家蚕核型多角体病毒酪氨酸蛋白磷酸酯酶基因核苷酸序列分析

从家蚕核型多角体病毒中国镇江株 (BmNPV ZJ)基因组DNA中克隆出酪氨酸蛋白磷酸酯酶基因 (ptp) ,该基因的编码部分由 5 0 7个核苷酸组成 ,其中A为 16 3、C为 99、G为 113、T为 132 ,G +C含量约为 4 2 %。根据其核苷酸序列推演的蛋白质由 16 8个氨基酸残基组成 ,其中含有酪氨酸蛋白磷酸酯酶催化活性区的 11个氨基酸“HC”基序。该基因与苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒 (AcMNPV)ptp和BmNPV T3株 (日本 )的ptp核苷酸序列的同源性分别为 96 8%和 98 2 %。BmNPV ZJ酪氨酸蛋白磷酸酯酶 (BmNPV ZJPTPase)的氨基酸全序列与AcMNPV、BmNPV T3、芹菜夜蛾核型多角体病毒 (AfMNPV)PTPase和黄杉毒蛾核型多角体病毒 (OpMNPV)PTPase 1的氨基酸全序列的同源性分别为 97%、97 6 %、96 %和 6 0 % ,而与OpMNPVPTPase 2的同源性仅为 2 0 %。在NCBI数据库中查找BmNPV ZJPTPase的同源性序列 ,查找到的 5 99381个序列中发现至少有 14种mRNA加帽酶其N端部分存在PTPase催化活性区的“HC”基序 ,但其氨基酸全序列的同源性只有 31%～ 32 %。该基因序列已被GenBank数据库收录 ,登录号为AF316 871     

南江黄羊LHβ基因序列测定及分析

参照GenBank中发表的奶牛、绵羊和猪LHβ基因序列设计引物，以35只南江黄羊为研究对象，利用PCR技术扩增并测定了山羊LHβ基因部分序列（GenBank登录号：AY853264），并利用GenBank中不同物种LHβ基因的部分编码区序列进行了系统发育分析。结果表明：在测定出的929bp序列中，包含LHβ基因5’侧翼区（136bp）、2个内含子全序列（分别为297bp和235bp）、第1和第2外显子全序列（分别为26bp和168bp）以及第3外显子部分序列（67bp）。除第1外显子前11bp为5’非翻译区外，其余外显子序列共编码83个氨基酸，前20个氨基酸为信号肽序列。山羊LHβ基因序列富含GC。在测定的35个个体中共检测到8个单碱基突变位点，位于外显子中的2个突变位点均为同义突变，其余6个突变位点位于5’侧翼区和内含子。系统发育分析结果与物种实际的演化顺序不完全相符，可能是由物种间LHβ基因GC含量的较大差异引起。本研究首次报道了山羊LHβ基因序列，为进一步探明山羊繁殖性能的遗传机理奠定了基础。     

魏氏梭菌α毒素核酸探针的制备和应用

根据GeneBank上发表的A型魏氏梭菌α毒素基因序列,设计合成了一对特异性引物,通过PCR的方法,扩增出了大小为470 bp的α毒素基因的部分片段。应用地高辛标记法来标记该片段,制备了α毒素基因探针,该探针只与魏氏梭菌DNA发生阳性反应,与其它多种细菌DNA不发生反应;该探针在1∶1000的工作浓度下,能检出1~5pg/uL的魏氏梭菌基因组DNA。应用该探针对33株魏氏梭菌进行核酸杂交(Dot-Blotting)检测,结果表明该探针具有良好的特异性和灵敏性,可用于对魏氏梭菌的诊断检测以及流行病学调查。     

分子生物学技术在弓形虫病诊断中应用的研究进展

综述了限制性片段长度多态性技术（RFLP）在刚地弓形虫虫株分类方面的应用情况,从PCR、DNA探针技术和基因重组技术方面介绍了用于检测弓形虫DNA的分子生物学技术的研究进展,叙述了编码弓形虫主要蛋白基因的克隆及其表达产物在ELISA诊断中的应用。     

real-time PCR将成为分子生物学研究的重要检测技术

近年来,real-tim e PCR技术作为一种敏感、快速、简便、重复性好的检测技术已广泛出现在生物学研究领域。real-tim e polym erase chain reaction(RT-PCR)是Kary M ullis在二十世纪八十年代在PCR的基础上发展革新的一项新技术,它能使小量DN A片段扩增一百万倍。这项技术推动了分子生物学技术的发展,简便的操作不仅可应用于普通实验,还可用于人类基因组工程。根据2003年调查的406位科学工作者,48%的研究人员近年来正在使用这项技术。随着使用这项技术的人数增多,各类相关的论文也相继增多。real-tim e PCR将会影响PCR技术的发展,并…     

不同海拔地区牦牛血浆和组织中乳酸脱氢酶的比较

乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LDH）是与组织能量代谢过程密切相关的酶，目前已成为研究动物发生过程中基因表达与调控分析的良好模型。其活性的大小与组织细胞内氧分压的高低密切相关。在有氧条件下，LDH将乳酸转化成丙酮酸，进而促进整个机体的代谢过程；在无氧条件下，LDH催化丙酮酸还原成乳酸，从而完成葡萄糖的无氧酵解过程；同时在其过程中释放少量ATP分子，为缺氧情况下的机体生命活力提供一定的能量。Kaplan认为LDH还能调节烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADH）的比率，因而对细胞内的一系列生化反应起调节控制作用。牦牛世代生活在高原环境，对低氧、寒冷、强紫外线等恶劣环境有强大的适应能力，本文通过测定牦牛的血浆和组织LDH活性，进一步探讨高原牦牛适应高寒，缺氧环境的生理机制。     

鸡致病性大肠杆菌1型菌毛fimI基因克隆与序列测定

对鸡O2血清型致病性大肠杆菌1型菌毛fimI基因进行了扩增并与国外同源菌株基因序列进行了比较。结果表明：两者核苷酸同源性达98．42％，预测氨基酸顺序同源性达98．92％。fimI基因的预测氨基酸序列中仅第46位氨基酸由ALA变为THR，第76位氨基酸由SER变为ALA，其余核苷酸的变化未影响氨基酸的翻译，推测，这种改变是由分离株的差异所引起的。     

番茄细菌性溃疡病菌的实时荧光PCR检测

 由Clavibacter michiganensis subsp.michiganensis(Cmm)引起的番茄细菌性溃疡病是一种严重危害番茄生产的种传细菌性病害。根据ITS序列多态性设计引物及TaqMan探针进行实时荧光PCR检测的结果表明,这组引物一探针能检测出所有供试的Cmm菌,对照菌均未检测到荧光信号。用接种但未显示症状的番茄苗叶片及人工处理的带菌种子提取的核酸作为模板,均能检测到病菌,其检测灵敏度比常规PCR高约100倍。实验中不需病原菌的分离培养及PCR的后续处理。该方法快速、简便、安全、准确,适用于出入境检验检疫及种子、种苗健康检测领域。