青海牦牛源贾第虫的鉴定及分子特征分析

从青海省祁连县采集93份牦牛粪样用于贾第虫检测。所有样品经蔗糖密度梯度离心法纯化处理后,采用卢戈氏碘液染色镜检和免疫荧光试验进行检测,将镜检阳性样品采用套式PCR方法扩增18S rRNA,并对扩增产物进行测序分析。结果镜检和免疫荧光试验中有9份样品为贾第虫阳性,阳性率为9.7%。镜检阳性样品采用套式PCR方法扩增后有8份样品为18SrRNA基因阳性,产物长度292bp,测序后的序列分别命名为QHQL201501~QHQL201508。系统发育分析显示,分离的虫株属于牛源十二指肠贾第虫,基因型均为反刍动物特有的聚集体E,未发现具有人兽共患潜力的A型和B型。     

鸡白痢沙门菌套式PCR检测方法的建立及初步应用

为了建立一种快速、高效和简便的鸡白痢沙门菌套式PCR检测方法,根据沙门菌侵袭蛋白基因invA的高度保守区域,利用Primmer 5.0软件设计2对特异性的套式引物,以提取的沙门菌DNA为模板克隆invA基因,将其连入T载体并计算拷贝数作为套式PCR的模板,在对反应条件进行优化的基础上,建立最佳的套式PCR反应条件,确定其上、下游引物用量分别为0.3μL,套式PCR的第1次退火温度为57.4℃,第2次为53.5℃。应用该方法对已构建好的不同浓度的标准阳性质粒作为模板进行检测,其灵敏度为102拷贝数/20μL,远高于常规PCR的106拷贝数/20μL。用建立的套式PCR方法对从新疆石河子某鸡场采集的25样品进行检测,与传统的诊断方法比较符合率达95.00%。建立的鸡白痢沙门菌套式PCR检测方法具有快速、可行、特异性强、准确率高等特点,为鸡沙门菌病的早期诊断和研究提供了技术支撑。     

套式反转录—聚合酶链反应检测恙螨及鼠肺内肾综合征出血热病毒RNA

选择覆盖肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）膜蛋白（ＭＰ）基因的保守区核苷酸序列合成２对引物,采用异硫氰酸胍一步抽提ＲＮＡ,建立了ＲＴ－ＰＣＲ检测鼠体恙螨及游离恙螨体内ＨＦＲＳＶ－ＲＮＡ的方法,扩增产物经凝胶电泳及斑点印迹杂交证实具有特异性。结果显示,ＨＦＲＳＶ抗原阳性鼠体恙螨５０只组、１０只组、游离螨５０只组,ＨＦＲＳＶ抗原阳性鼠肺１０００ｍｇ、５００ｍｇ组经ＲＴ－ＰＣＲ检测为阳性;ＨＦＲＳＶ抗原阳性鼠体恙螨５只组,ＨＦＲＳＶ抗原阴性鼠体恙螨５０只和１０只组,游离螨１０只和５只组,鼠肺ＨＦＲＳＶ抗原阳性１００ｍｇ组均未见有明显扩增带。进一步用套式反转录－聚合酶链反应（ＮｅｓｔｅｄＲＴ－ＰＣＲ）检测,在ＲＴ－ＰＣＲ未测出ＨＦＲＳＶ－ＲＮＡ的各组中均检测有ＨＦＲＳＶ－ＲＮＡ。结果表明ＮｅｓｔｅｄＲＴ－ＰＣＲ具有高特异、高敏感的特点,可用于检测恙螨体内微量ＨＦＲＳＶ－ＲＮＡ,为确认恙螨作为ＨＦＲＳＶ的传播媒介提供了分子生物学证据。     

马属动物cyclinT1基因的扩增与真核表达载体的构建

在幔病毒复制过程中cyclinT1(CycT1)是重要的辅助因子.为了揭示慢病毒的复制机理,试验使用RT-PCR方法扩增马和驴的cyclinT1基因,并进行克隆和序列分析,然后用DNASTAR(MegAlign)软件将测得的序列和国外发表的马属动物CycT1序列(GenBank中登录号为AF137509和AF190905)进行同源性比较.结果表明:马属动物CycT1大小为2 184 bp,编码727个氨基酸;4种CycT1基因氨基酸同源性在98%以上;将扩增出的马CycT1基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,经酶切及测序鉴定证实成功构建了pcDNA3.1(+)/eCycT1重组质粒.     

