猪粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子cDNA的克隆与序列分析

根据GenBank中猪粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(porcine granulocyte-macrophage colony-stimulating factor，GM-CSF)cDNA序列，设计1对引物。应用RT-PCR，分别从经过植物血凝素-P(PHA-P)或刀豆蛋白A(ConA)诱导的猪外周血单核细胞总RNA中扩增得到了猪GM-CSF cDNA，将其与pGEM-T Easy载体连接，经转化、筛选阳性克隆，进行了核酸序列测定。对核苷酸序列和推导的氨基酸序列分析表明，猪GM-CSF前体蛋白编码区由435bp组成，编码144个氨基酸，其中N端信号肽有18个氨基酸。在第44、47和54位氨基酸处有3个糖基化位点。与人、牛、羊、小鼠的GM-CSF核苷酸序列的相似性分别为82％、85％、88％和86％，氨基酸序列相似性分别为72％、73％、73％和57％。与人、牛、羊GM-CSF的亲水性和疏水性氨基酸的分布保守性很高，而与小鼠的差异较大。     

胸膜肺炎放线杆菌菌影疫苗免疫仔猪前后差异表达基因的鉴定与分析

为获得胸膜肺炎放线杆菌(APP)菌影诱导的仔猪淋巴细胞差异表达基因,本研究应用代表性差异分析技术构建APP菌影免疫前后正、反两个外周血淋巴细胞cDNA差减文库,并对文库中的差异基因进行克隆、测序和生物信息学分析.试验结果表明,正向文库中获得11个表达丰度上调的基因,其中7个基因与已知基因具有相似性,4个为未知新基因,经进一步功能注解发现,正向文库功能基因包括免疫信号传导相关蛋白RhoE、防御相关蛋白糖基转移样酶-1、上皮膜蛋白2、白介素-17和肿瘤免疫相关的周期素依赖性蛋白激酶抑制因子3等,这些功能基因表达丰度升高,可能有助于机体建立抗APP的免疫应答.     

Effect of Metallothionein on Cell Cycle,Apoptosis Rate and Subsets Distribution of Lymphocytes in Peripheral Blood of Dairy Cattle under Heat Stress

[Objective] This study aimed to research the effect of metallothionein on cell cycle, apoptosis rate and subsets distribution of lymphocytes in peripheral blood of dairy cows under heat stress, so as to perfect the regulative mechanism re- searches of MT to anti-heat stress. [Method] Twenty lactating Chinese Holstein cows were randomly divided into four groups （A, B, C and D）, and injected with 0, 4.0, 8.0 and 12.0 mg Zn-metallothionein, respectively by intravenous route. Blood sam- ples were collected at 1＂, 16~, 31~, 46~ and 61~ day, and the dynamic changes of cell cycle, apoptosis rate and subsets distribution of lymphocytes were determined. [Result] The apoptosis rate of cells in group B and C was lower than those in group A by 26.63% （P〉0.05） and 24.84% （P〉0.05） respectively. The number of cells in the Gc/G1 phage in trial groups was increased and the number of cells in the S and GJM phages tended to decrease, but there were no significant differences （P〉 0.05）. The number of CD3~ T cell in three trial groups was greater than those in group A by 7.02% （P〉0.05）, 5.45% （P〉0.05） and 3.85% （P〉0.05） respectively, while the number of CD4~ T cell in trial groups was higher than those in control group by 31.04% （P〈0.05）, 35.68% （P〈0.05） and 39.34% （P〈0.05） respectively. The number of CD8＇ T cell and the levels of CD4＊/CD8~ in trial groups were increased observ- ably, but significant difference （P〈0.05） was observed in the levels of CD4~/CD8~ between groups A and C only. It demonstrated that exogenous Zn-metallothionein can decrease apoptosis rate, improve cell cycle and regulate subsets distribution of lymphocytes in dairy cattle in a dose-dependent manner. [Conclusion] This study will provide scientific basis for safe utilization of MT in dairy industry.     

葡萄原花青素活性组分的分离及其对肉仔鸡外周血淋巴细胞增殖的影响

本试验通过分离葡萄原花青素（grape procyandins,GPC）混合物的不同组分,研究其对肉仔鸡外周血淋巴细胞（PBLs）增殖的影响,为筛选GPC功能组分提供依据和方法借鉴。首先选取0、0.24、1.2、6.0、30、150 μg/mL 6个终浓度的GPC混合物,确定混合物对肉仔鸡PBLs增殖效果最佳的浓度;然后通过反相高效液相色谱（RT-HPLC）实时分馏,得到GPC最佳浓度时的不同组分;选取GPC最佳浓度的不同组分,研究其对肉仔鸡PBLs增殖效果的最佳组分。结果显示,对肉仔鸡PBLs增殖效果最佳的GPC浓度为30 μg/mL,最佳组分为16～25 min馏出组分。     

氯化镍对小鼠的毒理作用

目的研究氯化镍的潜在致突变性.方法 60只NIH同体重小鼠体重随即分为3个大组,每大组由5个小组构成,每组实验动物为只小鼠,设纯净水试验组为阴性对照组、环磷酰胺(cyclophosphamide,CP)阳性对照组(剂量为40.0mg/kg)和NiCl2.6H2O染毒组(剂量分别为5.0、10.0、20.0 mg/kg),分两次腹腔注射染毒,间隔24h,每次按0.1 ml/10 g体重腹腔注射.采用小鼠骨髓细胞微核试验、小鼠骨髓细胞染色体畸变试验、小鼠精子畸形试验、外周血细胞微核实验,来研究氯化镍对小鼠的毒理作用.结果该研究下未观察到有明显的诱导小鼠外周血网织红细胞微核形成作用,但有明显的染色体畸变和精子致畸形作用.结论氯化镍对哺乳动物遗传物质有潜在的致突变作用.     

