和水样带血性腹泻等病症.发病动物的致死率可达100％,该病危害严重,损失巨大,已引起有关国家政府的高度重视.     

猪瘟的诊断

猪瘟(Swine fever,SF)在欧洲称为古典猪瘟(Classicalswine fever,CSF),是猪的一种高度传染性疾病,其特征为急性经过、高热稽留、死亡率很高和小血管壁变性引起的出血、坏死等变化。病原为猪瘟病毒(CSFV),是一种小RNA病毒,属黄病毒科(Flavivirisae)瘟疫病毒属(pestivirus)。猪瘟在世界上各养猪国家都有流行,因其传染性强、病死率高,严重威胁着养猪业的发展。由于猪瘟具有高度接触传染性和巨大的经济破坏力,OIE将其列为A类传染病。近几年来,全世界猪瘟由过去的大流行变为波浪式或无规律可循的地区散发性流行。以温和型猪瘟为主,多局限…     

猪瘟病毒E2基因主要抗原区原核表达载体的构建及表达

用RT-PCR技术对猪瘟兔化弱毒C株、石门强毒株(Shimen)、近期地方流行的属于第1群毒株的新疆毒株(XJ)和第2群代表毒株甘肃临洮(LT)株E2基因的主要抗原区进行扩增，均得到约561bp的基因片段；经克隆测序及序列分析，该基因编码187个氨基酸残基，预计蛋白分子质量为21.7ku。将这4个基因分别克隆到原核表达载体pGEX-4T-1中，经酶切、PCR扩增和测序分析确证其正确插入到表达载体中，阅读框是正确的，从而构建成重组表达载体。重组质粒转化至宿主菌BL21(DE3)中，用异丙基硫代-β-半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达，对表达的蛋白用SDSPAGE电泳、免疫印迹和薄层凝胶扫描分析。结果表明，E2基因的主要抗原区可以在大肠埃希氏菌中表达，表达的蛋白多以包涵体形式存在，表达产物的分子质量约为50．0ku，与理论推测的分子质量一致；薄层凝胶扫描分析表明。表达蛋白约占菌体蛋白总量的20．1％；免疫印迹结果证明，表达的E2蛋白可被猪瘟阳性血清所识别。     

改变共育方式 提高蚕桑经济效益

高邮市卸甲镇是蚕桑生产的老镇,栽桑养桑有悠久的历史,农民户户种桑,家家养蚕。多年来小蚕共育一直是以村或组集中建共育室,产量和经济效益一直上不去,春季张单产在37．5kg左右,秋季不足35kg。蚕桑站在本镇一平村西塘组进行联户共育试点,该组共有桑园86亩,全组28个户人家,由懂技术责任心强的村民牵头,利用自家保温性能较好房屋,自建地火龙,每3～6户组成联户共育小蚕小组,     

兔皮肤真菌病的诊断与治疗

兔皮肤真菌病是由须毛癣菌属或石膏样小孢子菌属所引起的以皮肤角质化、炎性坏死、脱毛、断毛为特征的高度传染性皮肤病。近年来,规模化养兔场数量猛增,在密集型的饲养条件下,兔一旦感染了真菌性疾病,其传染速度较快,会对养兔业危害极大。     

一步法实时定量RT-PCR检测小反刍兽疫病毒方法的建立

建立了检测小反刍兽疫病毒的快速、特异的基于Taqman的一步法实时定量RT-PCR方法。通过对GenBank已公布的小反刍兽疫病毒N基因序列进行序列比较分析,设计了一对特异性引物和一条Taqman探针。利用这对引物和探针对来自不同疫源地的小反刍兽疫病毒RNA样本进行检测,都获得了特异性扩增,但是,不与牛瘟病毒、海豚麻疹病毒等其他种的麻疹病毒属病毒发生交叉反应。本方法具有高度灵敏性,最低可检测到810拷贝的RNA模板。在模板浓度为8.1×102到8.1×108拷贝范围内,都呈现良好的线性关系,而且无论是组内和或组间重复的变异系数都很低。