B亚型禽偏肺病毒逆转录套式PCR检测方法的建立与应用

根据GenBank发布的B亚型禽偏肺病毒Fusion(F)基因的保守序列设计2对引物,建立了一种适用于B亚型禽偏肺病毒的逆转录套式PCR检测方法.采用该方法对B亚型禽偏肺病毒山东分离株进行检测,可以特异性地扩增出415 bp的目的片段.此方法具有高度特异性和敏感性,以H9亚型禽流感病毒、新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、传染性喉气管炎病毒作为模板进行扩增,结果均为阴性.经检测,该方法第1次PCR扩增的敏感性为102 copies/μL,第2次扩增的敏感性为102 copies/μL,第2次扩增敏感性比第1次高105倍.应用本方法对采自山东省不同地区的64份可疑临床病料进行检测,最终从64份疑似病料中检测出37份为阳性.结果表明,所建立的套式PCR检测方法具有特异、敏感、实用等优点,为B亚型禽偏肺病毒的快速诊断以及深入研究奠定了基础.     

短周期桉树人工林养分的输入输出

[目的]桉树作为一种短轮伐期速生树种在我国广西等南方地区被广泛种植,单一树种连栽经营模式对林地土壤肥力质量产生重大影响,为探究当前短周期高强度连栽桉树人工林炼山经营模式是否可持续,拟对多代连栽桉树人工林的养分输入、输出特征进行研究.[方法]在4种不同代次的桉树人工林设置36个标准地,以胸径为自变量建立回归方程估算桉树人...     

不同栽植代数杉木人工林土壤磷素特征研究

目的 研究不同栽植代数杉木林土壤磷素变化规律和形态特征,确定影响杉木林土壤磷素有效性的因素,为提高连栽杉木对磷素的利用效率和我国杉木林的可持续经营提供理论依据。 方法 对土壤全磷、有效磷、不同形态无机磷含量进行测定,利用31P核磁共振技术（31P-NMR）和扫描电镜-X-射线能谱（SEM-EDS）、傅里叶红外光谱（FTIR）、X射线衍射（XRD）技术对土壤磷素形态特征和土壤结构及矿物组成进行分析。 结果 31P-NMR图谱表明：连栽导致杉木林土壤正磷酸盐含量下降,正磷酸单酯含量增加。土壤全磷（TP）、有效磷（AP）、磷酸钙盐（Ca-P）含量随杉木林栽植代数的增加而减少,闭蓄态磷（O-P）含量则相反;O-P含量在各形态无机磷中占比最大,磷酸铝盐（Al-P）含量占比最小。SEM-EDS分析发现：不同栽植代数杉木林土壤胶体颗粒呈片状堆叠;FTIR图谱显示：其表面官能团结构的差异较小;XRD分析表明：高岭石和石英的衍射峰强度随栽植代数的增加而减弱。 结论 不同栽植代数杉木林土壤形态主要以正磷酸盐和正磷酸单酯为主。连栽土壤中全磷、有效磷、磷酸铝盐、磷酸铁盐（Fe-P）向土壤表层聚集分布,土壤中正磷酸盐（无机磷）含量随杉木林栽植代数的增加而减少,土壤Al-P含量较少及有效磷、Ca-P、Fe-P向极难溶的O-P转化是导致连栽杉木林土壤有效磷含量低的重要因素。连栽可增大土壤熟化程度、降低土壤矿物质结晶程度。     

水套炉低效运行原因与提效措施

针对胜利油田在用水套炉存在热效率低、过量空气系数大、负荷率低的问题,采用水套加热炉校核及调风计算程序,计算了负荷率、过量空气系数、污垢热阻与水套炉热效率的关系,反算了当前运行水套炉的污垢热阻。分析发现:负荷降低,散热损失增加、排烟热损失降低,两项总热损失变化不大,水套炉热效率受负荷率影响很小;过量空气系数增加,排烟温度随之增加,两因素共同作用,导致水套炉热效率快速降低;在运水套炉污垢热阻明显偏大,致使水套炉排烟温度、水浴温度明显高于理论计算值,导致水套炉热效率低下。提出水套炉提效的关键措施:及时清洗污垢、定期更换炉水、加装烟气分析仪、更换自动调节燃烧器。(图6,表2,参18)     

盆景造型蓄枝截干法

作盆景用的植株移植后经过1年生长，整姿造型的工作就可以开展。中景和小景的整姿造型工作一般在地栽期基本完成，但大景在地栽时由于株型太大，难以控制其生长，地栽时一般仅留一、二托，等上盆后再继续造型工作。九里香等南方特色的盆景桩材，整姿造型多采用岭南派盆景造型的独特技法——蓄枝截干法。     

桉树不屑袋栽毛木耳技术

桉树是著名的速生树种，我省已大面积种植，但因种种误解及没有合理引导，直到现在桉树仍被许多人视为食用菌禁用树种。据本人试验和推广证明，桉树木屑是很有发展前景的毛木耳生产原料，可以为缓解菌林矛盾，实现食用菌产业可持续发展开辟一条有效途径。现将桉树木屑袋栽毛木耳技术总结如下。