我国首次克隆到水貂α干扰素基因亚型

中国农业科学院特产研究所野生动物人兽共患病研究室应用RT-PCR方法从体外诱导的水貂外周血淋巴细胞中扩增出水貂的α干扰素13种基因（MiIFN-α）亚型。13种基因亚型基因序列全长均为564bp,编码187个氨基酸。亚型间核苷酸同源性为93．8％-99．3％,氨基酸同源性为88．3％-97．9％。GenBank登录号分别为：IFN-α1（EU863613）、IFN-α2（EU863614）、IFN-α3（EU863615）、IFN-α4（EU863616）、     

哺乳仔猪外周血5-羟色胺的合成与代谢研究

[目的]探讨哺乳仔猪外周血5-羟色胺的合成与代谢随日龄变化的规律。[方法]选用15只0、5和15日龄的英系大白猪为试验动物,采用反相高效液相色谱——紫外检测法对其外周血血清中L-Trp、5-HT和5-HIAA的含量进行测定。[结果]仔猪初生时L-Trp的含量为（16.92±1.74）μmol/L,5日龄时为（59.94±10.88）μmol/L,15日龄时为（70.42±6.48）μmol/L;仔猪初生时5-HT的含量为（12.85±1.79）μmol/L,5日龄时为（4.81±2.05）μmol/L,15日龄时为（5.49±1.09）μmol/L;代谢产物5-HIAA在各日龄仔猪血清中均未检出。[结论]随日龄增加,哺乳仔猪外周血L-Trp的含量显著增加（P〈0.05）,而5-HT的含量与L-Trp-5-HT通路转化率在初生时最高（P〈0.05）,此后趋于稳定（P〉0.05）。     

羔羊外周血单个核细胞转化MTT比色法最佳检测条件的筛选

为了建立羔羊外周血单个核细胞转化检测的MTT比色法,对影响MTT比色法的3个主要因素(包括刺激原、细胞浓度、培养时间)进行了探索性的研究.结果表明,MTT法检测的最佳条件为:植物血凝素(PHA)浓度为10 pg/mL,细胞密度为1×107个/mL;或者刀豆蛋白A(ConA)浓度为40μg/mL,细胞密度为2×107个/...     

J亚群禽白血病骨髓组织与外周血病理学研究

用已分离鉴定的 J 亚群禽白血病病毒内蒙株IMC10200回归实验肉鸡胚,结合自然发病病例禽骨髓组织结构、细胞形态、分布,对实验感染发病鸡的骨髓内嗜酸中、晚幼粒细胞的病理发生、增殖及数量变化进行了分析研究。结果显示,自然发病病例和实验感染IMC10200的肉鸡,其骨髓组织各系细胞数量均有所变化,尤其是嗜酸中、晚幼粒细胞数量明显增多,转化为瘤细胞,使骨髓组织结构发生改变。同时对外周血细胞的观察结果表明,在典型骨髓细胞白血病病鸡血液中可以见到上述幼稚的髓细胞,提示这些瘤细胞是在骨髓组织中异常增殖后进入血液,再向体内其他组织转移形成肿瘤。     

猪瘟脾淋苗免疫仔猪9 d外周血细胞转录谱分析

目的：分析猪瘟脾淋苗免疫仔猪9 d的外周血细胞转录组数据,完善猪瘟脾淋苗免疫机理研究。方法：采集免疫猪瘟脾淋苗9 d小猪（5头）的外周血细胞进行转录组测序分析,并以脾淋组织免疫为对照（5头）。结果：猪瘟脾淋苗组与脾淋组织对照组相比,差异表达的基因（Differentially Expressed Genes,DEGs）有17 382个,显著差异的DEGs有605个（P<0.05）,其中上调的有294个,下调的有311个;将DEGs进行基因本体论（Gene Ontology,GO）功能富集分析,发现免疫后9 d,富集的条目有1 044个,与生物过程相关的有749个,其中酰胺生物合成过程、细胞酰胺代谢过程、翻译等23个过程显著富集（Q<0.05）;与细胞组分相关的有145个,其中胞质核糖体、核糖体亚基、核糖体等15个组分显著富集（Q<0.05）;与分子功能相关的有150个,核糖体结构成分、结构分子活性、RNA结合3个功能显著富集（Q<0.05）;DEGs在京都基因与基因组数据库（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG...